乳源木蓮果水煎液對小鼠胃腸運動功能及胃動素分泌的影響

李 鵬，艾文利，梁俊暉，沈 婕，郜文秀，高曉芬

（韶關學院醫(yī)學院，廣東 韶關512026）

乳源木蓮果為木蘭科植物乳源木蓮（Manglietia yuyuanensisLaw）秋后摘取已成熟而未開裂的果實。《中華本草》中記載其味淡，性平，具有疏肝理氣、潤腸止咳的作用，主治肝胃氣痛、脘脅作脹、便秘、老年干咳［1］。根據(jù)其功能主治，本課題組推測其對胃腸運動具有調(diào)節(jié)作用。經(jīng)查閱文獻，目前尚未見有關乳源木蓮果對胃腸運動功能作用機制的相關報道，本實驗采用碳末標記的半固體米糊推進實驗法及放射免疫法觀察乳源木蓮果水煎液對小鼠胃腸運動功能及胃動素（MTL）的影響，現(xiàn)報道如下。

1 實驗材料

1.1 動物 健康SPF級昆明種小鼠50只，質(zhì)量18～22 g，雌雄各半，由廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供，動物許可證號：SCXK（粵）2018-0002。動物飼養(yǎng)溫度20～25℃，相對濕度50%～70%，標準飼料喂養(yǎng)。

1.2 藥物與試劑 乳源木蓮果采自廣東省韶關市天井山粵凰生態(tài)農(nóng)業(yè)科技園，經(jīng)韶關市藥品檢驗所鑒定為木蘭科植物乳源木蓮Manglietia yuyuanensisLaw的果實；胃復安（甲氧氯普胺）片，由山西云鵬制藥有限公司生產(chǎn)，批號：F181201；羧甲基纖維素鈉，由廣州捷倍斯生物科技有限公司提供，批號：1912GB0019；胃動素（MTL）酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，由武漢云克隆科技股份有限公司提供，批號：L200308913。

1.3 儀器 酶標儀（南京華東電子集團醫(yī)療裝備有限責任公司）；ARII40/C電子天平［奧豪斯儀器（上海）有限公司］。

2 方法

2.1 乳源木蓮果水煎液的制備 稱取乳源木蓮果40 g，用1 000 ml蒸餾水浸泡0.5 h，加熱煮沸60 min，兩層紗布過濾，濾渣加水500 ml，煮沸30 min，過濾，合并2次濾液，濃縮為100 ml（按生藥量0.4 g/ml計）備用，以此作為高劑量組的給藥濃度，再用蒸餾水配制中、低劑量組的給藥濃度分別為0.2 g/ml、0.1 g/ml。

2.2 半固體營養(yǎng)糊的制備［2］取10 g羧甲基纖維素鈉，溶于250 ml蒸餾水中，分別加入16 g奶粉、8 g糖、8 g淀粉和2 g活性炭末，攪拌均勻。配制成300 ml約300 g的黑色半固體糊狀物。冰箱冷藏，用時恢復至室溫。

2.3 動物分組及給藥 取小鼠50只，隨機分成5組：空白對照組，胃復安組，乳源木蓮果水煎液高、中、低劑量組。每組10只。其中空白對照組灌胃給予生理鹽水，胃復安組灌胃給予胃復安溶液（劑量為10 mg/kg），乳源木蓮果水煎液高、中、低劑量組給藥劑量分別為相當于生藥量8 g/kg、4 g/kg、2 g/kg，給藥容積均為20 ml/kg。以上各組每日給藥1次，連續(xù)給藥5 d，期間自由飲食。

2.4 觀察指標

2.4.1 對小鼠胃排空及小腸推進運動的影響 各組小鼠于末次給藥前禁食（不禁水）18 h，末次給藥后40 min各組小鼠灌胃給予半固體糊，每只0.8 ml。20 min后脫頸椎處死小鼠，摘眼球取血制備血清，開腹，結(jié)扎胃賁門和幽門，取胃，用濾紙擦干后稱全重，然后沿胃大彎剪開胃體，洗去胃內(nèi)容物后擦干，稱凈重。以胃全重和胃凈重之差為胃內(nèi)殘留物重量，計算胃內(nèi)殘留物占所灌半固體糊的重量百分比，即為胃殘留率。胃殘留率=（胃全重-胃凈重）/半固體糊重×100%。同時迅速取出小腸，輕輕剝離后直鋪于白紙上，測量幽門至回盲腸部全長，及幽門至黑色半固體糊前沿的距離。以幽門至黑色半固體糊前沿的距離占幽門至回盲部全長的百分率為小腸推進率。

