丁香油、MS-222和異丙酚對大黃魚的麻醉效果分析

楊 樂，張曉林，劉賢德

(集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部東海海水健康養(yǎng)殖重點實驗室，福建 廈門 361021)

大黃魚(Larimichthyscrocea)屬于鱸形目、石首魚科、黃魚屬，因肉質(zhì)細(xì)嫩、味道鮮美，且蛋白質(zhì)含量較高、脂肪含量較低，受到廣大消費者的青睞，是中國重要的經(jīng)濟(jì)魚類之一[1-2]。大黃魚對于人工操作、噪音、運輸?shù)葧憩F(xiàn)出極其明顯的應(yīng)激反應(yīng)，長途活體運輸常導(dǎo)致較高的死亡率，現(xiàn)已成為大黃魚活體物流的技術(shù)瓶頸[3]。麻醉劑在國內(nèi)外已被廣泛地用于催產(chǎn)、標(biāo)志及運輸?shù)葷O業(yè)生產(chǎn)和研究之中。常見的漁用麻醉劑有間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽(MS-222)、丁香油、二氧化碳、2-苯氧乙醇和乙醚等，其中最常用的是MS-222和丁香油，異丙酚是近年來發(fā)展起來的一種麻醉劑[4-8]。多項研究證明，麻醉劑在降低魚類對捕撈、人工操作及運輸?shù)葢?yīng)激反應(yīng)方面發(fā)揮較好的作用[9]。

研究了丁香油、MS-222、異丙酚在不同質(zhì)量濃度和水溫下對大黃魚的麻醉效果，并將適宜劑量的3種麻醉劑用于模擬運輸，以評估對運輸應(yīng)激的緩解作用，同時對3種麻醉劑的麻醉效果和成本進(jìn)行了比較分析，旨在為后期開展大黃魚的長途活體運輸提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗用魚選自福建省寧德市蕉城區(qū)三都澳海區(qū)，規(guī)格均一、體表無傷、生長狀況良好的大黃魚成魚，體質(zhì)量(250.52±15.30) g，體長(22.36±2.02 cm)，從養(yǎng)殖海區(qū)運至集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院試驗場暫養(yǎng)2周，連續(xù)充氣，每天早晚各投喂一次商業(yè)配合飼料，并進(jìn)行排污換水處理，其間除去死亡或存活狀況不好的魚，一周后開始試驗。

試驗用3種麻醉劑：丁香油(華碩香料油有限公司)，密度1.05 g/mL，純度(以丁香酚計)為99%，橘黃色的油狀液體，有濃重香味，不易溶于水，使用時先按照丁香油∶乙醇=1∶9的體積比配置成母液后再溶于水；MS-222魚用安定劑(上海漁夫?qū)毸a(chǎn)用品有限公司)，淡黃色液體，可直接溶于水，純度在99.5%以上；異丙酚(上海麥克林生化科技有限公司)，密度0.962 g/mL，純度為98%，乳白色脂溶性制劑，微溶于水。

1.2 麻醉試驗

試驗前先將試驗魚停食2 d，再將魚從養(yǎng)殖池轉(zhuǎn)入裝有麻醉劑的容器中，觀察魚的活動狀態(tài)。待魚進(jìn)入麻醉狀態(tài)后將其轉(zhuǎn)入干凈的海水中進(jìn)行復(fù)蘇，并用秒表記錄麻醉和復(fù)蘇過程中魚的各種行為特征出現(xiàn)的時間。不同質(zhì)量濃度麻醉劑對大黃魚的麻醉試驗中，設(shè)置丁香油質(zhì)量濃度為5、10、20、40、80 mg/L；MS-222質(zhì)量濃度為30、40、50、60、70 mg/L；異丙酚質(zhì)量濃度為0.1、0.2、0.4、0.6、0.8 mg/L。依據(jù)不同質(zhì)量濃度麻醉劑對大黃魚的麻醉效果，選擇適宜的質(zhì)量濃度對大黃魚進(jìn)行不同水溫條件下的試驗，設(shè)置水溫為10 ℃、15 ℃、20 ℃、25 ℃、30 ℃。

