透明質(zhì)酸受體陽(yáng)性精子質(zhì)量特性及對(duì)IVF-ET結(jié)局影響及預(yù)測(cè)的研究

楊旭輝，吳遠(yuǎn)菲，梁嘉穎，陳柳青

（廣東省婦幼保健院生殖健康與不孕癥科，廣東廣州510080）

透明質(zhì)酸(hyaluronic acid,HA)是一種長(zhǎng)鏈的多糖結(jié)構(gòu), 主要分布在肺、腎及生殖系統(tǒng)的疏松結(jié)締組織，與透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(hyalur onic acid binding protein,HABP)特異性結(jié)合后與細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合發(fā)揮作用，提高細(xì)胞外結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。其對(duì)卵母細(xì)胞、精子生理活動(dòng)及受精過(guò)程也發(fā)揮重要的作用。HA 主要以受體HABP-配體的方式與人、兔、牛精子結(jié)合,促進(jìn)精子獲能、精子活力、受精能力及頂體反應(yīng)。嚙齒類、牛及人成熟后期的精子表面已發(fā)現(xiàn)透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白，而且至少2 個(gè)特異的能與透明質(zhì)酸結(jié)合的蛋白位點(diǎn)，使精子能夠與卵細(xì)胞透明帶結(jié)合，從而實(shí)現(xiàn)穿透與受精[1-4]。不成熟的精子頭部缺乏HA 受體,不具備與HA 結(jié)合的能力。Gabor 等[5]證明能與HA 結(jié)合的精子成熟度高,已完成質(zhì)膜重構(gòu)、胞質(zhì)膨出、核組蛋白與魚精蛋白的置換等一系列過(guò)程,形成膜外HA 結(jié)合位點(diǎn);若成熟過(guò)程障礙則可導(dǎo)致精子頭部HA 結(jié)合位點(diǎn)的缺失[6],影響精卵識(shí)別而導(dǎo)致受精障礙。由此可見(jiàn)HA 精子代表一群成熟度高、各項(xiàng)功能完備的精子群。王金香等[7]研究顯示,精子-透明質(zhì)酸結(jié)合率＜65%時(shí),總受精率和正常受精率均顯著降低, 建議即使精液常規(guī)參數(shù)正常, 也應(yīng)謹(jǐn)慎選擇體外受精(IVF)。Ye 等[8]研究表明, 精子-透明質(zhì)酸結(jié)合率與精子的前向運(yùn)動(dòng)率和正常形態(tài)率高度相關(guān), 可進(jìn)一步反映精液質(zhì)量。牟萬(wàn)宏等[9]證實(shí)，精子-透明質(zhì)酸結(jié)合率≥65%的原因不明性不孕患者的人工授精周期妊娠率高于精子-透明質(zhì)酸結(jié)合率＜65%的患者，提示使用與HA 結(jié)合的精子實(shí)施人工授精能獲得更好的結(jié)局。

精子-透明質(zhì)酸結(jié)合試驗(yàn)(hyaluronan binding assay,HBA)作為一種簡(jiǎn)便易行的評(píng)估活動(dòng)精子成熟度的功能檢測(cè)方法,但其獨(dú)立或聯(lián)合其他指標(biāo)對(duì)于受精能力、胚胎發(fā)育潛能及流產(chǎn)的預(yù)測(cè)卻仍存在爭(zhēng)議。本研究通過(guò)比較HBA 正常組和HBA 異常組間的精液各項(xiàng)參數(shù)以及受精、胚胎發(fā)育及妊娠結(jié)局,探尋HBA 獨(dú)立或聯(lián)合其他指標(biāo)對(duì)IVF 受精、胚胎發(fā)育及結(jié)局的預(yù)測(cè)價(jià)值,從而更好地指導(dǎo)臨床。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器

WLJY-9000型計(jì)算機(jī)輔助精子質(zhì)量分析儀(CASA)購(gòu)自北京偉力；HBA、DNA 碎片檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自深圳市博銳德生物科技有限公司；精子形態(tài)diff-quick 快速染色試劑購(gòu)自廣州展成生物科技有限公司。

