胸腹水癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)的應(yīng)用及臨床價(jià)值評估分析

古麗扎提·阿哈泰，沙蕾

新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)院檢驗(yàn)科，新疆哈密 830000

胸腹水癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)是臨床檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的重要檢測項(xiàng)目，對于腫瘤疾病的診斷具有重要的意義[1]。臨床上多種疾病可以導(dǎo)致胸腹水的出現(xiàn)，包括炎癥疾病、癌癥疾病等。胸腹水癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)是臨床鑒別疾病良性、惡性的重要參考，對于疾病的診斷具有重要的意義。目前檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)對胸腹水癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)的研究尚不夠深入，容易在臨床診斷的過程中出現(xiàn)差錯(cuò)。同時(shí)胸腹水癌細(xì)胞形態(tài)多樣，嚴(yán)格規(guī)范胸腹水標(biāo)本的處理和標(biāo)本鏡檢對于提高癌細(xì)胞的檢出率具有重要的意義。如何通過改進(jìn)胸腹水標(biāo)本的處理方法提高形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性是臨床需要重點(diǎn)探究的問題。該研究納入該院2019 年1—12 月收治的50 例患者探討胸腹水癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)的應(yīng)用及臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入該院收治的50 例患者，其中男31 例，女19例；年齡 43～72 歲，平均（61.3±4.2）歲；其中肺癌 39例，肝癌 5 例，卵巢癌 3 例，胃癌 3 例。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：患者臨床上確診為惡性腫瘤癌性胸腹水，病歷完整；患者簽署該研究知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：妊娠期或哺乳期女性；合并精神分裂癥等嚴(yán)重精神障礙性疾病的患者； 合并心肺功能失代償?shù)幕颊?。該研究?jīng)該院倫理委員會(huì)審批通過。

1.3 方法

對納入的所有患者進(jìn)行胸腹水癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)。將抽取的胸腹水裝在乙二胺四乙酸二鉀(EDTAK2) 抗凝劑塑料帶蓋標(biāo)識專用試管，將標(biāo)本差速離心后棄去上清液進(jìn)行Wright-Giemsa 混合染色和細(xì)胞免疫化學(xué)染色，晾干玻片。檢驗(yàn)過程中對實(shí)驗(yàn)標(biāo)本處理方法、放置時(shí)間和推片標(biāo)本量進(jìn)行調(diào)整。實(shí)驗(yàn)標(biāo)本處理方法：第一種方法是離心處理后將試管內(nèi)的上清液倒掉，第二種方法是離心處理后將試管管底細(xì)胞沉渣端朝著里面逐漸棄去上清液，同時(shí)使用棉球?qū)堃何?。放置時(shí)間為：分別將標(biāo)本在專用是試管中放置1、2、4、16 h 后進(jìn)行推片觀察離心推片情況。推片標(biāo)本量為：一種采用加厚推片，一種采用普通推片。

1.4 觀察指標(biāo)

觀察不同處理方法殘留細(xì)胞液和檢出率；對比各個(gè)時(shí)間段離心推片情況；比較不同推片方法癌細(xì)胞檢出率。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，組間比較采用 χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同處理方法殘留細(xì)胞液和檢出率比較

第一種方法殘留細(xì)胞液≥100 μL 高于第二種方法，第一種方法方法檢出率42.00%低于第二種58.00%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.29，P＜0.05）。見表1。

表1 不同處理方法殘留細(xì)胞液和檢出率比較

2.2 各個(gè)時(shí)間段離心推片情況比較

2 h 內(nèi)離心推片情況無明顯變化，4 h 以后離心推片核固縮、碎裂明顯。見表2。

表2 各個(gè)時(shí)間段離心推片情況比較

2.3 不同推片方法癌細(xì)胞檢出率比較

加厚推片癌細(xì)胞檢出率68.00%高于普通推片42.00%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=12.36，P＜0.05）。見表3。

