趙英哲,趙 倩,孫宇強,高一鳴,孫麗榮,田萬年
吉林農(nóng)業(yè)科技學院動物科技學院,吉林吉林市 132101
養(yǎng)殖戶張某養(yǎng)羊200 只,2019 年4 月初在吉林省琿春市購買60 只綿羊,4 月中旬開始進行放牧,5 月初外地購買綿羊陸續(xù)發(fā)病。病羊表現(xiàn)為精神不振,反芻減少,可視黏膜發(fā)黃,羊后肢大腿內側有大量黃豆粒大小的血蜱。經(jīng)抗生素治療后未見好轉,有2 只羔羊死亡。
羊群被毛無光澤,消瘦,鼻鏡干燥,食欲減退,個別羊只出現(xiàn)腹瀉,尿液發(fā)黃,喜歡躺臥,起立困難。羊群腹部被毛較少處和后腿內側發(fā)現(xiàn)大量黃豆粒大小蜱,靜脈采血發(fā)現(xiàn)血液稀薄,嚴重貧血,最后有2 只羊羔衰竭死亡。
經(jīng)檢查體表發(fā)現(xiàn)大量血蜱,2 只病死羔羊身上發(fā)現(xiàn)大量黃豆粒大小的血蜱。病羊消瘦,皮下有大量黃色膠凍樣浸潤。淋巴結腫大,心臟內膜有出血點,肝臟和脾臟腫大,外膜有出血點。
4.1 涂片檢查,采集10 只病羊頸靜脈血液5 mL,制作血涂片,用姬姆薩染色,經(jīng)顯微鏡鏡檢顯示,紅細胞內有圓形、犁籽形蟲體,染蟲率較低,初步診斷為羊泰勒蟲。
4.2 PCR 檢測采集2 只病死羔羊和1 只病羊頸靜脈血液,按照血液基因組提取試劑盒提取羊血液中的總基因組DNA。根據(jù)GenBank 發(fā)表的18s rRNA 基因序列(AY262121),利用Primer Premier 5.0軟件設計了一對羊泰勒蟲特異性引物,引物序列:上游引物P1: 5 ' -ATC AGA TAC CGT CGT AGT CC-3',下游引物P2:5'-CTA AGG GCA TCA CAG ACC-3',由引物由寶生物工程(大連)有限公司合成。
PCR 反應體系為25 μL:Taq PreMix 12.5 μL,上下游引物各0.5 μL;DNA 2 μL;dd H2O 9.5 μL;PCR 反應條件:95 ℃預變性3 min,94 ℃變性45 s,55 ~62 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min,35 個循環(huán),最后72 ℃延伸5 min。陽性PCR 擴增產(chǎn)物送至上海生工生物技術有限公司進行核苷酸序列測定。經(jīng)PCR 擴增,從羊血液基因組DNA 樣品擴增出特異條帶,產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳,約為459 bp 特異片段,對PCR 產(chǎn)物測序結果與GenBank 收錄呂氏泰勒蟲(AY260172)同源性為99.3%,表明病羊感染羊泰勒蟲。
羊感染一定數(shù)量的羊泰勒蟲蟲體才會表現(xiàn)出臨床癥狀,一般隱性感染較多,羊泰勒蟲病多引起免疫功能降低,引發(fā)免疫抑制,對羊生產(chǎn)性能影響較大,給養(yǎng)殖戶造成較大的經(jīng)濟損失。目前對羊泰勒蟲的診斷主要依據(jù)血涂片染色鏡檢方法,該方法對檢測人員專業(yè)知識水平要求較高,需熟練掌握紅細胞內寄生蟲形態(tài)。近年來隨著分子生物學技術的發(fā)展,PCR 診斷技術已應用于羊泰勒蟲病診斷。PCR方法具有操作簡便,特異性強,可對羊泰勒蟲病進行早期診斷,結合序列分析可對蟲體種類進行鑒定。
目前,國內還沒有研制出預防羊泰勒蟲病的疫苗,因此,采取藥物治療是防治本病主要方法。病羊可用貝尼爾進行治療,皮下注射6 mg/kg,每天2 次,連用3 d。同時對羊群噴灑1%的敵百蟲,殺死體表的蜱。羊群停止放牧,采用圈養(yǎng)飼養(yǎng)。通過以上方法治療效果明顯,病情好轉。對羊泰勒蟲病預防,放牧時要注意羊體表是否有蜱叮咬,蜱是該病傳播媒介,及時去除羊體表蜱。對養(yǎng)殖戶普及蜱的危害,加強飼養(yǎng)管理,提高養(yǎng)殖水平,減少經(jīng)濟損失。