1.2 標(biāo)本來(lái)源及分組

2017 年1 月-12 月在廣東省婦幼保健院生殖中心取卵行IVF-ET 的患者，納入標(biāo)準(zhǔn)：①排除卵子未成熟或異常導(dǎo)致的受精失敗；②排除女方卵巢低反應(yīng);③精液常規(guī)檢查示前向運(yùn)動(dòng)(progressive motility,PR)精子總數(shù)≥15×106,正常形態(tài)率＞1%。依照WHO技術(shù)規(guī)范采集、處理和檢測(cè)精液標(biāo)本。完全液化后分別檢測(cè)常規(guī)精液參數(shù)、DNA 碎片、形態(tài)和以固相HA 法檢測(cè)透明質(zhì)酸結(jié)合率。按照透明質(zhì)酸臨界值58%將患者分為A 組(＜58%)和B 組(≥58%)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),且患者知情同意。

1.3 研究方法

1.3.1 HBA、精液常規(guī)、正常精子形態(tài)率、DNA 碎片率分析 115 份新鮮精液標(biāo)本，以CASA 檢測(cè)精液常規(guī)，HBA（精子-透明質(zhì)酸結(jié)合率）按試劑盒說(shuō)明書檢測(cè)，在包被有透明質(zhì)酸的載玻片上加入液化的精液10 μL，蓋上蓋玻片，20～30 ℃條件下反應(yīng)10 min，顯微鏡20×10 觀察并計(jì)數(shù)500 條活動(dòng)精子，記錄精子尾部持續(xù)鞭打但頭部被結(jié)合至玻片表面活動(dòng)受限(與透明質(zhì)酸結(jié)合)的精子數(shù)量，計(jì)算HBA 率。HBA(%)=100%×與透明質(zhì)酸結(jié)合精子數(shù)/計(jì)數(shù)的活動(dòng)精子總數(shù),分析HBA 結(jié)果與精子密度的相關(guān)性；以Diff-Quik 染色法染色，按照WHO 形態(tài)學(xué)判斷標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)精子正常形態(tài)率。精子核染色質(zhì)擴(kuò)散法檢測(cè)每份標(biāo)本的精子DNA 碎片水平:將含10×106/mL精子的易熔凝膠覆蓋在包被有固態(tài)凝膠的載玻片上，經(jīng)變性、脫核、脫水、染色處理后，顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)500 條精子，計(jì)算存在DNA 碎片的精子百分率。精子DNA 碎片率(%)=100%×存在DNA 碎片精子數(shù)/計(jì)數(shù)的精子總數(shù)。

1.3.2 IVF-ET 過(guò)程GnRH-a 長(zhǎng)方案和拮抗劑方案GnRH-a 長(zhǎng)方案：黃體中期，皮下注射促性腺激素釋放激素激動(dòng)劑醋酸曲普瑞林（達(dá)菲林）1.25 mg 行垂體降調(diào)節(jié)，約14 d 左右達(dá)到降調(diào)標(biāo)準(zhǔn)后[內(nèi)膜厚度＜5 mm、E2＜50 pg/mL，F(xiàn)SH(卵泡刺激素）和LH均＜5 U/L]，根據(jù)患者年齡、AFC（竇卵泡數(shù)）、bFSH 和黃體生成素(LH)值決定肌注果納芬/麗申寶/HMG 的起始劑量，根據(jù)卵泡生長(zhǎng)情況及E2+孕酮+LH 水平調(diào)整用藥。當(dāng)卵泡直徑≥18 mm時(shí)，當(dāng)晚肌注人絨毛膜促性腺激素HCG4 000～10 000 IU，34～36 h后取卵。精卵共孵育16～18 h，觀察受精情況(僅2PN 是正常受精)，正常受精率=正常受精卵子數(shù)/體外受精的總卵子數(shù)，受精率=總受精卵子數(shù)/體外受精的總卵子數(shù)。再次培養(yǎng)48 h 后，觀察胚胎細(xì)胞數(shù)及碎片比例并評(píng)估胚胎質(zhì)量，選取優(yōu)質(zhì)胚胎在B超引導(dǎo)下進(jìn)行移植。優(yōu)質(zhì)胚胎率=大于等于6 細(xì)胞優(yōu)質(zhì)胚胎個(gè)數(shù)/正常受精卵源的胚胎總數(shù)，可用胚胎率=大于4細(xì)胞胚胎個(gè)數(shù)/正常受精卵源的胚胎總數(shù)。拮抗劑方案：月經(jīng)第2～3 天測(cè)量性激素并評(píng)估卵巢基礎(chǔ)狀態(tài)，進(jìn)周促排。促排期間，監(jiān)測(cè)陰道B 超及性激素。在卵泡直徑增長(zhǎng)至12 mm 以上時(shí)，加用GnRH 拮抗劑。待卵泡直徑大于18 mm 時(shí)予以絨促性素扳機(jī)，夜針后36 h取卵。

