李 莉，劉云凌，張樹東，王 雪，菅玉霞，高鳳祥，潘 雷，郭 文，胡發(fā)文*

(1.山東省海洋生物研究院，青島市海洋生物種質(zhì)資源挖掘與利用工程實(shí)驗(yàn)室，青島市淺海底棲漁業(yè)增殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 青島 266104；2.青島市即墨區(qū)海洋發(fā)展服務(wù)中心，山東 青島 266200；3.日照市水產(chǎn)集團(tuán)總公司，山東 日照 276800)

大瀧六線魚(Hexagrammosotakii)隸屬于鲉形目(Scorpaeniformes)、六線魚科(Hexagrammidate)、六線魚屬(Hexagrammos)，又名歐氏六線魚，主要分布于我國山東和遼寧近海多巖礁海區(qū)，也見于朝鮮、日本和俄羅斯遠(yuǎn)東諸海，是我國北方重要的海水經(jīng)濟(jì)魚類[1-2]。海洋水質(zhì)的優(yōu)劣，直接影響水產(chǎn)品的品質(zhì)，加之大多數(shù)漁民對船舶水污染物造成海洋環(huán)境污染的危害性認(rèn)識不夠，造成了海洋生態(tài)環(huán)境污染嚴(yán)重[3]。近年來，隨著近海漁業(yè)資源的過度開發(fā)利用，氮磷污染負(fù)荷和工廠化能耗等[4]，大瀧六線魚的漁獲量逐年降低，自然資源量銳減，漁業(yè)資源亟待修復(fù)。

在大瀧六線魚資源嚴(yán)重衰退的形勢下，科學(xué)規(guī)范地開展增殖放流是恢復(fù)其自然資源、改善生態(tài)環(huán)境、促進(jìn)漁民增收的有效措施。2012年，大瀧六線魚全人工繁育技術(shù)獲得成功，以人工育苗技術(shù)為支撐，山東省開展了大規(guī)模大瀧六線魚增殖放流工作，取得了一定的成效。但重規(guī)模、輕評估導(dǎo)致了增殖放流效果沒有得到有效體現(xiàn)，開發(fā)并選取適宜大瀧六線魚增殖放流的苗種和標(biāo)志牌規(guī)格對科學(xué)評估增殖放流效果具有重要意義。

標(biāo)志放流技術(shù)是修復(fù)漁業(yè)資源、研究魚類洄游和魚類資源的方法，在魚類資源養(yǎng)護(hù)、增殖效果評估中具有重要作用，是研究魚類生活史及其資源時空分布格局的有效手段[5-8]。選擇適合的標(biāo)志技術(shù)應(yīng)綜合考慮兩方面因素：標(biāo)志成本、標(biāo)志對個體存活生長的影響和標(biāo)志持久度，兩者均是評價標(biāo)志技術(shù)是否合適的重要指標(biāo)。常用的標(biāo)志技術(shù)主要分為體外標(biāo)志法和體內(nèi)標(biāo)志法，其中T型標(biāo)志牌標(biāo)志法應(yīng)用較為廣泛，具有易操作、性價比高、標(biāo)志保持率高、易于識別等優(yōu)點(diǎn)，適合長時間的標(biāo)志追蹤研究，目前其仍是魚類批量標(biāo)志放流的主要方法之一[9-10]。國外開展了較多海水魚類的體外掛牌標(biāo)志放流技術(shù)研究，包括金頭鯛(Sparusaurata)[11]、鮭魚(Salmosalar)[12]等。我國標(biāo)志放流技術(shù)研究集中于蝦蟹類和魚類，包括中華絨螯蟹(Eriocheirsinensis)[13]、大黃魚(Pseudosciaenacrocea)[14]、真鯛(Pagrosomusmajor)[15]、魚免魚(Miichthysmiiuy)[16]、牙鲆(Paralichthysolivaceus)[17]、黑鯛(Sparusmacrocephalus)[18]、半滑舌鰨(Cynoglossussemilaevis)[19]等，主要使用的是體外掛牌標(biāo)志法、化學(xué)物質(zhì)標(biāo)志法和剪鰭法。國內(nèi)海水魚類的標(biāo)志技術(shù)取得了一定的進(jìn)展，但尚未見有關(guān)大瀧六線魚標(biāo)志技術(shù)的報道。本文研究了3種不同規(guī)格的T型標(biāo)志牌(T1、T2、T3)對3種規(guī)格大瀧六線魚的標(biāo)志效果，篩選最適宜進(jìn)行增殖放流的大瀧六線魚規(guī)格的T型標(biāo)志牌，提出T型標(biāo)志牌操作建議，旨在為大瀧六線魚追蹤調(diào)查和增殖放流效果評估提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)于2017年3—5月在山東省海洋生物研究院中試基地進(jìn)行。試驗(yàn)所用大瀧六線魚購自青島魯海水產(chǎn)技術(shù)發(fā)展公司。挑選體色正常、健康活潑、攝食良好的大瀧六線魚在室內(nèi)水泥池中流水暫養(yǎng)7 d，采用砂濾海水流水養(yǎng)殖，水溫(15.0±0.5)℃，鹽度31，pH 7.9～8.1，投喂海水魚專用配合飼料。選用3種規(guī)格的大瀧六線魚用于試驗(yàn)，分別為A1[全長(5.12±0.30)cm、體重(1.90±0.47)g]、A2[全長(8.26±0.60)cm、體重(5.27±0.54)g]、A3[全長(11.05±1.10)cm、體重(12.05±0.44)g]。試驗(yàn)開始前禁食24 h。

