畜間布魯氏菌病的血清學(xué)檢測(cè)方法

白 翠，馬曉媛，王 楠，曹東陽(yáng)，胡澤宇，李海燕，鄭 聰，刁鵬翔

1.吉林省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，吉林長(zhǎng)春 130062；2.吉林省通化市二道江區(qū)畜牧獸醫(yī)總站，吉林通化 134000；3.吉林省吉林市龍?zhí)秴^(qū)江北鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站，吉林吉林市 132000；4.吉林省吉林市昌邑區(qū)兩家子鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站，吉林吉林市 132000

布魯氏菌病（簡(jiǎn)稱布?。┦怯刹剪斒暇鸬娜诵蠊不嫉膫魅?、變態(tài)反應(yīng)性疾病。病原體可以通過(guò)體表皮膚黏膜、呼吸道、消化道進(jìn)入機(jī)體。人感染布病主要是與職業(yè)、飲食和生活習(xí)慣有關(guān)。

由于布魯氏菌感染一周后可出現(xiàn)特異性血清抗體，因此，國(guó)內(nèi)外均用血清學(xué)試驗(yàn)檢測(cè)該病。方法主要有虎紅平板凝集、試管凝集試驗(yàn)、膠體金免疫層析試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。

1 虎紅平板凝集試驗(yàn)

虎紅平板凝集試驗(yàn)操作簡(jiǎn)單，價(jià)格便宜，但有時(shí)會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性和假陰性，適合大量樣品的初篩。

1.1 材料準(zhǔn)備

1.1.1 虎紅平板凝集抗原、標(biāo)準(zhǔn)的陽(yáng)性和陰性血清，按說(shuō)明書(shū)使用。

1.1.2 被檢血清應(yīng)新鮮，無(wú)明顯蛋白凝塊，無(wú)溶血和無(wú)腐敗氣味。

1.1.3 潔凈的玻璃板，其上劃分成4 cm2的方格。

1.2 操作方法

1.2.1 試驗(yàn)前，將血清和抗原在室溫恢復(fù)30 min。

1.2.2 在玻璃板上加入25 μL 的被檢血清。

1.2.3 被檢血清旁加入等量的抗原。

1.2.4 用牙簽類小棒混合均勻，在4 min 內(nèi)觀察結(jié)果。

1.3 結(jié)果判定

1.3.1 在陰陽(yáng)對(duì)照成立的條件下，試驗(yàn)成立。

1.3.2 被檢血清在4 min 內(nèi)出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)凝集現(xiàn)象，為陽(yáng)性（+）， 無(wú)凝集現(xiàn)象，呈均勻粉紅為陰性（-）。

2 試管凝集試驗(yàn)

操作時(shí)間比虎紅凝集試驗(yàn)長(zhǎng)，比較繁瑣，但特異性較好，實(shí)用性也比較強(qiáng)，多用于復(fù)核。

2.1 操作過(guò)程

2.1.1 血清的稀釋

牛、馬、駱駝一般從1:50 開(kāi)始，稀釋4 個(gè)滴度；豬、狗和羊從1:25 開(kāi)始稀釋，同樣是4 個(gè)稀釋度。

2.1.2 抗原

將稀釋好的抗原(按照抗原說(shuō)明書(shū)稀釋)加入到稀釋好的血清管中，混勻，豬、羊或狗的血清稀釋則依次變?yōu)?:25,1:50,1:100,1:200，牛、 馬和駱駝的血清稀釋度則依次變?yōu)?:50,1:100,1:200,1:400。

2.1.3 設(shè)置陰性、陽(yáng)性對(duì)照。實(shí)驗(yàn)還要設(shè)置比濁管。

2.1.4 置37 ℃溫箱24 h，取出檢查并記錄結(jié)果。

2.2 結(jié)果判定

牛、馬、鹿和駱駝出現(xiàn)“++”以上凝集現(xiàn)象時(shí)，受檢血清判定為陽(yáng)性。豬、山羊、綿羊、狗出現(xiàn)“++”以上凝集現(xiàn)象時(shí)，受檢血清判定為可疑反應(yīng)；可疑反應(yīng)家畜進(jìn)行復(fù)檢。

3 膠體金免疫層析試驗(yàn)

3.1 操作方法

用一次性滴管，緩慢吸取樣品滴加1 滴于試劑圓孔中。然后滴加1 滴樣品稀釋液。

2 min 后肉眼觀察結(jié)果。

3.2 結(jié)果判定

對(duì)照線（C線）處出現(xiàn)紅線時(shí)試驗(yàn)成立，檢測(cè)線（T線）處出現(xiàn)紅線時(shí)即為陽(yáng)性，否則為陰性。

4 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)有間接ELISA 抗體檢測(cè)試驗(yàn)和競(jìng)爭(zhēng)性ELISA 抗體檢測(cè)試驗(yàn)。有試驗(yàn)證明，競(jìng)爭(zhēng)性ELISA 比間接性ELISA 的敏感性稍高一些，本文主要介紹競(jìng)爭(zhēng)性ELISA（c ELISA）方法。c ELISA檢測(cè)敏感性和特異性好，用機(jī)器判定結(jié)果，避免了人為觀察的干擾和誤差，相比較其他方法結(jié)果更準(zhǔn)確；但該試劑盒昂貴，檢測(cè)成本高，不適用于基層大規(guī)模樣品的檢測(cè)，目前多適用于實(shí)驗(yàn)室大量的血清學(xué)檢測(cè)以及珍貴動(dòng)物的布病確診。

c ELISA 是將布魯氏桿菌抗原連接到ELISA 板上，樣品中待檢抗體和酶標(biāo)抗體競(jìng)爭(zhēng)性地與抗原結(jié)合，形成抗原抗體復(fù)合物。復(fù)合物中的酶標(biāo)抗體與顯色液發(fā)生反應(yīng)，用分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀定量測(cè)定加樣后的顯色程度，顯色程度越低，待檢抗體的含量越高。具體的操作步驟詳見(jiàn)試劑盒說(shuō)明書(shū)。