1.3.3 血清激素測(cè)定 月經(jīng)周期第2～4 天抽取空腹外周靜脈血3～4 mL 平衡至室溫后3 000 r/min 分離血清，電化學(xué)發(fā)光法測(cè)定FSH、LH和E2。

1.3.4 AFC 計(jì)數(shù) 月經(jīng)周期第2～4 天二維超聲觀察雙側(cè)卵巢位置、形態(tài)，記錄直徑為1～5 mm 的AFC 數(shù)(重復(fù)測(cè)量2～3次)。

1.3.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0 統(tǒng)計(jì)軟件。各組計(jì)量資料先行正態(tài)分布檢驗(yàn)，組間計(jì)量資料比較采用非參數(shù)Mann-Whitney 檢驗(yàn)(非正態(tài))；相關(guān)性分析采用spearman(非正態(tài))分析；利用ROC 曲線及二分類logistic回歸分析評(píng)價(jià)各指標(biāo)的預(yù)測(cè)價(jià)值。

2 結(jié)果

2.1 精液常規(guī)、正常形態(tài)率、精子DNA 碎片率和透明質(zhì)酸結(jié)合率等相關(guān)參數(shù)的正態(tài)分布檢驗(yàn)

用SPSS16.0 軟件分別對(duì)各組年齡、FSH、AMH（苗勒氏激素）、AFC 計(jì)數(shù)資料進(jìn)行正態(tài)分布檢驗(yàn)，顯示大部分為非正態(tài)分布。

2.2 HBA 與精子密度、正常形態(tài)率和DNA 碎片率的關(guān)系

分別比較兩組精子常規(guī)、正常形態(tài)率和DNA 碎片率。結(jié)果顯示，兩組精子密度、DNA 碎片率和正常形態(tài)率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-0.741，P=0.459；Z=-0.306，P=0.760；Z=-0.589，P=0.556），見(jiàn)表1。分別對(duì)HBA、精子密度、正常形態(tài)率和DNA碎片率進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)僅碎片與透明質(zhì)酸結(jié)合率負(fù)相關(guān)（r=-0.198，P=0.034），密度與正常形態(tài)率顯著正相關(guān)（r=0.394，P=0.000）。

2.3 IVF-ET女方的基本情況

共納入正常受精的IVF組115例,兩組男方和女方的年齡、不孕年限、BMI、移植胚胎數(shù)等比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見(jiàn)表2。

2.4 受精及胚胎情況

共納入正常受精的IVF組115例,兩組受精率和正常受精率、卵裂率、正常卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率和可利用胚胎率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）(表3)。針對(duì)透明質(zhì)酸和受精及胚胎發(fā)育進(jìn)行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)與正常受精率正相關(guān)（r=0.204，P=0.029）

表1 兩組精子密度、正常形態(tài)率和DNA碎片率的比較Table 1 Levels of the sperm density,normal morphology rate and DNA fragmentation rate between two groups

表2 IVF-ET患者基本情況Table 2 Basic situation of patients in IVF-ET

表3 IVF-ET患者受精及胚胎發(fā)育情況比較Table 3 Fertilization and embryo development of patients in IVF-ET between two groups

