?；撬釋|生長性能、消化酶活性、抗氧化能力及免疫指標的影響

虞 為 ，楊育凱 ，林黑著 ，黃小林 ，黃 忠 ，李 濤 ，周傳朋，馬振華 ，荀鵬偉，楊長平

（1. 中國水產(chǎn)科學研究院南海水產(chǎn)研究所/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部南海漁業(yè)資源開發(fā)利用重點實驗室/廣東省漁業(yè)生態(tài)環(huán)境重點實驗室，廣東 廣州 510300； 2. 中國水產(chǎn)科學研究院南海水產(chǎn)研究所深圳試驗基地，廣東 深圳 518121；3. 中國水產(chǎn)科學研究院南海水產(chǎn)研究所熱帶水產(chǎn)研究開發(fā)中心，海南 三亞 572018）

?；撬嵊置Ｄ憠A，化學名為β-氨基乙磺酸，是一種廣泛分布于動物機體各組織和器官中的小分子β-含硫氨基酸[1]。研究發(fā)現(xiàn)，?；撬峋哂刑岣邉游锷L和繁殖能力、調(diào)節(jié)機體滲透壓、增強維持生物膜穩(wěn)定性、促進營養(yǎng)物質(zhì)代謝、提升免疫能力和抗氧化能力等生物學功能[2-3]。近年來，?；撬釋λa(chǎn)動物的營養(yǎng)生理功能及其在飼料中的應用得到廣泛關(guān)注。研究表明，飼料中添加?；撬峥梢燥@著提升異育銀鯽 (Carassius auratus gibelio)[4]、黃河鯉 (Cyprinus carpio)[5]、黃鰭鯛 (Acanthopagrus latus)[6]和斜帶石斑魚 (Epinephelus coioides)[7]的生長性能，提高虹鱒 (Oncorhynchus mykiss)[8]、暗紋東方鲀 (Takifugu obscurus)[9]和鯰 (Clarias gariepinus)[10]的免疫力和抗氧化能力，增強花鰻鱺(Anguilla marmorata)[11]、草魚 (Ctenopharyngodon idella)[12]和軍曹魚 (Rachycentron canadum)[13]的消化酶活性，改善麥穗魚 (Pseudorasbora parva)[14]和鯽[15]的耐缺氧能力。此外，?；撬徇€是一種重要的誘食劑，可以提高虹鱒[16]、鯽[4]和大菱鲆 (Scophthalmus maximus)[17]的攝食率。

花鱸 (Lateolabrax maculatus) 又名七星鱸，屬廣鹽性魚類，具有肉質(zhì)鮮美、生長快速和價格適中等優(yōu)點，是中國沿海地區(qū)的重要養(yǎng)殖魚類之一[18]。2019 年，全國花鱸養(yǎng)殖產(chǎn)量約18 萬噸，養(yǎng)殖區(qū)域主要集中在廣東和福建兩省[19]。目前，國內(nèi)外尚未見有關(guān)飼料?；撬崴脚c花鱸生長性能、飼料利用和免疫關(guān)系的研究報道。為此，本試驗研究了飼料牛磺酸水平對花鱸生長性能、體成分、消化酶、免疫指標和抗氧化能力的影響，旨在確定花鱸對飼料中?；撬岬淖钸m需求量，為其配合飼料配制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗飼料

基礎飼料以魚粉和大豆?jié)饪s蛋白為主要蛋白源，以魚油為主要脂肪源。對照組不添加?；撬?N0)，試驗飼料中分別添加0.4% (N1)、0.8%(N2)、1.2% (N3)、1.6% (N4) 的?；撬?(純度為99%，購自西安裕華生物科技有限公司)。試驗飼料配方及營養(yǎng)組成見表1。原料粉碎后，過60 目篩，按照飼料配方稱量、混合后，制成直徑為2.5 和3.0 mm的顆粒飼料，60 ℃ 烘干，冷卻后裝入密封袋，于 ?20 ℃ 保存?zhèn)溆谩?/p>

表1 試驗飼料組成及營養(yǎng)水平 (干物質(zhì)基礎)Table 1 Composition and nutrient levels of basal diet (Dray mass basis) %