1.2 試驗(yàn)方法

T型標(biāo)志牌及標(biāo)志槍購自青島海星儀器有限公司，標(biāo)志牌為聚乙烯材質(zhì)，安全無毒。標(biāo)志牌分為3種規(guī)格，記為T1、T2、T3(表1、圖1)，其中平均全長5 cm的大瀧六線魚僅以T1標(biāo)志牌標(biāo)志，8 cm和11 cm大瀧六線魚均分別以3種規(guī)格標(biāo)志牌標(biāo)志。共設(shè)置7個試驗(yàn)組(A1-T1、A2-T1、A2-T2、A2-T3、A3-T1、A3-T2、A3-T3)和3個對照組(A1-C、A2-C、A3-C)，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)200尾魚。試驗(yàn)用魚先在25 m3的水泥池中暫養(yǎng)3 d后，再用于試驗(yàn)。

表1 試驗(yàn)用T型標(biāo)志牌的規(guī)格

1.2.1 試驗(yàn)用品消毒

在試驗(yàn)開始前，將標(biāo)志槍槍頭及T型標(biāo)志牌用75%酒精浸泡5 min消毒。

1.2.2 麻醉

在進(jìn)行標(biāo)志操作之前，所有試驗(yàn)魚用丁香酚(丁香酚∶酒精=1∶9，配比混合后溶于海水)進(jìn)行麻醉，麻醉劑濃度的選擇標(biāo)準(zhǔn)為魚體入麻時間快、恢復(fù)時間短、無不良副作用。參照胡發(fā)文等[20]的方法，試驗(yàn)魚用50 mg/L丁香酚進(jìn)行麻醉處理。

1.2.3 標(biāo)志操作

以專用的標(biāo)志槍進(jìn)行標(biāo)志操作。具體操作步驟為：戴上乳膠手套，隨機(jī)選取處于麻醉狀態(tài)的試驗(yàn)魚，左手輕壓魚體，右手持標(biāo)志槍，標(biāo)志槍與魚體呈45°～60°角，將槍頭自鱗下間隙插入魚背鰭基部下方肌肉最厚的部位，快速按壓扳機(jī)將標(biāo)志牌錨定端打入魚體，切忌將標(biāo)志槍頭穿透魚體(圖2)。用手指輕壓標(biāo)志部位，快速抽出標(biāo)志槍。

1.2.4 消毒

標(biāo)志后將標(biāo)志魚放入5 mg/L土霉素的海水溶液中藥浴30 min進(jìn)行消毒處理，防止傷口感染，消毒過程中持續(xù)充氧。

1.2.5 標(biāo)志魚存活率和脫標(biāo)率試驗(yàn)

標(biāo)志完成后，將各試驗(yàn)組和對照組的魚分別置于5 m3的小型水泥池中養(yǎng)殖15 d后，隨機(jī)從各組中撈取50尾測量全長和體重，開始生長試驗(yàn)。期間觀察標(biāo)志魚的行為狀態(tài)，統(tǒng)計存活率和脫標(biāo)率情況，養(yǎng)殖管理同1.1。

1.2.6 標(biāo)志魚的生長試驗(yàn)

