“消痘靈”口崩片的處方優(yōu)化及內(nèi)外合治藥效研究

李澤福，曹鳳媚，胡等慧

1.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 第三附屬醫(yī)院，廣東 廣州 510378；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 102488

“消痘靈”水煎液是廣州中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院的院內(nèi)制劑，主要由金銀花、黃柏、丹參、當(dāng)歸、三顆針等中藥組成。該方具有清熱燥濕、瀉火解毒、養(yǎng)血活血之功效，臨床上主要用于治療痤瘡等癥，其有效率高達(dá)70%左右?，F(xiàn)代藥理研究表明，方中主藥金銀花不僅在體外對(duì)多種細(xì)菌具有明顯的抑制作用，而且還能預(yù)防再次感染；黃柏、三顆針對(duì)病毒有不同程度的抑制作用；丹參中丹參酮能明顯抑制皮脂腺的分泌，且對(duì)痤瘡丙酸桿菌高度敏感；當(dāng)歸能夠通過(guò)對(duì)毛孔的收斂作用及對(duì)血管細(xì)胞活性的提升機(jī)制綜合改善皮膚質(zhì)量，達(dá)到對(duì)痤瘡治療的目的[1-5]。

“消痘靈”水煎液治療痤瘡具有很好的療效，但存在攜帶、儲(chǔ)存不便，易霉變，患者耐受性差等缺點(diǎn)。相比于水煎液而言，口崩片作為一種新型速釋制劑，具有易儲(chǔ)存、易運(yùn)輸及攜帶、服用方便、口感好、穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。同時(shí)，結(jié)合中醫(yī)“內(nèi)治治本，外治治標(biāo)”的理念，口服口崩片結(jié)合皮膚擦涂同時(shí)給藥，能夠?qū)崿F(xiàn)中醫(yī)“內(nèi)外同治”增強(qiáng)療效的目的。因此，本研究篩選“消痘靈”口崩片的處方，考察其內(nèi)外合治的藥效及抑菌能力，以期為醫(yī)院制劑的創(chuàng)新及臨床治療提供研究思路。

1 材料

1.1 儀器

ZP33型旋轉(zhuǎn)式壓片機(jī)(海信源制藥機(jī)械有限公司)；FA2004型分析天平(上海雙旭電子科技有限公司)；FT104B型休止角測(cè)定儀(寧波海曙瑞柯儀器有限公司)；SY-6D型片劑四用測(cè)試儀(上海圣科儀器設(shè)備有限公司)。

1.2 試藥

羧甲基纖維素鈉(CMC-Na，批號(hào)：171008)、交聯(lián)聚維酮XL(PVPP-XL，批號(hào)：141006)、羧甲基淀粉鈉(CMS-Na，批號(hào)：171204)、低取代羥丙基纖維素(L-HPC，批號(hào)：161003)均購(gòu)自安徽山河藥用輔料股份有限公司；微晶纖維素(上海昌為醫(yī)藥輔料技術(shù)有限公司，批號(hào)：P0101F1510)；微粉硅膠(批號(hào)：171110)、硬脂酸鎂(批號(hào)：170228)均購(gòu)自安徽山河藥用輔料股份有限公司；山梨醇(批號(hào)：170819)、甘露醇(批號(hào)：161222)均購(gòu)自西安天正藥用輔料有限公司；金花消痤丸(昆明中藥廠有限公司，批號(hào)：271257)；中性福爾馬林固定液(10%，北京博奧拓達(dá)科技有限公司)。

金銀花、黃柏、丹參、當(dāng)歸、三顆針等均為市購(gòu)，經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院李澤福主管中藥師鑒定均為正品。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)昆明種小鼠，雄性，5周齡，體質(zhì)量20～25 g[合格證號(hào)：SCXK9(粵)2018-0002]購(gòu)于廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。審批單位：廣州中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院，批號(hào)：1903009。

2 方法與結(jié)果

2.1 口崩片檢測(cè)方法

2.1.1硬度測(cè)定 取5片已制備的“消痘靈”口崩片置于硬度儀中測(cè)定，取其平均值記為口崩片硬度[6]。

2.1.2崩解時(shí)限的測(cè)定 崩解時(shí)限測(cè)定方法依據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》(以下簡(jiǎn)稱《中國(guó)藥典》)2015年版，以口崩片接觸水面開始，至全部顆粒通過(guò)篩網(wǎng)的時(shí)間止[6]。