表3 不同推片方法癌細(xì)胞檢出率比較

3 討論

惡性腫瘤疾病是臨床研究的重點(diǎn)難點(diǎn)問題，近年來隨著人口老齡化趨勢的發(fā)展和生活環(huán)境的不斷惡化，惡性腫瘤疾病的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢[2]。惡性腫瘤疾病癌細(xì)胞容易發(fā)生侵犯和轉(zhuǎn)移，并伴有相關(guān)的并發(fā)癥。癌細(xì)胞侵犯胸膜、腹膜組織后容易引起胸水、腹水，嚴(yán)重時(shí)對患者呼吸等功能活動(dòng)產(chǎn)生影響[3]。胸水對胸膜腔的壓迫可以導(dǎo)致局部肺泡舒張障礙，局部血氧交換受到影響，患者出現(xiàn)不同程度的呼吸困難癥狀。腹水嚴(yán)重時(shí)患者可以出現(xiàn)腹部膨脹、腹脹、腹痛等不適。然而，臨床上炎性疾病也可以出現(xiàn)胸腹水，臨床需要將炎性胸腹水和癌性胸腹水進(jìn)行鑒別，胸腹水的形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果對于疾病的診療具有重要的影響。胸腹水癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)是臨床診斷腫瘤疾病最重要的方法之一，通過尋找胸腹水中癌細(xì)胞可以為臨床疑難腫瘤疾病的診斷提供重要的診斷證據(jù)。胸腹水癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)對于檢驗(yàn)技術(shù)的要求較高，遺漏胸腹水癌細(xì)胞的診斷對于患者的病情治療將帶來嚴(yán)重的危害。濃縮細(xì)胞量的處理方法有利于檢驗(yàn)過程中獲得更高的癌細(xì)胞檢出率。雖然通過將胸腹水進(jìn)行多次離心后進(jìn)行形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)可以提高單位容積中癌細(xì)胞的量，但該方法對于胸腹水標(biāo)本量的要求較高，同時(shí)需要繁多的操作步驟，在較長時(shí)間的檢驗(yàn)過程中對于標(biāo)本的抗凝要求也更加苛刻。既往臨床采用直接棄去離心管上清液的方法進(jìn)行檢驗(yàn)，但檢驗(yàn)癌細(xì)胞檢出率較低。該研究探討胸腹水癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)的應(yīng)用及臨床價(jià)值。結(jié)果表明，第一種方法殘留細(xì)胞液≥100 μL 高于第二種方法，第一種方法方法檢出率42.00%低于第二種 58.00%（χ2=8.29，P＜0.05）。加厚推片癌細(xì)胞檢出率 68.00%高于 普 通 推 片 42.00%（χ2=12.36，P ＜0.05）。該研究結(jié)果和高禮信[4]的研究結(jié)果一致性較高，其研究結(jié)果表明研究組方法殘留細(xì)胞液≥100 μL高于第二種方法，第一種方法方法檢出率40.00%低于第二種57.14%（P＜0.05）。加厚推片癌細(xì)胞檢出率70.00%高于普通推片 47.00%（P＜0.05）。結(jié)合研究結(jié)果分析，離心處理后上清液的處理對于提高癌細(xì)胞的檢出率具有重要意義，同時(shí)需提高對于加厚推片的重視。通過對處理方法進(jìn)行改進(jìn)，將離心后的試管傾斜80～90℃30 s 并用一顆棉球吸去過多的殘余液體，從而使得細(xì)胞得以更進(jìn)一步的濃縮，使得沉淀的殘余液量比一般方法減少1/2 以上。單位體積內(nèi)細(xì)胞的增加有利于推片的制備。由于標(biāo)本中細(xì)胞越多越容易檢出癌細(xì)胞，將推片量由3 μL 提高到 6 μL，在研究中發(fā)現(xiàn)體液脫落細(xì)胞學(xué)檢查制成的推片以厚片更加適宜。研究中發(fā)現(xiàn)5～6 μL 的加厚推片可以更加清晰地顯示細(xì)胞的結(jié)構(gòu)情況，分析具體原因?yàn)榧雍裢破沟眉?xì)胞大量在局部聚集，可以減少臨床檢驗(yàn)科工作人員鏡下觀察耗費(fèi)的時(shí)間，更容易找到目標(biāo)癌細(xì)胞并對細(xì)胞的來源進(jìn)行初步評判，從而提高癌細(xì)胞的檢出率。同時(shí)在觀察胸腹水癌細(xì)胞形態(tài)的過程中需要考慮到過多紅細(xì)胞癌細(xì)胞檢出的影響。癌細(xì)胞對胸腹膜中小血管的侵犯損害不可避免帶來紅細(xì)胞，使得胸腹水中的紅細(xì)胞增多并對觀察造成影響。胸腹水中的紅細(xì)胞層會(huì)影響殘留細(xì)胞液量，臨床檢驗(yàn)過程中可以向離心管中加入適量的低滲氯化鉀溶液破壞紅細(xì)胞結(jié)構(gòu)，從而在離心操作的步驟中將沉淀物制片。