經(jīng)工廠化養(yǎng)殖60 d后，各組再次隨機(jī)撈取50尾測量各組的全長和體重，以評估標(biāo)志后生長情況。為減少誤差，標(biāo)志操作和數(shù)據(jù)測定分析均由2名固定的專業(yè)人員完成。

1.3 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)均表示為每個試驗(yàn)組3個重復(fù)的平均值。存活率、脫標(biāo)率和生長試驗(yàn)結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示。采用SPSS 19.0軟件對全長、體重和存活率進(jìn)行單因素方差分析(One-way ANOVA)，P<0.05為差異顯著，反之不顯著。

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)志大瀧六線魚暫養(yǎng)存活率和脫標(biāo)率

標(biāo)志大瀧六線魚麻醉和標(biāo)志操作過程中均未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。在進(jìn)行T型掛牌標(biāo)志后的初期，標(biāo)志魚一般不游動、不攝食，只有少數(shù)魚游泳時身體會向有標(biāo)志的一側(cè)傾斜，對外界刺激的敏感度降低。三個對照組(A1-C、A2-C、A3-C)均無死亡，存活率為100%。平均全長5 cm的大瀧六線魚脫標(biāo)率高達(dá)80.83%，存活率低至10.50%，在標(biāo)志后的幾小時內(nèi)就有死亡，標(biāo)志后的2～5 d內(nèi)大量死亡。平均全長8 cm的大瀧六線魚，T1標(biāo)志的脫標(biāo)率較低，僅為4.83%，存活率達(dá)到97.17%，部分試驗(yàn)魚2 d后游泳行為正常且開始攝食，4 d后大部分試驗(yàn)魚攝食逐漸正常；T2標(biāo)志的試驗(yàn)魚，存活率為87.33%，脫標(biāo)率為15.33%，5 d后其行為和攝食開始恢復(fù)正常；T3標(biāo)志的存活率為61.33%，脫標(biāo)率達(dá)到31.50%，在標(biāo)志后第2天開始有試驗(yàn)魚死亡，9 d后無繼續(xù)死亡，8 d后攝食正常；三種標(biāo)志牌標(biāo)志的A2規(guī)格的大瀧六線魚存活率與對照組相比差異顯著(P<0.05)。平均全長11 cm的大瀧六線魚，T1和T2標(biāo)志的存活率分別為100%和95.83%，脫標(biāo)率分別為2.00%和5.67%，1 d后部分魚苗開始攝食，3 d后攝食正常；T3標(biāo)志的試驗(yàn)魚存活率為76.83%，脫標(biāo)率為24.67%，在4 d后開始攝食，7 d后全部攝食正常；A3-T1存活率與對照組相比無顯著差異(P>0.05)，A3-T2和A3-T3存活率與對照組相比差異顯著(P<0.05)。在暫養(yǎng)過程中，各試驗(yàn)組標(biāo)志魚均有不同程度的傷口潰爛情況，及時在養(yǎng)殖池中加入20 mg/L高錳酸鉀消毒，并勤換水，癥狀稍輕的標(biāo)志魚3 d左右傷口潰爛情況好轉(zhuǎn)，其余標(biāo)志魚在6 d后傷口炎癥好轉(zhuǎn)并愈合。

表2 不同規(guī)格大瀧六線魚以不同規(guī)格T型標(biāo)志牌標(biāo)志后15 d的存活率和脫標(biāo)率

2.2 標(biāo)志大瀧六線魚苗種的生長情況

標(biāo)志魚經(jīng)過60 d養(yǎng)殖后，統(tǒng)計試驗(yàn)魚的全長和體重數(shù)據(jù)。平均全長5 cm(A1)的大瀧六線魚由于規(guī)格較小，標(biāo)志后存活率僅為13.00%，所以沒有進(jìn)行生長試驗(yàn)。方差分析結(jié)果顯示，不同規(guī)格標(biāo)志牌標(biāo)志對魚的生長無顯著影響。從表3可以看出，試驗(yàn)開始時，各組大瀧六線魚的全長和體重均無顯著差異(P>0.05)，試驗(yàn)結(jié)束時，各組與對照組的全長和體重及特定生長率也均無顯著差異(P>0.05)，表明標(biāo)志效果良好。

表3 大瀧六線魚養(yǎng)殖60 d后生長情況對比

2.3 大瀧六線魚標(biāo)志放流試驗(yàn)