2.4.2 小鼠血清胃動素（MTL）的測定 采用放射免疫法測定小鼠血清胃動素的含量，具體步驟嚴格按照試劑盒說明進行。

2.5 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用獨立樣本t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

3 結(jié) 果

3.1 各組小鼠胃殘留率和小腸推進率比較 見表1。表1結(jié)果顯示，與空白對照組比較，胃復安組及乳源木蓮果高、中劑量組可降低胃殘留率，加速胃排空（P＜0.01或P＜0.05）；胃復安組及乳源木蓮果高、中、低劑量組均可提高小腸推進率，加速小腸運動（P＜0.01或P＜0.05）。

3.2 各組小鼠血清胃動素含量比較 見表2。表2結(jié)果顯示，乳源木蓮果高、中劑量組可明顯增加小鼠血清中MTL含量，與空白對照組比較有顯著性差異（P＜0.01或P＜0.05）。

4 討 論

胃腸運動功能障礙性疾病，如胃食管反流病、功能性消化不良、胃輕癱、假性腸梗阻、腸易激綜合征及慢性便秘等是消化內(nèi)科的常見病，臨床上常應用促胃腸動力藥來恢復或增強已減弱的胃腸運動功能，常用的促胃腸動力藥有胃復安、嗎丁啉、西沙比利等，療效肯定，但均有不同程度的副作用［3］。中醫(yī)治療胃腸運動障礙疾病有豐富的經(jīng)驗，從中藥中尋找開發(fā)作用強、安全性好的促胃腸動力藥物是當前研究的熱點。

表1 各組小鼠胃殘留率和小腸推進率比較 （±s）

表1 各組小鼠胃殘留率和小腸推進率比較 （±s）

注：與空白對照組比較，①P＜0.05，②P＜0.01

組 別空白對照組胃復安組乳源木蓮果高劑量組乳源木蓮果中劑量組乳源木蓮果低劑量組n 10 10 10 10 10胃殘留率（%）80.63±13.38 33.00±10.87②41.50±11.65②66.00±16.11①70.38±15.12小腸推進率（%）58.60±9.48 76.67±4.84②74.47±5.58②67.48±7.76②65.14±7.40①

表2 各組小鼠血清胃動素含量比較 （±s）

表2 各組小鼠血清胃動素含量比較 （±s）

注：與空白對照組比較，①P＜0.05，②P＜0.01

組 別空白對照組胃復安組乳源木蓮果高劑量組乳源木蓮果中劑量組乳源木蓮果低劑量組n 10 10 10 10 10 MTL（pg/ml）267.01±52.10 296.15±64.09 367.55±56.64②340.94±66.59①275.90±97.50

乳源木蓮主要分布在我國廣東粵北山區(qū)（乳源）等地區(qū)，具有良好的藥用、觀賞和經(jīng)濟價值。本研究參照邢建峰等［2］改良的小鼠胃排空及小腸推進的實驗方法，采用營養(yǎng)性半固體黑色米糊同時測定小鼠胃排空及小腸推進運動。結(jié)果顯示，乳源木蓮果水煎液高、中、低劑量組均可顯著加速小腸推進運動，高、中劑量組可促進小鼠胃排空。

在完整機體內(nèi)，胃腸運動的調(diào)節(jié)由交感神經(jīng)系統(tǒng)、副交感神經(jīng)系統(tǒng)、腸神經(jīng)系統(tǒng)及多種體液因素共同調(diào)控［4］。其中體液調(diào)節(jié)主要為胃腸激素，如促胃液素、胃動素等［5］。胃動素是由22個氨基酸組成的直鏈多肽，其主要作用是影響胃腸道的運動，特別是作為一種消化間期激素起作用［6］。有研究表明，MTL的作用機制為刺激胃底收縮，增加胃內(nèi)壓，刺激小腸產(chǎn)生位相性收縮活動，增加結(jié)腸尾端的電活動等共同作用而促進胃排空、小腸分節(jié)運動及結(jié)腸蠕動［7］。目前，紅霉素作為胃動素受體激動劑，在治療胃腸動力性疾病如胃食管反流病、早產(chǎn)兒喂養(yǎng)不耐受、便秘、胃輕癱、腸梗阻、膽石癥等取得了較好的效果［8］，但紅霉素為抗生素，其造成的耐藥性風險不容忽視。本研究采用放射免疫法測定小鼠血清胃動素的含量，結(jié)果表明乳源木蓮果水煎液高、中劑量組可顯著提高小鼠血清胃動素水平。

綜上所述，乳源木蓮果水煎液可加速小鼠胃排空和小腸推進運動，其作用機制可能與促進內(nèi)源性MTL分泌有關，而乳源木蓮果影響胃腸運動功能的有效成分及確切機制有待進一步探討研究。