2.1.3脆碎度測(cè)定 片劑脆碎度測(cè)定方法依據(jù)《中國(guó)藥典》2015年版，以未檢出斷裂、龜裂或粉碎片，質(zhì)量減失未超過(guò)1%為合格[6]。

2.2 “消痘靈”口崩片的制備

2.2.1干膏粉的制備 稱取處方量中藥，80 ℃水提2次，合并水提液并減壓濃縮得浸膏，將適量微粉硅膠加入上述浸膏中，真空干燥得干浸膏，粉碎，過(guò)100目篩，得干浸膏粉。

2.2.2口崩片的制備 稱取上述干浸膏粉及崩解劑、填充劑、微粉硅膠、硬脂酸鎂等輔料適量，混勻，過(guò)80目篩，粉末直壓法壓片，控制片劑硬度為4～7 kg。

2.3 單因素考察

2.3.1崩解劑考察 固定干浸膏粉添加量20%，潤(rùn)滑劑微粉硅膠20%、硬脂酸鎂0.5%，填充劑微晶纖維素、山梨醇各20%，片劑硬度4～7 kg，考察不同崩解劑對(duì)片劑崩解時(shí)限的影響。

結(jié)果表明，CMC-Na和CMS-Na崩解時(shí)限分別為401、323 s，不符合《中國(guó)藥典》2015年版規(guī)定。L-HPC和PVPP-XL崩解時(shí)限分別為189、180 s，崩解效果較優(yōu)，符合《中國(guó)藥典》2015年版規(guī)定。考慮到生產(chǎn)成本，最終選用L-HPC作為崩解劑進(jìn)行處方篩選。

2.3.2潤(rùn)滑劑考察 固定干浸膏粉添加量20%，填充劑微晶纖維素、山梨醇，崩解劑L-HPC各20%，片劑硬度4～7 kg。考察潤(rùn)滑劑微粉硅膠和硬脂酸鎂對(duì)粉末流動(dòng)性、片劑粘沖程度及崩解時(shí)限的影響，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 不同潤(rùn)滑劑對(duì)粉末流動(dòng)性和崩解時(shí)限的影響

結(jié)果表明，微粉硅膠和硬脂酸鎂兩者以一定的比例(4∶1)混合使用時(shí)粉末的流動(dòng)性好，且崩解時(shí)限最優(yōu)。

2.3.3填充劑考察 固定干浸膏粉添加量20%、潤(rùn)滑劑微粉硅膠2%、硬脂酸鎂0.5%、崩解劑L-HPC 20%、片劑硬度4～7 kg，考察不同填充劑對(duì)崩解時(shí)間影響，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 不同填充劑對(duì)口崩片崩解時(shí)限的影響

由表2可知，不同填充劑混合使用的效果明顯優(yōu)于單一填充劑的使用，以山梨醇和微晶纖維素混合作為填充劑時(shí)崩解時(shí)限為優(yōu)，尤其以山梨醇-微晶纖維素比例為1∶3和1∶1為優(yōu)，兼顧口感，微晶纖維素用量過(guò)大增強(qiáng)沙礫感，故選擇填充劑為山梨醇和微晶纖維素1∶1。

2.4 Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)選“消痘靈”口崩片的成型工藝

2.4.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果 依據(jù)前期單因素試驗(yàn)和預(yù)試驗(yàn)，設(shè)定將藥粉用量(A)、崩解劑用量(B)、微粉硅膠和硬脂酸鎂用量比(C)為自變量，口崩片綜合評(píng)分為評(píng)價(jià)指標(biāo)，綜合評(píng)分按公式(1)計(jì)算?？疾旄饕蛩貙?duì)口崩片成型工藝的影響，見(jiàn)表3～4。

綜合評(píng)分=外觀×20%+硬度×20%+脆碎度×20%+崩解時(shí)限×40%

(1)

表4 Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)選制備工藝實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及其結(jié)果

2.4.2模型擬合 上述數(shù)據(jù)用Design-Expert軟件分析，并以Y對(duì)變量進(jìn)行模型擬合，得二次多項(xiàng)式回歸方程：Y=78.80-4.87A-0.12B+4.50C-1.25AB-1.50AC+2.50BC+0.72A2-6.78B2+4.98C2，r=0.991 1。由表5可知，P<0.01，F(xiàn)=87.10，表明模型差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；失擬項(xiàng)P=0.332 95>0.01，失擬項(xiàng)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明該模型擬合度和可信度均有效，誤差小，可以用此模型對(duì)“消痘靈”口崩片的制備工藝進(jìn)行分析和預(yù)測(cè)。

