胃癌患者血清miRNA-647水平及臨床意義

劉 倩，王宗艷

陜西省人民醫(yī)院消化二科，陜西 西安 710068

胃癌為常見的消化道腫瘤之一，具有高發(fā)病率、高病死率，嚴重威脅人類的生命健康，胃癌發(fā)生與否受生活條件、飲食習慣、幽門螺桿菌(Hp)的影響[1]。我國胃癌發(fā)病率和病死率約占全球45.0%，而診治率低于10.0%，胃癌患者就診時大多已到中晚期，所以及早進行胃癌篩查、早診早治對于胃癌患者具有重要意義，而檢測胃癌生物標志物特別是血清標志物是改善胃癌患者預(yù)后的關(guān)鍵。微小核糖核酸(miRNA)是胃癌患者血清中存在的一種腫瘤標志物，能夠調(diào)控細胞生長、凋亡[2]。本研究選取在本院行手術(shù)治療且術(shù)前未進行過放療、化療的60例胃癌患者作為研究對象，探討其血清miRNA-647水平及臨床意義，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年6月至2019年8月在本院行手術(shù)治療且術(shù)前未進行過放療、化療的60例胃癌患者作為觀察組。納入標準：(1)癥狀及臨床診斷均符合胃癌診斷標準者；(2)臨床資料完整者；(3)患者及家屬簽署書面知情同意書。排除標準：(1)全身性疾病，包括嚴重肝、肺、心、腎功能不全者；(2)預(yù)計生存期不足3個月者；(3)嚴重精神疾病患者；(4)合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤患者。同期選取本院胃潰瘍患者60例作為胃潰瘍組，以及體檢健康者60例作為對照組。觀察組男39例，女21例；年齡34～78歲，平均(56.17±5.36)歲；Hp陽性34例，陰性26例；TNM分期：Ⅰ期11例，Ⅱ期22例，Ⅲ期20例，Ⅳ期7例；病灶直徑≥5 cm 37例，<5 cm 23例；分化程度：低分化27例，中分化22例，高分化11例。胃潰瘍組男30例，女30例；年齡32～74歲，平均(55.81±5.69)歲；Hp陽性32例，陰性28例。對照組男32例，女28例；年齡35～75歲，平均(56.09±5.18)歲；Hp陽性35例，陰性25例。3組患者性別、年齡等一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2方法 空腹抽取4 mL靜脈血，室溫下放置1 h，4 000 r/min離心10 min，取1.5 mL上清液轉(zhuǎn)至無RNA酶離心管，于-80 ℃冰箱中保存。血清miRNA提取采用長沙維爾公司試劑盒，根據(jù)說明書進行操作，再根據(jù)北京康為生物公司提供的試劑盒說明書進行miRNA逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，反應(yīng)條件：16 ℃ 30 min，42 ℃ 30 min，85 ℃ 5 min。采取TRIzol法提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，根據(jù)美國Thermo Forma公司相關(guān)試劑盒操作進行實時熒光定量PCR檢測，反應(yīng)條件：95 ℃ 10 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，共40次循環(huán)。miRNA-647上游引物為5′-GCTACACAGAGGCCATTGAA-3′,下游引物為5′-TCCCGGAGTTCATCTATGTG-3′；內(nèi)參GAPDH上游引物為5′-TGCGACTTCAACAGCAACTC-3′，下游引物為5′-CTTGCTCAGTGTCCTTGCTG-3′。根據(jù)2-ΔΔCt計算miRNA-647相對水平。觀察比較各組研究對象血清miRNA-647水平及其與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系。

2 結(jié) 果

2.1兩組患者血清miRNA-647水平比較 觀察組血清miRNA-647相對水平(5.06±1.48)高于胃潰瘍組(1.85±0.73)和對照組(0.97±0.49)，且胃潰瘍組高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.2血清miRNA-647水平與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 血清miRNA-647水平與胃癌患者年齡、性別、分化程度等無相關(guān)(P>0.05)，與患者腫瘤大小、TNM分期、Hp感染有相關(guān)(P<0.05)。見表1。

2.3血清miRNA-647、癌胚抗原(CEA)、糖類抗原199(CA199)診斷胃癌的效能比較 ROC曲線分析顯示，血清miRNA-647診斷胃癌的曲線下面積(AUC)高于CEA、CA199。見表2。

表1 miRNA-647相對水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

表2 血清miRNA-647、CEA、CA199診斷胃癌的效能比較

3 討 論

胃癌早期癥狀不明顯，容易復發(fā)、轉(zhuǎn)移，預(yù)后差，胃鏡檢查可診斷胃癌但不適應(yīng)于早期胃癌篩查，而血清學標志物檢測作為新型、無創(chuàng)的檢測手段，對胃癌的診斷有重要意義[3]。

miRNA由19～25個核苷酸構(gòu)成，為非編碼小分子RNA，長度約為22個核苷酸，可折疊形成前體轉(zhuǎn)錄物再合成為成熟的miRNA。miRNA配對結(jié)合靶mRNA致使其降解、翻譯改變蛋白質(zhì)，轉(zhuǎn)錄后水平負性調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄，在細胞生長、細胞分化、新陳代謝、增殖及凋亡等生物學進程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。血清miRNA與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展有關(guān)，不同生物體、不同疾病類型、不同細胞生長周期，miRNA表達情況不同。在乳腺癌、肝癌、結(jié)腸癌等惡性腫瘤中miRNA-647水平較同，而關(guān)于胃癌組織miRNA-647水平的研究較少，調(diào)控機制尚不明確。有研究表明，胃癌組織miRNA-223水平較癌旁組織明顯升高[4]。血清miRNA的來源有3種：凋亡細胞破損后釋放；外泌體、穿梭囊泡運輸，細胞膜包裹傳導；分泌中與RNA結(jié)合蛋白結(jié)合后釋放。miRNA可長期儲存于人體血清、血漿中，可適應(yīng)酸堿變化、溫度變化。不同惡性腫瘤特異性miRNA不同，起源的組織或器官可由低分化腫瘤組織的miRNA水平確定，miRNA是檢測惡性腫瘤的理想血清標志物[5]。

本研究結(jié)果顯示，觀察組血清miRNA-647水平顯著高于胃潰瘍組和對照組(P<0.05)，說明miRNA-647水平在胃癌患者血清中較胃潰瘍患者和體檢健康者明顯升高。本研究結(jié)果還顯示，血清miRNA-647水平與胃癌患者年齡、性別、分化程度等無相關(guān)性(P>0.05)，與患者腫瘤大小、TNM分期、Hp感染有相關(guān)(P<0.05)，這與徐娟等[6]、周欣亮等[7]研究結(jié)果一致。

綜上所述，血清miRNA-647水平與胃癌腫瘤大小、TNM分期、Hp感染有關(guān)，對胃癌有較好的診斷效能。