實(shí)驗(yàn)教學(xué)中“假”抗“O”試劑的制備和應(yīng)用

王英 陳新君 張陽(yáng) 崔秀吉

摘 要：為避免在抗鏈球菌溶血素“O”膠乳凝集試驗(yàn)（抗“O”試驗(yàn)）中使用臨床患者血清樣本以及降低實(shí)驗(yàn)教學(xué)材料成本，以硫酸鋁鉀[KAl（SO4）2]溶液、牙膏溶液制備“假”抗“O”試劑，以此模擬實(shí)際抗“O”試驗(yàn)應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)教學(xué)。結(jié)果顯示“假”抗“O”試劑可產(chǎn)生明顯的凝集顆粒，達(dá)到預(yù)期的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，滿足教學(xué)目標(biāo)和任務(wù)。因此，“假”抗“O”試劑在實(shí)驗(yàn)教學(xué)中可替代商品化的抗“O”試驗(yàn)試劑盒。此外，因制備“假”抗“O”試劑的成本遠(yuǎn)低于商用化試劑盒，可實(shí)現(xiàn)大幅度節(jié)約教學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)的效果。

關(guān)鍵詞：微生物實(shí)驗(yàn)教學(xué);抗鏈球菌溶血素“O”;硫酸鋁鉀

Abstract： To avoid using the clinical serum samples in the antistreptolysin“O”test（ASO）and reduce the cost of experiment in the microbiology experimental teaching，a“Fake”ASO kit was developed to replace the commercial antistreptolysin“O”latex agglutination（ASO）kit.The“Fake”ASO kit consisted of 0.8mg/ml of KAl（SO4）2solution and 20mg/ml of toothpaste.In results，the“Fake”ASO kit showed a predicted agglutinating phenomenon similar to the commercial ASO kit.Thus，the“Fake”ASO kit can be using for the ASO experiment in microbiology experimental teaching.

Key words： Microbiology experimental teaching;Anit-streptolysin O;KAl（SO4）2

鏈球菌溶血素O（streptolysin O，SLO）是A群鏈球菌代謝產(chǎn)物中的一種，具有很強(qiáng)的抗原性，能夠刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生相應(yīng)的抗體[1-2]。感染溶血性鏈球菌的病人中，約有85%～90%病人于感染后2～3周，甚至病愈后數(shù)月到1年內(nèi)仍可以檢測(cè)出SLO抗體[3-5]?；顒?dòng)性風(fēng)濕熱患者血清中的SLO抗體顯著高于正常人，其效價(jià)在1∶400以上，通常作為鏈球菌新近感染指標(biāo)之一或風(fēng)濕熱及其活動(dòng)性的輔助診斷。抗鏈球菌溶血素“O”測(cè)定試驗(yàn)（膠乳凝集法），又稱(chēng)抗“O”試驗(yàn)，因其具有方法簡(jiǎn)便、快速等優(yōu)點(diǎn)，臨床上使用越來(lái)越廣泛[2，6]。在我校醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課教學(xué)中，抗“O”試驗(yàn)是醫(yī)學(xué)生必須掌握的實(shí)驗(yàn)操作項(xiàng)目。在實(shí)際實(shí)驗(yàn)教學(xué)過(guò)程中應(yīng)使用臨床病人血清標(biāo)本完成該實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。但因臨床血清標(biāo)本來(lái)源困難以及涉及生物安全問(wèn)題，現(xiàn)階段實(shí)驗(yàn)教學(xué)中以商品化抗“O”試驗(yàn)試劑盒中的陽(yáng)性對(duì)照液代替病人血清標(biāo)本進(jìn)行試驗(yàn)。但試劑盒存在價(jià)格高、量少，且貨源不穩(wěn)定的情況，所以不適合長(zhǎng)期在實(shí)際實(shí)驗(yàn)教學(xué)中使用。因此，尋找既經(jīng)濟(jì)又可靠的陽(yáng)性對(duì)照液的替代物對(duì)于保證該教學(xué)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的正常開(kāi)出就顯得十分必要。

通過(guò)多次預(yù)試和反復(fù)實(shí)踐，KAl（SO4）2溶液（0.8mg/ml）和牙膏（20mg/ml）的溶液，即“假”抗“O”試劑，可替代商品化試劑盒應(yīng)用于教學(xué)實(shí)踐，并取得預(yù)期實(shí)驗(yàn)教學(xué)目的。

1 材料與方法

1.1 材料

KAl（SO4）2，分析純，購(gòu)自天津市大茂化學(xué)試劑廠;牙膏，品牌黑妹，購(gòu)自海口某超市;抗鏈球菌溶血素“O”膠乳凝集試驗(yàn)試劑盒，購(gòu)自上海捷門(mén)生物技術(shù)有限公司，批號(hào)190806。