表5 “消痘靈”口崩片處方響應(yīng)面結(jié)果方差分析

2.4.3響應(yīng)面優(yōu)化分析 根據(jù)擬合方程，采用Design-Expert V8.0.6.1軟件繪制各因素指標(biāo)變化對(duì)“消痘靈”口崩片綜合評(píng)分影響的等高線圖和響應(yīng)面圖，見(jiàn)圖1～3。

圖1 藥粉量-崩解劑量對(duì)綜合評(píng)分影響

圖2 藥粉量-微粉硅膠∶硬脂酸鎂比對(duì)綜合評(píng)分影響

圖3 崩解劑量-微粉硅膠∶硬脂酸鎂比對(duì)綜合評(píng)分影響

從圖1～3可以看出，口崩片綜合評(píng)分與A和C成正比，與B成拋物線。即在一定范圍內(nèi)，隨著A和口崩片用量的增加，綜合評(píng)分隨之增加；隨著B的增加，綜合評(píng)分先增大后減小。

2.4.4優(yōu)化結(jié)果 分析回歸模型并結(jié)合實(shí)際情況，“消痘靈”口崩片的最佳制備工藝為藥粉量20%、崩解劑量20%、微粉硅膠-硬脂酸鎂為4∶1。

2.5 “消痘靈”口崩片的優(yōu)化制備工藝

按處方量浸膏粉20%、微晶纖維素20%、山梨醇20%、L-HPC 20%、阿斯巴甜0.50%、微粉硅膠2%、硬脂酸鎂0.5%，采用粉末直接壓片法壓片，片劑硬度為4～7 kg、崩解時(shí)限45～54 s、脆碎度0.93～0.98，表面淺棕色，光滑，有光澤，酸甜適中，稍有沙礫感，可接受，片質(zhì)量0.4 g，浸膏質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%。

2.6 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

按最優(yōu)處方配比制備3批“消痘靈”口崩片進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果所得口崩片片形完整，崩解時(shí)限、硬度及脆碎度均符合《中國(guó)藥典》2015年版要求，具體結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 “消痘靈”口崩片處方驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

2.7 藥效學(xué)研究

2.7.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥 24只雄性昆明種小鼠隨機(jī)分成對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、口崩片內(nèi)治組、口崩片內(nèi)外合治組共4組。對(duì)照組給予等體積0.9%氯化鈉溶液，陽(yáng)性組給予金花消痤丸270 mg·kg-1·d-1，“消痘靈”口崩片內(nèi)治組給360 mg·kg-1·d-1(取適量藥物粉末用蒸餾水配成溶液)、口崩片內(nèi)外合治組給予“消痘靈”口崩片的同時(shí)配合口崩片水溶液擦涂，其中口服給藥量同“消痘靈”口崩片內(nèi)治組，連續(xù)給藥14 d。

2.7.2測(cè)定方法 給藥14 d后，小鼠脫頸椎處死，剔除小鼠腹部的被毛，摘取下側(cè)腹部皮脂腺斑組織，放入8～10倍體積的中性福爾馬林組織固定液中，蘇木素-伊紅(HE)染色切片(蘇木素染細(xì)胞核、伊紅染細(xì)胞質(zhì))，并在顯微鏡下觀測(cè)其組織結(jié)構(gòu)。

2.7.3HE染色結(jié)果 如圖4所示，對(duì)照組小鼠的皮脂腺排列疏松、整齊且部分開口于毛囊，結(jié)構(gòu)完整。而病理情況下，皮脂腺會(huì)發(fā)生相應(yīng)變化，體積變大而飽滿，數(shù)量多且排列緊密。本研究根據(jù)各給藥組皮脂腺變化情況判斷，各組病理狀態(tài)均有所改善，其中“消痘靈”口崩片內(nèi)外合治組皮脂腺最小、腺體萎縮程度最重，且排列最疏松；然后依次是“消痘靈”口崩片內(nèi)治組和陽(yáng)性對(duì)照組。

注：A.空白對(duì)照組；B.陽(yáng)性對(duì)照組；C.口崩片內(nèi)治組；D.口崩片內(nèi)外合治組。

由以上結(jié)果可知，口服金花消痤丸在短時(shí)間內(nèi)無(wú)法顯著改變小鼠的皮脂腺分泌情況，但“消痘靈”口崩片對(duì)皮脂腺組織有一定影響，可使皮脂腺發(fā)生萎縮，在一定程度上控制皮脂分泌，且內(nèi)外合治組的效果更優(yōu)。