2.5 與妊娠結(jié)局的相關(guān)性分析

HBA、DNA 碎片、正常形態(tài)率、密度和男方年齡預(yù)測(cè)臨床妊娠的ROC 曲線下面積AUC1、AUC2、AUC3、AUC4、AUC5分別為0.512、0.435、0.494、0.488、0.335。僅透明質(zhì)酸結(jié)合實(shí)驗(yàn)AUC大于機(jī)會(huì)參考線下面積(P＜0.05)，但是預(yù)測(cè)效果并不顯著（圖1），經(jīng)過(guò)logistic 回歸分析，求得HBA、DNA 碎片和男方年齡的log(P)值，log(P)=4.000-0.099×男方年齡-0.001×透明質(zhì)酸-0.001×DNA 碎片。針對(duì)該值進(jìn)行早期流產(chǎn)的聯(lián)合預(yù)測(cè)，求得ROC 曲線下面積為0.661，預(yù)測(cè)價(jià)值較為顯著，其中l(wèi)og(P)的預(yù)測(cè)臨界值0.485 4，靈敏度83.1%，特異度54.0%，見(jiàn)圖2。

2.6 早期流產(chǎn)的預(yù)測(cè)

HBA、DNA碎片、正常形態(tài)率、密度、男方年齡預(yù)測(cè)早期流產(chǎn)的ROC 曲線下面積AUC1、AUC2、AUC3、AUC4、AUC5分 別 為0.482、0.580、0.592，0.610、0.725。除了透明質(zhì)酸各指標(biāo)的AUC均大于機(jī)會(huì)參考線下面積(P＜0.05)，但是預(yù)測(cè)效果并不顯著，見(jiàn)圖3。經(jīng)過(guò)logistic 回歸分析，求得HBA、DNA 碎片和男方年齡的log(P)值，log(P)=-7.011+0.134×男方年齡+0.008×透明質(zhì)酸+0.022×DNA 碎片。針對(duì)該值做早期流產(chǎn)的聯(lián)合預(yù)測(cè)，求得ROC 曲線下面積為0.730，預(yù)測(cè)價(jià)值較為顯著，其中l(wèi)og(P)的預(yù)測(cè)臨界值0.294 9，靈敏度66.7%，特異度24.5%。

圖1 透明質(zhì)酸結(jié)合實(shí)驗(yàn)，DNA 碎片率、正常形態(tài)率、密度和男方年齡預(yù)測(cè)臨床妊娠的ROC曲線分析Figure 1 ROC curves of HBA,DNA fragmentation rate,normal morphology rate, density and male age in predicting clinical pregnant rate in IVF-ET

圖2 HBA、DNA 碎片率和男方年齡聯(lián)合預(yù)測(cè)臨床妊娠的ROC曲線分析Figure 2 ROC curves of HBA and DNA fragmentation rate combined with male age in predicting clinical pregnant rate in IVF-ET

圖3 透明質(zhì)酸結(jié)合實(shí)驗(yàn)，DNA 碎片率、正常形態(tài)率、密度和男方年齡預(yù)測(cè)臨床早期流產(chǎn)的ROC曲線分析Figure 3 ROC curves of HBA, DNA fragmentation rate, normal morphology rate, density and male age in predicting clinical early abortion rate in IVF-ET

圖4 透明質(zhì)酸結(jié)合實(shí)驗(yàn)，DNA 碎片率和男方年齡聯(lián)合預(yù)測(cè)臨床早期流產(chǎn)的ROC曲線分析Figure 4 ROC curves of HBA, DNA fragmentation rate combined with male age in predicting clinical early abortion rate in IVF-ET

3 討論

輔助生殖技術(shù)的發(fā)展，對(duì)配子的功能檢測(cè)要求越來(lái)越高，傳統(tǒng)的檢測(cè)方法如常規(guī)、形態(tài)、抗精子抗體等準(zhǔn)確反映精子受精能力有限，精子受精功能相關(guān)檢測(cè)相當(dāng)復(fù)雜，受限于實(shí)驗(yàn)材料的獲取、實(shí)驗(yàn)條件的精準(zhǔn)控制以及結(jié)果是否準(zhǔn)確反映在體功能，例如誘發(fā)頂體反應(yīng)、精卵透明帶結(jié)合實(shí)驗(yàn)等。因此，目前的功能檢測(cè)更偏向于尋找一些反映精子某項(xiàng)功能的相關(guān)標(biāo)記物，通過(guò)檢測(cè)標(biāo)記物來(lái)間接反映精子某項(xiàng)功能。