1.2 試驗用魚與飼養(yǎng)管理

花鱸購自深圳市深海農(nóng)場海洋發(fā)展有限公司，購回后暫養(yǎng)于中國水產(chǎn)科學研究院南海水產(chǎn)研究所深圳試驗基地車間水泥池，每天用基礎飼料飽食投喂2次，馴化14 d。試驗開始前，停止投料24 h，隨機挑選規(guī)格相近、體格健壯、平均體質(zhì)量(7.2±0.07) g的花鱸450尾，隨機分配至15 個水族箱中 (1 m×1 m×1.5 m)，分別投喂相應的試驗飼料。每天7:00和17:00飽食投喂2次，投喂0.5 h后收集剩余飼料，將飼料烘干、稱質(zhì)量，并記錄飼料投喂量、死魚的數(shù)量和質(zhì)量。養(yǎng)殖期間水溫26～30 ℃，鹽度 20～25，pH 7.5～8.0，溶解氧質(zhì)量濃度大于 5.0 mg·L?1，氨氮質(zhì)量濃度低于 0.1 mg·L?1，整個試驗在自然光照條件下進行。試驗周期為56 d。

1.3 樣品采集

試驗結(jié)束后，饑餓24 h，稱每個水族箱中魚的總質(zhì)量并記錄存活數(shù)量。從每箱中隨機取3尾魚用于全魚營養(yǎng)成分分析，?20 ℃ 保存待測；每箱隨機取3尾魚測其體長、體質(zhì)量以及肝臟質(zhì)量，用于計算形體指標；然后每箱隨機取4 尾魚用2.5 mL的注射器 (經(jīng)1%的肝素鈉潤洗) 尾靜脈取血，離心(3 000 r·min?1, 4 ℃) 10 min 后，收集上清液并分裝于0.5 mL的離心管中，?80 ℃保存?zhèn)溆谩２裳?，采集肝臟裝于2 mL離心管中，?80 ℃保存?zhèn)溆?；?.86% 冷凍生理鹽水沖洗腸道內(nèi)容物，用濾紙吸干水分后于?80 ℃保存，用于消化酶活性測定。

1.4 測定方法

1.4.1 生長指標測定 根據(jù)以下公式計算增重率(WGR, %)、特定生長率 (SGR, %·d?1)、成活率(SR, %)、飼料系數(shù) (FCR)、攝食率 (FR, %)、肝體比 (HIS, %) 和肥滿度 (CF, g·cm?3)。

式中Wt為魚終末總質(zhì)量，W0為魚初始總質(zhì)量，WFB為魚終末均質(zhì)量，WIB為魚初始均質(zhì)量，t為試驗時間，Nt為終末魚數(shù)，N0為初始魚數(shù)，C為攝食量，Wg為肝臟質(zhì)量，Wf為魚體質(zhì)量，Lf為魚體長。

1.4.2 飼料?；撬釡y定 用常規(guī)酸水解法獲得飼料中的牛磺酸后，采用氨基酸自動分析儀 (德國賽卡姆Sykam公司) 進行測定。

1.4.3 飼料和全魚基本成分測定 分別采用105 ℃烘箱干燥法 (GB/T 6435—2006)、索氏抽提法(GB/T 6433—2006)、凱氏定氮法 (GB/T 6432—2006) 和550 ℃馬弗爐灼燒法 (GB/T 6438—2007)測定飼料和全魚中的水分、粗脂肪、粗蛋白和粗灰分的含量。

1.4.4 腸道相關(guān)酶活指標測定 取0.5 g腸道組織，在預冷的0.86% 生理鹽水中剪碎，在勻漿機中冰浴勻漿 (7 000 r·min?1，10 s·次?1，連續(xù) 3 次)，然后冷凍離心，取上清液用于酶活測定。采用南京建成試劑盒測定蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性，測定方法步驟詳見說明書。

1.4.5 血液生理指標和免疫指標測定 采用邁瑞B(yǎng)C-5300Vet 全自動五分類動物血液細胞分析儀測定血液的白細胞數(shù) (WBC)、紅細胞數(shù) (RBC)、血紅蛋白濃度 (Hb) 和紅細胞積壓 (Ht)。血清中溶菌酶(LZM) 活性及補體4 (C4)、免疫球蛋白M (IgM) 濃度均采用南京建成生物工程研究所試劑盒進行測定。

1.4.6 抗氧化酶活性測定 肝臟中總抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶 (SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶 (GSH-Px) 活性及丙二醛 (MDA) 濃度測定的試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，具體方法詳見試劑盒說明書。