2017年6月在煙臺近海進(jìn)行了大瀧六線魚規(guī)?；帕髟囼?yàn)，放流大瀧六線魚25×104尾，其中利用T1標(biāo)志牌標(biāo)志放流平均全長8 cm的大瀧六線魚1×104尾。

放流前，使用T1標(biāo)志牌對大瀧六線魚進(jìn)行標(biāo)志后在室內(nèi)養(yǎng)殖池中流水養(yǎng)殖7 d，再出池打包裝船放入大海。出池時，統(tǒng)計大瀧六線魚死亡數(shù)和脫標(biāo)數(shù)，結(jié)果顯示存活率為99.80%，脫標(biāo)率為0.70%，表明標(biāo)志效果較好。

3 討論

3.1 標(biāo)志對正常生理的影響及其與脫標(biāo)率和存活率的關(guān)系

標(biāo)志方法適合與否主要看存活率和脫標(biāo)率這兩個重要指標(biāo)，理想的標(biāo)志方法應(yīng)盡量不影響魚的正常生理活動和生長發(fā)育。從本研究生長試驗(yàn)情況來看，標(biāo)志魚與對照組生長無顯著差異(P>0.05)，這與大多數(shù)魚類標(biāo)志試驗(yàn)的結(jié)果[21-22]一致。有部分研究發(fā)現(xiàn)，標(biāo)志會對魚的生長產(chǎn)生負(fù)面的影響，Rikardsen等發(fā)現(xiàn)標(biāo)志操作后，北極紅點(diǎn)鮭(Salvelinusalpinus)有生長抑制的現(xiàn)象[23]；王茂元等發(fā)現(xiàn)鰱魚(Hypophthalmichthysmolitrix)在標(biāo)志后，其生長與對照組差異顯著[24]。這也說明標(biāo)志對魚體生長的影響因魚種而異。標(biāo)志后的一段時間內(nèi)部分魚苗有不攝食的現(xiàn)象，這與鰱[24]和青石斑魚(Epinephelusawoara)[25]的情況相似，推測可能是麻醉和標(biāo)志操作過程的影響，一般標(biāo)志后將魚苗放入養(yǎng)殖池適應(yīng)一段時間后便可恢復(fù)正常。

T型標(biāo)志牌的錨定端長度、連接線長度和T端直徑等直接影響標(biāo)志牌的重量，進(jìn)而影響到掛牌標(biāo)志的效果。研究發(fā)現(xiàn)T型標(biāo)志牌的連接線長度過短可能會導(dǎo)致較高的脫標(biāo)率[26]，過長則會額外增加標(biāo)志牌的重量，并且會增大標(biāo)志魚在水中游泳時的阻力。因此，要綜合考慮以上因素來確定所需T型標(biāo)志牌的規(guī)格。從脫標(biāo)率、存活率和試驗(yàn)魚的游泳、攝食和炎癥情況來看，平均全長5 cm及以下的大瀧六線魚不適合采用T型標(biāo)志牌標(biāo)志，即使使用規(guī)格最小的T1標(biāo)志牌進(jìn)行標(biāo)志，魚苗也有較高的死亡率；平均全長8 cm的大瀧六線魚適宜用T1標(biāo)志牌標(biāo)志；平均全長11 cm的大瀧六線魚適宜用T1和T2標(biāo)志牌標(biāo)志。從本試驗(yàn)的研究結(jié)果來看，直徑較大和錨定端長度較長的標(biāo)志牌會對標(biāo)志魚的體表造成較大的創(chuàng)傷，從而導(dǎo)致傷口發(fā)炎，出現(xiàn)較高的死亡率。T1標(biāo)志牌對魚體錨定部位的創(chuàng)傷較小，標(biāo)志后5～7 d傷口基本愈合，標(biāo)志魚的脫標(biāo)率與死亡率都較低，標(biāo)志效果較好。

由此可見，在本試驗(yàn)條件下，平均全長5 cm及以下的大瀧六線魚不適合以標(biāo)志牌標(biāo)志進(jìn)行放流，平均全長8 cm的大瀧六線魚，可以使用T1標(biāo)志牌標(biāo)志，平均全長11 cm的大瀧六線魚可使用T1和T2標(biāo)志牌標(biāo)志。