透明質(zhì)酸是人卵母細(xì)胞和透明帶黏液基質(zhì)的主要成分，精子在成熟的后期可獲得與透明質(zhì)酸特異性結(jié)合的能力，并且精子至少產(chǎn)生2 個(gè)特異的能與透明質(zhì)酸結(jié)合的蛋白位點(diǎn)，使精子能夠與卵細(xì)胞透明帶結(jié)合，從而實(shí)現(xiàn)穿透與受精。透明質(zhì)酸結(jié)合實(shí)驗(yàn)就是在體外模擬這一過(guò)程，從而實(shí)現(xiàn)精子頭部透明質(zhì)酸受體的鑒定和量化，間接反映精子成熟度，是精子質(zhì)量評(píng)估的新方法。這一新方法是否優(yōu)于傳統(tǒng)精液常規(guī)形態(tài)等檢測(cè)指標(biāo)，是否具有預(yù)測(cè)受精、胚胎發(fā)育及妊娠結(jié)局的潛能是本研究關(guān)注的問(wèn)題。

本研究分兩部分，一部分體外檢測(cè)HBA，對(duì)具有透明質(zhì)酸受體精子的密度、正常形態(tài)率和DNA 碎片進(jìn)行了檢測(cè)與比對(duì)。研究結(jié)果未發(fā)現(xiàn)精液標(biāo)本透明質(zhì)酸結(jié)合率與精子正常形態(tài)率和密度的相關(guān)性，但是與碎片呈較強(qiáng)的負(fù)相關(guān)性。

精子形態(tài)是評(píng)價(jià)精子質(zhì)量的常規(guī)指標(biāo)之一，也是影響受精的重要環(huán)節(jié)。Prinosilova 等[10]研究證實(shí)可與透明質(zhì)酸結(jié)合的精子，其正常形態(tài)率比原始精液精子提高了3.04 倍(95%CI:1.9-4.7)。劉瑜等[11]也持同樣的觀點(diǎn)，本研究未發(fā)現(xiàn)HBA 與精子正常形態(tài)率的相關(guān)性，可能有3 個(gè)因素：（1）是否受所選取的樣本總體有關(guān)。（2）透明質(zhì)酸結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性受實(shí)驗(yàn)過(guò)程的約束，在時(shí)間的把握上有些難，稍微遲一點(diǎn)觀察，本來(lái)已經(jīng)黏附的精子就已經(jīng)游離變成陰性了，使得研究結(jié)果很難做到質(zhì)控和統(tǒng)一。（3）這個(gè)指標(biāo)單一作為篩選優(yōu)質(zhì)精子的特異性和敏感性還有待于進(jìn)一步商榷。也有研究[12]證實(shí)HA 結(jié)合精子的形態(tài)超高倍放大后并不具有優(yōu)勢(shì)，可能與評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)不同有關(guān)。環(huán)境中的活性氧、精子生成過(guò)程中染色體的異常組裝、凋亡均可造成精子DNA 損傷，降低精子受精能力和胚胎發(fā)育潛能，從而降低妊娠率，使流產(chǎn)率增高。本研究顯示：精子DNA 碎片與具有透明質(zhì)酸的精子負(fù)相關(guān),提示具有透明質(zhì)酸結(jié)合位點(diǎn)的精子凋亡率較低。HA 與精子發(fā)育過(guò)程中的細(xì)胞凋亡、DNA 碎片化、非整倍體染色體形成以及成熟度等相關(guān)性廣為報(bào)道。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，能被透明質(zhì)酸結(jié)合的精子，其DNA 損傷率、核蛋白苯胺藍(lán)著色率明顯低于同一原始精液標(biāo)本[13],從不同角度驗(yàn)證了有透明質(zhì)酸受體精子成熟度更好，更易耐受氧化損傷等不良刺激。