1.5 數(shù)據(jù)處理

實驗數(shù)據(jù)采用Excel 2016進行處理，通過SPSS 22.0進行統(tǒng)計分析，所得數(shù)據(jù)以“平均值±標準差 (X±SD)”表示，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 生長性能

?；撬崽砑咏M花鱸的增重率和特定生長率均大于對照組，其中N2、N3和N4組均顯著高于對照組 (P＜0.05)，N2、N3和N4組間差異不顯著(P＞0.05)，當?；撬崽砑恿砍^0.8%，花鱸的增重率和特定生長率均呈下降趨勢 (表2)。N2、N3和N4組飼料系數(shù)均顯著小于對照組 (P＜0.05)，?；撬崽砑咏M攝食率顯著大于對照組 (P＜0.05)。各組花鱸成活率、肝體比和肥滿度的差異均不顯著 (P＞0.05)。以?；撬釣樽宰兞?(x)、花鱸增重率為因變量 (y)，對二者進行線性回歸分析，得出花鱸飼料中?；撬岬淖钸m添加量為0.85% (圖1)。

圖1 花鱸增重率與飼料中?；撬豳|(zhì)量分數(shù)的關(guān)系Figure 1 Relationship between weight gain rate of L. maculatus and mass fraction of dietary taurine

表2 飼料中添加牛磺酸對花鱸生長性能的影響Table 2 Effects of dietary taurine on growth performance of L. maculatus

2.2 全魚體成分

?；撬崽砑咏M全魚的粗蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)顯著高于對照組 (P＜0.05)，其中N2組最大；?；撬崽砑咏M全魚的粗脂肪質(zhì)量分數(shù)顯著低于對照組 (P＜0.05)，其中N2組最小。各組全魚的水分和粗灰分差異不顯著 (P＞0.05，表3)。

表3 飼料中添加?；撬釋|全魚營養(yǎng)成分的影響Table 3 Effects of dietary taurine on whole body proximate composition of L. maculatus %

2.3 腸道消化酶活性

花鱸腸道蛋白酶和脂肪酶活性隨著?；撬崽砑铀降脑黾佣龃螅；撬崽砑咏M蛋白酶和脂肪酶活性顯著高于對照組 (P＜0.05)。各組腸道淀粉酶活性差異不顯著 (P＞0.05，表4)。

表4 飼料中添加牛磺酸對花鱸腸道消化酶活性的影響Table 4 Effects of dietary taurine on intestinal digestive enzyme activity of L. maculatus

2.4 肝臟抗氧化能力

?；撬崽砑咏M花鱸肝臟的T-AOC、SOD、GSHPx和CAT活性顯著高于對照組 (P＜0.05)，當?；撬崽砑恿砍^0.8%，花鱸肝臟的T-AOC、SOD、GSH-Px和CAT活性均呈下降趨勢。牛磺酸添加組花鱸肝臟的MDA濃度顯著低于對照組 (P＜0.05)，當?；撬崽砑恿砍^0.8%，花鱸肝臟的MDA濃度呈上升趨勢 (表5)。

表5 飼料中添加牛磺酸對花鱸肝臟抗氧化指標的影響Table 5 Effects of dietary taurine on hepatic T-AOC, SOD, CAT, GSH-Px activities and MDA contents of L. maculatus

2.5 血液生理指標

?；撬崽砑咏M花鱸的紅細胞數(shù)、白細胞數(shù)和血紅蛋白質(zhì)量濃度顯著高于對照組 (P＜0.05)。對照組和牛磺酸添加組的紅細胞積壓水平差異不顯著 (P＞0.05，表 6)。

表6 飼料中添加?；撬釋|血液生理指標的影響Table 6 Effects of dietary taurine on blood physiological parameters of L. maculatus

2.6 血清免疫指標

?；撬崽砑咏M花鱸的LZM活性、IgM和C4質(zhì)量濃度顯著高于對照組 (P＜0.05)，各添加組間LZM活性、IgM和C4質(zhì)量濃度差異不顯著 (P＞0.05，表 7)。

表7 飼料中添加?；撬釋|血清免疫指標的影響Table 7 Effects of dietary taurine on serum immune indexes of L. maculatus