3.2 其他影響標(biāo)志存活率和脫標(biāo)率的因素

在對試驗(yàn)魚進(jìn)行標(biāo)志時，為了避免對試驗(yàn)魚造成創(chuàng)傷，一般會先對試驗(yàn)魚進(jìn)行麻醉，目前，丁香酚和MS-222被認(rèn)為是最安全有效的麻醉藥物[27-28]，被廣泛應(yīng)用于魚類催產(chǎn)、運(yùn)輸、標(biāo)志放流等漁業(yè)生產(chǎn)和研究中[29]。使用麻醉劑能使魚保持鎮(zhèn)靜，減少因應(yīng)激引起的創(chuàng)傷，提高存活率[30]。若麻醉劑的劑量過大或麻醉時間過長，會導(dǎo)致魚類死亡，所以一次麻醉的魚類數(shù)量不宜過多[31]。大瀧六線魚應(yīng)激反應(yīng)強(qiáng)烈，若苗種不經(jīng)過麻醉而直接進(jìn)行標(biāo)志操作，標(biāo)志魚劇烈掙扎，極易對標(biāo)志魚造成機(jī)械損傷，從而導(dǎo)致苗種標(biāo)志后死亡，因此，有必要使用適量麻醉劑對其麻醉后進(jìn)行標(biāo)志操作。

標(biāo)志操作會對體表造成創(chuàng)傷，選擇魚體背部肌肉較厚的位置進(jìn)行操作，這個部位遠(yuǎn)離中樞神經(jīng)和血液循環(huán)系統(tǒng)，對標(biāo)志魚的影響較小。將標(biāo)志槍與魚體呈45°～60°角斜插入背部進(jìn)行標(biāo)志，可使標(biāo)志牌向整個魚體斜后方傾斜，減少魚體在水中游泳時的阻力。在對鮭魚(Salmosalar)進(jìn)行標(biāo)志研究時，標(biāo)志操作過程如果操作不當(dāng)，或者標(biāo)志后標(biāo)志魚不進(jìn)行暫養(yǎng)就放入野生環(huán)境，會造成標(biāo)志魚標(biāo)志部位傷口潰爛，導(dǎo)致死亡或生長抑制[32]。因此，在標(biāo)志操作前，應(yīng)對標(biāo)志槍和T型標(biāo)志牌進(jìn)行消毒處理，并對標(biāo)志魚進(jìn)行消毒處理，在標(biāo)志后暫養(yǎng)7 d再進(jìn)行放流，標(biāo)志魚的創(chuàng)口可在較短時間愈合，提高標(biāo)志放流成功率。

3.3 適宜標(biāo)志苗種規(guī)格的選擇

掛牌標(biāo)志一般用于體長15 cm以上的魚[33]。但大瀧六線魚的放流規(guī)格一般為5～8 cm，在本研究中，平均全長8 cm的大瀧六線魚適宜用T1規(guī)格的標(biāo)志牌標(biāo)志，存活率達(dá)到98.00%，脫標(biāo)率4.00%。但是對于不同種類和不同規(guī)格的魚種，應(yīng)選用合適的T型標(biāo)志牌，標(biāo)志牌過大會對標(biāo)志魚的游泳和攝食行為產(chǎn)生影響，標(biāo)志牌過小會導(dǎo)致較高的脫標(biāo)率。因此，建議在往后的大瀧六線魚標(biāo)志放流時，選擇平均全長8 cm及以上的魚種為宜。

4 建議

鑒于本文研究結(jié)果，結(jié)合以往資料，建議：1)停食：標(biāo)志操作前待標(biāo)志魚停食24 h；2)消毒：標(biāo)志槍槍頭和T型標(biāo)志牌使用前用75%酒精浸泡消毒5 min；3)麻醉操作：選用50 mg/L丁香酚溶液進(jìn)行麻醉，待魚體失去平衡、腹部向上翻轉(zhuǎn)時迅速進(jìn)行標(biāo)志；4)標(biāo)志操作：標(biāo)志槍與魚體呈45°～60°角，將槍頭斜插入魚體背部肌肉最厚處，迅速按下扳機(jī)將標(biāo)志牌打入魚體內(nèi)部后按壓抽出標(biāo)志槍；5)魚體消毒：標(biāo)志完成后，將標(biāo)志魚放入5 mg/L土霉素的海水溶液中藥浴消毒30 min；6)標(biāo)志后暫養(yǎng)：消毒后的標(biāo)志魚暫養(yǎng)5～7 d后再放流。