1.3 模擬運輸試驗

依據(jù)麻醉試驗結(jié)果，設(shè)置質(zhì)量濃度為10 mg/L的丁香油、40 mg/L的MS-222和0.2 mg/L的異丙酚對試驗大黃魚進(jìn)行麻醉，待大黃魚進(jìn)入麻醉狀態(tài)后將其放入裝有4倍魚體重量水(魚水質(zhì)量比為4∶1)、充氧的密封塑料袋內(nèi)，設(shè)置5個時間段(12 h、24 h、36 h、48 h、72 h)進(jìn)行模擬運輸試驗。每種麻醉劑試驗5袋，每袋2尾魚，將裝有大黃魚的密封塑料袋放入溫度為20 ℃、15 ℃、25 ℃的恒溫箱內(nèi)，每隔6 h對密封塑料袋進(jìn)行換氣充氧。模擬運輸12 h、24 h、36 h、48 h、72 h后將魚從塑料袋中取出放入干凈的海水中進(jìn)行復(fù)蘇，觀察試驗魚的生存狀態(tài)并計算復(fù)蘇率。

1.4 數(shù)據(jù)分析

從把魚放入裝有麻醉劑的水體中開始，到魚出現(xiàn)各種麻醉行為階段的時間來反映麻醉效果，再將其放入干凈的海水中為開始，記錄魚出現(xiàn)復(fù)蘇行為階段的時間來評估復(fù)蘇效果。復(fù)蘇率為麻醉劑作用一段時間后，從復(fù)蘇到完全復(fù)蘇的魚尾數(shù)占試驗魚總尾數(shù)的百分比。

采用Excel 2013進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，并用Origin 9.0軟件繪制相關(guān)圖表。數(shù)據(jù)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差(Mean±SE)表示，P<0.05表示有顯著性差異，P>0.05表示無顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 大黃魚麻醉階段和復(fù)蘇階段的行為狀況

在3種麻醉劑作用下，大黃魚在麻醉和復(fù)蘇階段表現(xiàn)出一系列明顯不同的行為狀態(tài)(表1)，據(jù)此可區(qū)分不同的麻醉或復(fù)蘇階段。其中，麻醉以進(jìn)入A3階段為宜，復(fù)蘇以進(jìn)入R4階段為宜。

表1 麻醉及復(fù)蘇各階段魚的行為狀況

將大黃魚放入裝有麻醉劑的容器后，起初有明顯撞壁應(yīng)激行為，一段時間后魚體對外界刺激的反應(yīng)能力降低，撞壁行為變得不明顯，鰓蓋張合頻率降低，但魚體仍然可以水平游動(A1階段)；接著魚體失去平衡，時而側(cè)翻游動(A2階段)；進(jìn)而停止游動，側(cè)躺于容器底部，不再進(jìn)行連續(xù)性游動(A3階段)，此時認(rèn)為魚體已進(jìn)入麻醉狀態(tài)。如果質(zhì)量濃度過高，麻醉魚會停止呼吸(A4階段)，這種狀態(tài)被認(rèn)為是深度麻醉狀態(tài)。經(jīng)過一定時間后，將處于A3階段的魚放入海水中進(jìn)行復(fù)蘇，一段時間后恢復(fù)呼吸(Rl階段)，隨后魚體行為逐漸恢復(fù)正常，直至完全正常(R4階段)。

2.2 不同麻醉質(zhì)量濃度的麻醉效果

圖1所示，在3種不同質(zhì)量濃度的麻醉劑下，大黃魚進(jìn)入麻醉的時間各不相同，但三者的變化趨勢是一致的。即麻醉劑的質(zhì)量濃度越高，大黃魚進(jìn)入麻醉狀態(tài)的時間越短，完全復(fù)蘇所需時間越長。丁香油在5～10 mg/L范圍內(nèi)大黃魚進(jìn)入麻醉的時間降幅最大，在10倍以上；在10～80 mg/L范圍內(nèi)時間降幅相比較小。MS-222在30～40 mg/L范圍內(nèi)大黃魚進(jìn)入麻醉的時間降幅最大；在40～50 mg/L范圍內(nèi)大黃魚進(jìn)入麻醉的時間幾乎沒有變化；在50～70 mg/L范圍內(nèi)進(jìn)入麻醉的時間降幅相對較小。異丙酚在0.1～0.8 mg/L范圍內(nèi)大黃魚進(jìn)入麻醉時間降幅差別不大。