3 討論

3.1 ?；撬釋|生長性能的影響

本試驗表明，在飼料中添加適量?；撬崮軌蝻@著促進花鱸生長。隨著飼料中牛磺酸添加量的增加，試驗魚增重率和特定生長率呈先升高后降低的趨勢，當飼料中牛磺酸添加量增至0.8%時，花鱸增重率和特定生長率最大；之后當飼料中?；撬崽砑恿坷^續(xù)增加，花鱸增重率和特定生長率下降。這與?；撬釋π睅唪~[7]、黃鰭鯛[6]、真鯛 (Pagrus major)[20]和尼羅羅非魚 (Oreochromis niloticus)[21]生長性能的研究結(jié)果相似。?；撬釋λa(chǎn)動物生長性能的影響主要體現(xiàn)在提高消化酶活性和攝食率等方面[22-23]。本試驗中，牛磺酸添加組魚的蛋白酶和脂肪酶活性及攝食率均顯著高于對照組，這與試驗魚的生長性能變化趨勢一致，其原因可能是牛磺酸通過提高花鱸的蛋白酶和脂肪酶活性及攝食率來促進生長。與本研究結(jié)果相似，牛磺酸可以顯著提高花鰻鱺[11]和黃河鯉[5]腸道蛋白酶和脂肪酶活性，但對腸道淀粉酶活性的影響不大。本試驗中，當牛磺酸添加量超過0.8%，花鱸的攝食率和增重率均呈下降趨勢，表明過量添加?；撬嵩谝欢ǔ潭壬蠒种破鋽z食和生長，這與?；撬釋琪V[16]、羅非魚[21]和大菱鲆[17]的研究結(jié)果相吻合。當飼料牛磺酸含量過高時，魚類為了維持體內(nèi)適宜的牛磺酸水平需排出過多的?；撬幔瑢е聶C體耗能增加，從而使生長性能下降[7]；由于?；撬岢饰⑺嵝?，過量添加?；撬峥赡軐е嘛暳纤嵝云?，影響了試驗魚對飼料的適口性[24]。以增重率為目標，經(jīng)線性回歸分析，花鱸飼料中?；撬岬淖钸m添加量為0.85%。這一結(jié)果高于羅非魚 (0.75%)[21]和草魚 (0.6%)[12]對?；撬岬男枨罅浚陀谛睅唪~ (1.04%)[7]、花鰻鱺 (1.31%)[11]和黃鰭鯛 (1.07%)[6]。說明不同魚類對?；撬嵝枰坎煌@可能是因為不同魚類自身合成?；撬岬哪芰Σ煌?。

3.2 ?；撬釋|全魚體成分的影響

飼料中添加?；撬峥捎绊?zhàn)B殖魚類的體成分[25]。本試驗中，飼料中添加?；撬峥梢燥@著提高花鱸的粗蛋白質(zhì)含量，并顯著降低粗脂肪含量。本試驗結(jié)果與有關(guān)大西洋鮭 (Salmo salar)[26]、異育銀鯽[4]和斜帶石斑魚[7]的研究結(jié)果一致。飼料中添加?；撬崽岣吡嘶|的粗蛋白質(zhì)含量，其原因可能是添加?；撬峥梢詼p少體內(nèi)?；撬岬暮铣?，使得蛋氨酸和胱氨酸等含硫氨基酸可以更多地參與到蛋白質(zhì)合成代謝中，進而促進機體蛋白質(zhì)沉積[8]；?；撬崮軌蛲ㄟ^刺激機體分泌甲狀腺激素促進魚體生長激素的合成，最終有利于魚體蛋白質(zhì)合成[27]。飼料中添加?；撬峤档土嘶|的粗脂肪含量，其原因可能是牛磺酸不僅能夠參與膽汁酸的合成，而膽汁酸可促進脂肪代謝，還能夠提高膽固醇7α-羧化酶的活性，從而產(chǎn)生降脂效應[28-29]。

