子癇前期孕婦IFI16表達(dá)水平與ET-1、NO、臨床指標(biāo)的相關(guān)性及對(duì)妊娠結(jié)局的影響

郝榮，劉清秀，趙富清，陳光

(1.重慶市開州區(qū)人民醫(yī)院產(chǎn)科，重慶 405400；2.漢中市中心醫(yī)院婦科，陜西 漢中 723000)

子癇前期是妊娠期特有疾病，可導(dǎo)致孕產(chǎn)婦心、腦、腎等多臟器功能損傷，并可導(dǎo)致胎兒宮內(nèi)窘迫，最終致母嬰不良妊娠結(jié)局發(fā)生[1]。近年來，隨著人們生活水平的提高，生活習(xí)慣和飲食結(jié)構(gòu)也發(fā)生了明顯改變，作息不規(guī)律以及高鹽、高脂飲食成為大部分年輕人的生活常態(tài)，加之近年我國二胎政策，高齡孕產(chǎn)婦急劇增加，子癇前期患病率逐年升高，已成為我國孕產(chǎn)婦和圍生兒死亡的主要原因[2]。目前尚無針對(duì)子癇前期的統(tǒng)一方案，因此探討其發(fā)病機(jī)制以尋找有效的治療方案十分重要。國內(nèi)外研究認(rèn)為，子癇前期發(fā)病過程主要為胎盤灌注不足以及全身血管內(nèi)皮細(xì)胞激活或損傷，導(dǎo)致多系統(tǒng)、多器官不同程度受累，而內(nèi)皮細(xì)胞損傷是子癇前期發(fā)病的中心環(huán)節(jié)[3-4]。研究發(fā)現(xiàn)，滋養(yǎng)細(xì)胞微粒、抗血管生成因子和細(xì)胞游離核苷酸等子癇前期胎盤組織“毒性因子”在子癇前期內(nèi)皮細(xì)胞損傷中占有重要地位[5]。γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16(interferon-γ-inducible protein 16，IFI16)作為HIN-200家族成員之一，在上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞中均有表達(dá)，而氧化應(yīng)激、細(xì)胞密度和炎癥因子等均可引起IFI16表達(dá)上調(diào)[6-7]。當(dāng)存在自身免疫性相關(guān)疾病時(shí)，高水平IFI16可致內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙[8]。而子癇前期患者胎盤處于強(qiáng)氧化應(yīng)激和高炎癥反應(yīng)狀態(tài)，提示IFI16與子癇前期相關(guān)，但具體相關(guān)機(jī)制尚不明確[9]。本研究旨在探討子癇前期患者IFI16的表達(dá)情況，并分析其對(duì)臨床特征和妊娠結(jié)局的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年6月至2018年6月重慶市開州區(qū)人民醫(yī)院產(chǎn)科收治的98例子癇前期患者作為子癇前期組，年齡20～40歲，平均(31±6)歲；孕次2～3次，平均(2.78±0.35)次；產(chǎn)次2～3次，平均(2.26±0.21)次；采血時(shí)間：妊娠29～35周，平均(32.4±4.3)周。同期選擇行常規(guī)孕檢的100名單胎健康孕婦作為對(duì)照組，年齡20～40歲，平均(32±5)歲；孕次2～3次，平均(2.82±0.38)次；產(chǎn)次2～3次，平均(2.31±0.25)次；采血時(shí)間：妊娠28～35周，平均(32.3±4.2)周。兩組年齡、孕次、產(chǎn)次及采血孕周比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)重慶市開州區(qū)人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象及其家屬均知情同意。

1.2納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 子癇前期組納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合子癇前期診斷標(biāo)準(zhǔn)[10]者；②單胎妊娠；③確診前未給予任何處理；④全程參與且資料完整者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他妊娠期特殊疾病者；②孕前合并高血壓、糖尿病、腎病、自身免疫性疾病及腫瘤等；③有煙酒不良嗜好及傳染病史者。