細(xì)胞的退行性改變也會(huì)對胸腹水細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)造成一定的影響，胸腹水標(biāo)本的及時(shí)檢驗(yàn)有利于維持標(biāo)本的新鮮程度。胸腹水標(biāo)本在放置的過程中會(huì)逐步出現(xiàn)細(xì)胞的退化、 空泡、核碎裂和固縮等改變。通過檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)胸腹水標(biāo)本放置2 h 以內(nèi)細(xì)胞形態(tài)不會(huì)發(fā)生明顯的改變，而在放置4 h后進(jìn)行觀察可以看到明顯的核固縮、碎裂改變。同時(shí)，部分胸腹水標(biāo)本細(xì)胞形態(tài)改變在標(biāo)本獲得時(shí)已經(jīng)出現(xiàn)，臨床在檢驗(yàn)過程中需要加強(qiáng)對不同病理狀態(tài)下的細(xì)胞形態(tài)識別，需要重點(diǎn)區(qū)分細(xì)胞形態(tài)改變是否由推片機(jī)械性因素造成類似退化性變化。同一張標(biāo)本中，當(dāng)部分區(qū)域細(xì)胞退化而部分區(qū)域細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰時(shí)，即為假性細(xì)胞退化。單核巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞是標(biāo)本中最容易出現(xiàn)空泡改變的細(xì)胞，然而其對鏡下癌細(xì)胞形態(tài)的觀察影響不大。淋巴細(xì)胞是最不容易發(fā)生形態(tài)變化的細(xì)胞，空泡改變和退化改變較少，但淋巴細(xì)胞可以在尾部出現(xiàn)涂抺改變影響觀察。癌細(xì)胞和間皮細(xì)胞是標(biāo)本中最容易出現(xiàn)退化的細(xì)胞，在放置的過程中兩種細(xì)胞發(fā)生相似的形態(tài)學(xué)改變，從而對鏡下觀察造成干擾。胸腹水標(biāo)本細(xì)胞形態(tài)學(xué)的觀察至關(guān)重要，癌細(xì)胞胞體和胞核多表現(xiàn)為不規(guī)則形態(tài)，細(xì)胞體積較大或可以成簇分布，核仁通常大而明顯，胞質(zhì)多為豐富而染色不均。退行性改變的癌細(xì)胞也會(huì)具有明顯的惡性形態(tài)改變，尤其是胞核的畸形和大核仁仍然較為明顯[5-6]。相比之下，間皮細(xì)胞退化后形態(tài)與退化后的癌細(xì)胞存在明顯的差異，有利于臨床觀察的鑒別。細(xì)胞免疫化學(xué)染色對于細(xì)胞腫瘤的鑒別也具有一定的作用。胸腹水標(biāo)本細(xì)胞容易受到其他多種外界因素的干擾，包括疾病病因、體液營養(yǎng)滲透壓、體液營養(yǎng)成分、試管中標(biāo)本量、試管的材質(zhì)、溫度等多種因素。通過查閱相關(guān)的文獻(xiàn)并結(jié)合該研究的相關(guān)結(jié)果建議在處理胸腹水標(biāo)本的方法上可以采用EDTA-K2 抗凝劑塑料帶蓋標(biāo)識專用試管盛裝標(biāo)本并對標(biāo)本在2 h 內(nèi)及時(shí)送檢處理。臨床上有遇到夜間進(jìn)行胸腹水抽取的病例，對于來不及送檢的夜間標(biāo)本可以防止于4 ℃冰箱次日及時(shí)送檢處理，該過程不會(huì)對細(xì)胞形態(tài)造成較大的影響[7]。鏡檢工作人員的經(jīng)驗(yàn)也對癌細(xì)胞的檢出具有一定的影響，低倍和油鏡是鏡檢的兩個(gè)重要環(huán)節(jié)，通常在鏡檢的過程中需要采用低倍鏡尋找可疑的癌細(xì)胞然后再用油鏡下觀察。低倍鏡觀察的過程中需要重點(diǎn)關(guān)注尾部區(qū)域，同時(shí)也不能忽視推片邊端和頭部區(qū)域。推片的體部不作為推片鏡檢過程中重點(diǎn)考慮的緩解，該部位細(xì)胞的情況不會(huì)對鏡檢結(jié)果帶來較大的影響。建議臨床中對于細(xì)胞數(shù)目較少的標(biāo)本和陰性標(biāo)本必須采用至少3 張或以上的標(biāo)本數(shù)目進(jìn)行更加詳細(xì)的觀察； 同時(shí)對于高度可疑的病例采用更多的標(biāo)本進(jìn)行低倍鏡觀察，從而最大限度地提高癌細(xì)胞的檢出率[4，,8]。

綜上所述，胸腹水癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)的應(yīng)用價(jià)值顯著，檢驗(yàn)過程中加強(qiáng)標(biāo)本處理、標(biāo)本放置時(shí)間、涂片厚度等處理有利于提高癌細(xì)胞的檢出情況，避免誤診、漏診。胸腹水癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)值得臨床高度重視。