3.3 ?；撬釋|肝臟抗氧化能力的影響

魚類總抗氧化能力反映了抗氧化酶和非酶抗氧化物的水平，其強弱直接影響魚體的抗應激能力，關(guān)系著魚體的正常生長與健康水平[30]?；钚匝醯倪^度生成會對機體蛋白質(zhì)、核酸和生物膜等重要生物大分子造成損傷，使其生理功能的發(fā)揮受阻[31]。正常狀態(tài)下，機體的抗氧化系統(tǒng)具有清除活性氧的能力，SOD、GSH-Px和CAT在活性氧清除過程中起關(guān)鍵作用[32]。其中SOD能夠催化超氧陰離子自由基生成過氧化氫 (H2O2)，從而清除超氧陰離子自由基，而CAT和GSH-Px可以催化H2O2生成水和氧氣[33]。MDA是自由基導致脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，會造成細胞和組織的損傷，其濃度可以反映機體活性氧自由基的水平[34]。本研究飼料中添加?；撬崮茱@著提高花鱸肝臟的T-AOC，其肝臟SOD、GSH-Px和CAT活性也顯著提高，MDA濃度顯著降低。Dehghani等[6]的研究結(jié)果顯示，添加1.25%?；撬岬娘暳峡梢燥@著提高黃鰭鯛肝臟T-AOC和抗氧化酶活性，同時顯著降低其肝臟的MDA濃度；徐璐茜等[35]報道，飼料中添加適量的?；撬峥梢燥@著提高草魚肝臟SOD、GSH-Px和CAT活性，顯著降低MDA濃度，本研究結(jié)果與上述研究結(jié)論相似。?；撬峥汕宄龣C體自由基，或通過增強抗氧化酶活性發(fā)揮其抗氧化功能[36]。此外，牛磺酸不僅是GSH-Px的前體，還可以促進谷胱甘肽二硫化物生成GSH-Px[37-38]。本研究中?；撬崽砑恿砍^0.8% 時，花鱸肝臟T-AOC和抗氧化酶活性呈下降趨勢，MDA濃度呈上升趨勢，與?；撬釋t鰭東方鲀[39]和虎紋蛙[40]的影響結(jié)果一致。這可能是由于添加過量的?；撬釋е聶C體出現(xiàn)抗氧化抑制作用。

3.4 牛磺酸對花鱸血液生理指標的影響

魚體血液生理指標是評價其健康水平和營養(yǎng)狀況的重要指標[33]。研究表明，飼料中缺乏?；撬釙е禄|的血液學指標異常[35]。本研究中添加牛磺酸組魚的紅細胞、白細胞和血紅蛋白水平均顯著高于對照組。與本研究結(jié)果相似，Li等[41]研究發(fā)現(xiàn)用未添加?；撬岬娘暳贤段裹S顙魚 (Pelteobagrus fulvidraco) 后，黃顙魚的紅細胞、白細胞和血紅蛋白水平顯著降低；Takagi等[42]研究證明缺乏?；撬釙е挛鍡l(Seriola quinqueradiata) 的紅細胞、白細胞和血紅蛋白水平顯著降低。本研究中添加牛磺酸組魚的紅細胞水平升高，是因為?；撬峥梢云胶饧t細胞滲透壓和維持紅細胞膜穩(wěn)定性[43]；對照組的白細胞水平降低，可能是由于?；撬崛狈е掳准毎两堤匦园l(fā)生變化，進而導致白細胞數(shù)量減少[2]；對照組血紅蛋白水平顯著降低，其原因可能是?；撬崛狈σ痿~體紅細胞滲透脆性增加，導致紅細胞破裂，逸出血紅蛋白[44]。

3.5 ?；撬釋|血清免疫指標的影響

研究表明，?；撬峥梢栽鰪妱游餀C體的免疫力[8-9]。LZM具有溶菌效應，是魚體防御細菌性病原體的重要酶，其活性是衡量魚體免疫力的重要指標[45]。C4是魚類體內(nèi)具有酶原活性的球蛋白，具有破壞或清除病原微生物的功能[46]。IgM在魚體免疫應激中發(fā)揮重要作用，是魚類免疫應答的生物標記物[47]。本研究中，與對照組相比，牛磺酸添加組魚的LZM活性、C4和IgM水平均顯著提高，表明?；撬峥梢栽鰪姍C體的免疫能力。Zhang等[48]和石勇等[49]的研究均獲得了類似結(jié)果，他們發(fā)現(xiàn)?；撬峥梢栽鰪姲钡{迫后黃顙魚和高密度脅迫后青魚 (Mylopharyngodon piceus) 的LZM活性和IgM水平。本研究中牛磺酸添加組花鱸的IgM水平顯著提高，其原因可能是?；撬崮軌虼龠M淋巴細胞增殖和抗體分泌[50]。而有關(guān)?；撬釋︳~體LZM活性和補體水平的影響機制還有待進一步研究。

4 結(jié)論

飼料中添加牛磺酸能顯著提升花鱸的生長性能，增強其腸道蛋白酶和脂肪酶活性，并且可以提高其抗氧化能力和免疫能力。線性回歸分析結(jié)果表明，以增重率為目標，花鱸對?；撬岬淖钸m需求量為0.85%。