2.8 抑菌實(shí)驗(yàn)

2.8.1“消痘靈”口崩片水溶液的制備 取一定量口崩片溶于水，配置成不同質(zhì)量濃度的口崩片水溶液，其水溶液質(zhì)量濃度由高到底依次為300、275、250、225、200、175、150、130、100、75、50、25 mg·mL-1。

2.8.2“消痘靈”口崩片最低抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)的測(cè)定 取一次性無(wú)菌96孔平底微量培養(yǎng)板4個(gè)，分別標(biāo)記為 A、B、C、D，用來(lái)實(shí)驗(yàn)糠秕馬拉色菌、金黃色葡萄球菌、痤瘡丙酸桿菌和表皮葡萄球菌。采用微量移液槍向各板孔中加入相應(yīng)的微生物培養(yǎng)液100 μL，從藥物稀釋液管中各取100 μL，按高質(zhì)量濃度到低質(zhì)量濃度的順序加入到12至1號(hào)孔，各濃度做3復(fù)孔，培養(yǎng)24～48 h。隨后每孔吸取各混懸液0.1 mL接種于固體培養(yǎng)基中，于37 ℃再次培養(yǎng)24～48 h，觀察各平板是否有菌落產(chǎn)生。

2.8.3MIC及MBC測(cè)定結(jié)果 “消痘靈”口崩片水溶液對(duì)4種致病菌MIC、MBC實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表7。

表7 “消痘靈”口崩片的MIC、MBC測(cè)定結(jié)果 mg·mL-1

3 討論

痤瘡是一種好發(fā)于顏面部的慢性炎癥性疾病，臨床治療中，與使用抗生素相比，中藥不僅能夠提高人體免疫力，發(fā)揮非特異性抗菌作用，而且耐藥性低。本研究通過(guò)對(duì)主要痤瘡致病菌進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)研究，證實(shí)了中藥復(fù)方“消痘靈”口崩片能夠有效抑制痤瘡丙酸桿菌等4種致病菌的生長(zhǎng)，對(duì)痤瘡具有一定的治療作用，同時(shí)也說(shuō)明，通過(guò)粉末直壓法制備口崩片的工藝并未破壞抗菌的有效成分，體現(xiàn)出了中藥抗菌的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，值得推廣使用。

口腔崩解片是近幾年來(lái)一種新型速釋制劑，其制備工藝主要有粉末直壓法、噴霧干燥法、濕法制粒壓片等。相比較而言，粉末直接壓片法制備工藝簡(jiǎn)單、成本低廉，同時(shí)對(duì)處方要求高，尤其是對(duì)中藥提取浸膏來(lái)說(shuō)，較難實(shí)現(xiàn)同時(shí)滿足流動(dòng)性、可壓性和崩解限度。痤瘡患者主體為青少年，服用中藥湯劑順應(yīng)性差，而口崩片不需要水送服，可以在口腔內(nèi)迅速崩解，效果與口服液/中藥湯劑接近，且口感好，有時(shí)尚感，便于接受，且穩(wěn)定性好，便于儲(chǔ)存、運(yùn)輸、攜帶。

內(nèi)外同治是在中醫(yī)理論的指導(dǎo)下，通過(guò)內(nèi)服外用達(dá)到治療病癥的目的。一般情況下，采用內(nèi)外合治法，內(nèi)治可調(diào)攝五臟、清熱解毒、化痰散結(jié)，外治可消腫排膿、通瘀化滯。本實(shí)驗(yàn)中，將中藥復(fù)方水煎液制備成口崩片，除具有一切口崩片內(nèi)服的優(yōu)勢(shì)外，還能快速溶解于水而外用，起到內(nèi)外同治的作用?？诒榔瑑?nèi)服能夠祛邪外出、培根固本，改變患者“內(nèi)環(huán)境”，達(dá)到陰陽(yáng)平衡；水溶液外涂不僅可以快速在有損害的部位起效，而且無(wú)不良反應(yīng)，能使外出的丘疹、膿皰消退更快。由此可知，中醫(yī)內(nèi)外合治療法治療痤瘡，不影響機(jī)體的整體狀況，安全性相對(duì)較高，使用也將越來(lái)越廣泛。