圖1 3種麻醉劑不同質(zhì)量濃度下魚體進(jìn)入麻醉狀態(tài)(A3階段)及完全復(fù)蘇(R4階段)的時間

2.3 不同水溫下的麻醉效果

設(shè)置丁香油10 mg/L、MS-222 40 mg/L、異丙酚0.2 mg/L，探討不同水溫條件下對大黃魚休眠誘導(dǎo)所需時間的影響，試驗結(jié)果如圖2所示。在10～30 ℃的溫度范圍內(nèi)，隨著水溫的改變，魚體進(jìn)入麻醉時間均呈先增后減趨勢。在丁香油中，水溫為20 ℃時，魚體進(jìn)入麻醉時間最長；在MS-222中，水溫為15 ℃時，魚體進(jìn)入麻醉時間最長；對于異丙酚，在水溫為25 ℃時，大黃魚進(jìn)入麻醉的時間最長。

圖2 水溫對3種麻醉劑麻醉效果的影響

2.4 模擬運輸試驗的復(fù)蘇率

按照麻醉試驗得到適宜麻醉質(zhì)量濃度和水溫對大黃魚進(jìn)行模擬運輸，不同運輸時間下的復(fù)蘇率如圖3所示。由圖3可知，隨著運輸時間的延長，大黃魚復(fù)蘇率會逐漸降低。當(dāng)模擬運輸時間為24 h時，丁香油和MS-222麻醉的復(fù)蘇率為90%，而異丙酚麻醉的復(fù)蘇率為70%。

圖3 運輸時間對大黃魚復(fù)蘇率的影響

3 討論

3.1 丁香油、MS-222、異丙酚麻醉大黃魚的適宜質(zhì)量濃度選擇

Marking等[10]認(rèn)為，理想的麻醉劑質(zhì)量濃度需同時滿足被試動物3 min之內(nèi)進(jìn)入麻醉狀態(tài)，5 min之內(nèi)蘇醒的要求。

丁香油價格低廉，安全性高[11]。試驗中，丁香油質(zhì)量濃度為5 mg/L時，大黃魚長時間不能進(jìn)入麻醉狀態(tài)，可能是由于丁香油質(zhì)量濃度過低所導(dǎo)致的；在10～40 mg/L的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，大黃魚進(jìn)入麻醉時間相差不大且復(fù)蘇時間較短。由于高質(zhì)量濃度的麻醉劑會對魚體造成傷害，選擇10 mg/L的丁香油為本試驗的適宜質(zhì)量濃度，試驗結(jié)果與趙艷麗等[12]對大黃魚的麻醉效果結(jié)果一致[13]。

MS-222易溶于水，復(fù)蘇時間短[14]。對鯽魚、金魚、羅非魚的研究中表明，在運輸過程中使用MS-222既能提高活體的存活率，又能延長運輸時間，這與本試驗結(jié)果一致[15-17]。但其具有酸性，會對魚體的品質(zhì)造成一定的影響[18]。試驗中，MS-222質(zhì)量濃度為30 mg/L時，魚體不能進(jìn)入完全麻醉狀態(tài)。在40～50 mg/L的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，MS-222對大黃魚的麻醉效果相似。但50 mg/L的MS-222，對魚體的麻醉時間超過了3 min，不符合理想麻醉質(zhì)量濃度的要求。因此，40 mg/L的MS-222為本試驗的適宜質(zhì)量濃度。