1.2 方法

（1）0.8mg/mL KAl（SO4）2溶液的配制 稱(chēng)取0.08g KAl（SO4）2完全溶解于100ml的蒸餾水中。

（2）20mg/mL牙膏溶液的配制稱(chēng)取1g牙膏用少量蒸餾水研磨溶解，靜置1分鐘后，吸取上清液用蒸餾水定容至50ml。

（3）抗“O”試驗(yàn)代替法預(yù)試驗(yàn)按1∶1比例混合20mg/mL牙膏溶液和商品化抗“O”試劑盒中的膠乳試劑配成混合液，記為膠乳試劑R。取試劑盒中的一張反應(yīng)紙板四個(gè)格子，標(biāo)記有2，3，5，6。在每個(gè)格子中分別滴加1滴0.8mg/mL KAl（SO4）2溶液（模擬病人陽(yáng)性血清標(biāo)本）、1滴生理鹽水（模擬病人陰性血清標(biāo)本）、1滴陽(yáng)性對(duì)照液、1滴陰性對(duì)照液，再分別滴加1滴膠乳試劑R，然后用攪拌棒攪拌混勻，邊攪拌邊觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象的變化。

2 結(jié)果與分析

完成抗“O”試驗(yàn)流程后，5號(hào)格子，即陽(yáng)性對(duì)照液（商品化試劑盒）和2號(hào)格子，即模擬病人陽(yáng)性血清（KAl（SO4）2溶液）均在2分鐘之內(nèi)出現(xiàn)凝集顆粒，但1號(hào)和4號(hào)格子沒(méi)有出現(xiàn)變化（如下圖）。肉眼觀察，商品化試劑盒中的陽(yáng)性對(duì)照液和模擬病人陽(yáng)性血清中產(chǎn)生的凝集現(xiàn)象相似，同時(shí)出現(xiàn)凝集得時(shí)間也相近。

兩種方法抗“O”試驗(yàn)結(jié)果對(duì)比圖

3 結(jié)語(yǔ)

在醫(yī)學(xué)微生物學(xué)的實(shí)驗(yàn)教學(xué)中，抗“O”試驗(yàn)是重要的一個(gè)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。學(xué)生通過(guò)操作進(jìn)一步掌握抗“O”試驗(yàn)原理和臨床意義等鏈球菌的相關(guān)知識(shí)。但近年來(lái)，臨床血清標(biāo)本，商品化試劑盒中陽(yáng)性對(duì)照液的來(lái)源的困難和需求的日益增大，現(xiàn)有的商品化試劑盒無(wú)論在數(shù)量上還是經(jīng)費(fèi)上無(wú)法滿足教學(xué)需求。為了解決這一難題，保證教學(xué)項(xiàng)目的順利開(kāi)展，通過(guò)反復(fù)實(shí)踐，研制出商品化抗“O”試驗(yàn)試劑盒的替代方法，即采用濃度為0.8mg/ml KAl（SO4）2溶液和20mg/ml的牙膏溶液模擬商品化抗“O”試驗(yàn)試劑盒。由于0.8mg/mL KAl（SO4）2溶液不能使試劑盒中的膠乳試劑發(fā)生凝集，所以在膠乳試劑中加入等量的20mg/mL牙膏溶液，其理由是牙膏中含有的羧甲基纖維素鈉可在酸性條件下沉淀，而0.8mg/ml的KAl（SO4）2溶液呈酸性，因此能使羧甲基纖維素鈉沉淀出現(xiàn)類(lèi)似凝集顆粒[7，8]。羧甲基纖維素鈉是由天然纖維素經(jīng)過(guò)化學(xué)改性得到的白色纖維狀或顆粒狀粉末，無(wú)臭、無(wú)味，為堿性的溶液。是常用于日用化學(xué)用品，如牙膏，中起到增強(qiáng)劑的作用，比較安全[9，10]。這種“假”抗“O”試劑的優(yōu)點(diǎn)是：（1）容易獲取硫酸鋁鉀和牙膏，且用量小，能滿足教學(xué)大用量的需求;（2）成本低，商品化試劑盒中陽(yáng)性標(biāo)本的價(jià)格為25元/ml，每年需要要采購(gòu)100～150mL，但本方法中使用的黑妹牙膏一支不足十元，而且能夠制備足夠的牙膏液供應(yīng)大量學(xué)生使用，從實(shí)驗(yàn)成本上大大節(jié)約了實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。至于其他品牌牙膏是否也可用，需要進(jìn)一步進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證;（3）安全，此法代替了血清標(biāo)本的使用，因此不涉及生物安全問(wèn)題。

綜上所述，“假”抗“O”試驗(yàn)試劑可替代原有的抗“O”試劑盒，且具有經(jīng)濟(jì)、安全、實(shí)驗(yàn)結(jié)果滿足教學(xué)目標(biāo)、簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，適用于國(guó)內(nèi)各醫(yī)學(xué)院校醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室在進(jìn)行ASO膠乳試驗(yàn)教學(xué)材料的準(zhǔn)備。

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