本研究進(jìn)一步收集了115 例患者行IVF-ET 周期，納入研究的兩組女方平均年齡、平均不孕年限、總Gn 用量、平均Gn 使用時(shí)間等組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。研究檢測(cè)了男方精液的透明質(zhì)酸結(jié)合率，將患者分為結(jié)合率正常組和結(jié)合率非正常組，比較兩組的受精率、正常受精率、卵裂率、正常卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、可利用胚胎和臨床妊娠率是否有差異，同時(shí)將透明質(zhì)酸結(jié)合率與上述指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果并未發(fā)現(xiàn)兩組有顯著性差異，但是相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)透明質(zhì)酸結(jié)合率與正常受精率正相關(guān)。由于受到精子和卵子來(lái)源的制約很難大規(guī)模推廣，HBA是用來(lái)替代精-卵透明帶結(jié)合試驗(yàn)的檢測(cè)方法,是用來(lái)評(píng)估精子結(jié)合透明帶的能力，其結(jié)果與常規(guī)IVF 受精結(jié)局之間的相關(guān)性,仍存在爭(zhēng)議。之前的研究文獻(xiàn)[14-15]多通過(guò)比較精子-透明質(zhì)酸結(jié)合率與受精率之間的相關(guān)性來(lái)證明其對(duì)于受精能力的預(yù)測(cè)價(jià)值。王金香等[7]研究顯示, 精子-透明質(zhì)酸結(jié)合率＜65%時(shí), 總受精率和正常受精率均顯著降低(P＜0.01)。Ye 等[8]對(duì)175 例常規(guī)IVF 周期樣本研究發(fā)現(xiàn)HBA 結(jié)合率與體外受精率顯著相關(guān)。而Nijs等[14]研究結(jié)果顯示HBA 與受精率并無(wú)相關(guān)性，但發(fā)現(xiàn)HBA 與妊娠率顯著相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)其與正常受精率的相關(guān)性，證實(shí)HBA 結(jié)合精子相對(duì)受精率高。本研究也發(fā)現(xiàn)HBA 與胚胎質(zhì)量如優(yōu)質(zhì)胚胎率和可利用胚胎率之間無(wú)相關(guān)性，HBA 預(yù)測(cè)胚胎發(fā)育潛能、妊娠和流產(chǎn)的價(jià)值也不高，只能與其他反映成熟度的指標(biāo)連用才具有相對(duì)較好的預(yù)測(cè)價(jià)值。與一些研究[15-16]結(jié)果一致，Tarozzi 等[15]研究報(bào)道HBA 與體外受精率及臨床妊娠率均無(wú)相關(guān)性。Boynukalin 等[16]研究結(jié)果提示HBA 結(jié)合率并不能提示臨床妊娠率。HBA 對(duì)妊娠和早期流產(chǎn)的單一指標(biāo)的預(yù)測(cè)價(jià)值很有限，但是HBA 聯(lián)合男方年齡、DNA 碎片可以將預(yù)測(cè)妊娠的概率提高到66.1%。聯(lián)合男方年齡和DNA 碎片率對(duì)早期流產(chǎn)就有較強(qiáng)的預(yù)測(cè)價(jià)值（75%），與劉瑜等[17]的報(bào)道類似，劉瑜等的研究結(jié)果顯示HBA 聯(lián)合DNA 碎片率可提高對(duì)早期流產(chǎn)的預(yù)測(cè)。

綜上所述，頭部具有透明質(zhì)酸結(jié)合位點(diǎn)的精子，其DNA 完整性更好；HBA 聯(lián)合其他指標(biāo)可有效預(yù)測(cè)妊娠和流產(chǎn)，但作為單一指標(biāo)對(duì)妊娠及流產(chǎn)的預(yù)測(cè)價(jià)值有限。作為檢測(cè)精子透明質(zhì)酸受體的HBA，可能是評(píng)價(jià)精子多重質(zhì)量的潛在指標(biāo)。