異丙酚具有低濃度，高效率的特點[19]。試驗中，異丙酚的質(zhì)量濃度為0.1 mg/L時，大黃魚可在3 min內(nèi)進(jìn)入麻醉狀態(tài)，但其劑量不易掌握。且麻醉試驗初期，大黃魚的應(yīng)激水平明顯強(qiáng)于丁香油和MS-222。在0.1～0.8 mg/L的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，麻醉時間隨著麻醉劑質(zhì)量濃度的升高而縮短，與 Balko等[20]研究結(jié)果相同。質(zhì)量濃度在0.2～0.6 mg/L內(nèi)，異丙酚對大黃魚的麻醉效果無明顯差異，所以0.2 mg/L的異丙酚為本試驗大黃魚的適宜質(zhì)量濃度。

3.2 水溫對麻醉效果的影響

水溫是影響麻醉效果的重要因子。通過研究青鳉、虹鱒、斑點叉尾鮰表明，在有效質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，隨著水溫的升高，魚類進(jìn)入完全麻醉狀態(tài)所需時間會縮短[21-23]。這主要是因為魚鰓是麻醉劑進(jìn)入魚體的主要途徑，溫度升高時增加了其呼吸頻率，使得單位時間內(nèi)麻醉劑通過魚鰓的劑量增加，從而減少了魚體進(jìn)入麻醉的時間[24]。然而，本試驗結(jié)果顯示，3種麻醉劑隨著水溫的升高，進(jìn)入麻醉時間先增加后減小。在15～25 ℃時，3種麻醉劑使大黃魚進(jìn)入麻醉狀態(tài)需最長的時間，推測原因可能是15～25 ℃處于大黃魚的最適生長溫度范圍，在此溫度范圍內(nèi)，大黃魚具有較強(qiáng)抗逆性，能夠抵抗外部環(huán)境的變化，因而進(jìn)入麻醉狀態(tài)所需時間最長，但具體的機(jī)理還需要進(jìn)一步研究。也有研究表明，水溫較高時麻醉劑的效果降低，即在較高溫度下，魚麻醉運輸后的復(fù)蘇率和存活率大大降低[25]。目前，關(guān)于水溫對魚類麻醉效果的研究結(jié)果存在較大爭議，這可能與魚的種類、長度和體重、性別、狀態(tài)、壓力等等有著密切的關(guān)系[26]。

3.3 丁香油、MS-222、異丙酚模擬運輸?shù)膹?fù)蘇率及成本比較

在運輸過程中大黃魚應(yīng)激性強(qiáng)，具有較高的死亡率，但通過合理使用麻醉劑可降低其死亡率[27]。試驗結(jié)果顯示，運輸時間為12 h時，丁香油、MS-222、異丙酚的復(fù)蘇率都在80%以上。延長運輸時間至24 h，丁香油和MS-222的復(fù)蘇率為90%，而異丙酚的復(fù)蘇率僅為70%，已不具備實際運輸?shù)囊饬x。說明丁香油和MS-222的麻醉效果好，在對大黃魚進(jìn)行短距離運輸時，可優(yōu)先考慮。根據(jù)市面上出售的2種麻醉劑的價格可得，丁香油單價0.33元/mL，MS-222單價0.23元/mL，兩者售價相差不大。但是，由于丁香油的不溶性，在使用過程中需要加無水乙醇按1∶9(丁香油∶無水乙醇)的體積比配置成母液后使用，這相當(dāng)于增加了丁香油的體積，減少了用量，間接地減少了經(jīng)濟(jì)成本。綜合考慮可得，相對于其他2種麻醉劑，丁香油更適合作為大黃魚活體運輸?shù)穆樽韯?/p>

4 結(jié)論

比較了丁香油、MS-222和異丙酚3種麻醉劑對大黃魚的麻醉效果。結(jié)果顯示，當(dāng)丁香油、MS-222和異丙酚的質(zhì)量濃度分別為10 mg/L、40 mg/L、0.2 mg/L時，大黃魚的適宜麻醉水溫分別為20 ℃、15 ℃、25 ℃，其中，丁香油的麻醉效果較好，經(jīng)濟(jì)成本更低。建議在大黃魚的活體運輸中，可優(yōu)先考慮丁香油。

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