1.3方法 采集兩組孕婦空腹靜脈血3 mL，以離心半徑13.5 cm，3 000 r/min離心10 min，取上清置于-80 ℃條件下EP管中保存。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清IFI16、內(nèi)皮素-1(endothelin-1，ET-1)和一氧化氮(nitric oxide，NO)水平，具體步驟如下。①稀釋標(biāo)準(zhǔn)品；②加樣：設(shè)置待測樣品孔、標(biāo)準(zhǔn)孔和空白對(duì)照孔，并完成加樣；③孵育：封閉酶標(biāo)板后于37 ℃恒溫箱中孵育30 min；④洗板5次；⑤加酶標(biāo)抗體：向待測樣品孔和標(biāo)準(zhǔn)孔中加入酶標(biāo)抗體；⑥再次孵育及洗板3次；⑦顯色：加顯色劑，37 ℃避光放置10 min；⑧終止：加終止液；⑨檢測：加入終止液后15 min，將酶標(biāo)板置于酶聯(lián)免疫分析儀進(jìn)行分析。

1.4觀察指標(biāo) 收集并記錄兩組血壓、24 h尿蛋白定量、血清總蛋白、白蛋白、尿素氮、尿酸、肌酐、β2-微球蛋白、α1-微球蛋白和胱抑素C等臨床特征相關(guān)指標(biāo)，其中血壓為同一時(shí)間的電子血壓計(jì)檢測，總蛋白、白蛋白、尿素氮、尿酸、肌酐、β2-微球蛋白、α1-微球蛋白和胱抑素C均使用全自動(dòng)生化儀(美國貝克曼公司生產(chǎn)，型號(hào)：AU640型)檢測。記錄兩組妊娠結(jié)局，母體不良結(jié)局包括子癇、彌散性血管內(nèi)凝血、急性心衰和肝功能損害；圍生兒不良結(jié)局包括死胎、新生兒透明膜病、新生兒窒息和新生兒心臟發(fā)育不全等。

2 結(jié) 果

2.1兩組血清IFI16、ET-1和NO水平比較 子癇前期組IFI16蛋白和ET-1水平明顯高于對(duì)照組，而NO水平明顯低于對(duì)照組(P<0.01)。見表1。

表1 兩組血清IFI16、ET-1和NO水平比較

2.2兩組臨床特征相關(guān)指標(biāo)比較 子癇前期組血壓、24 h尿蛋白定量、尿素氮、尿酸、肌酐、β2-微球蛋白、α1-微球蛋白和胱抑素C水平均高于對(duì)照組，而總蛋白和白蛋白水平低于對(duì)照組(P<0.01)。見表2。

表2 兩組臨床特征相關(guān)指標(biāo)比較

2.3IFI16與ET-1、NO及臨床特征相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系 Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，子癇前期血清IFI16與ET-1、收縮壓、舒張壓、24 h尿蛋白定量和胱抑素C呈明顯正相關(guān)(P<0.05)，與NO、總蛋白和白蛋白呈明顯負(fù)相關(guān)(P<0.05)；但與尿素氮、尿酸、肌酐、β2-微球蛋白和α1-微球蛋白無明顯相關(guān)性(P>0.05)。見表3。

表3 IFI16與ET-1、NO及臨床特征相關(guān)指標(biāo)的相關(guān)性分析結(jié)果

2.4IFI16、ET-1和NO水平與子癇前期妊娠不良結(jié)局的關(guān)系 在100名健康孕婦中，2例發(fā)生母體不良結(jié)局(1例急性心力衰竭、1例肝功能損害)，2例發(fā)生圍生兒不良結(jié)局(1例新生兒透明膜病和1例新生兒窒息)。在98例子癇前期患者中，56例未發(fā)生妊娠不良結(jié)局，30例發(fā)生母體不良結(jié)局(10例子癇、6例彌散性血管內(nèi)凝血、6例急性心力衰竭、8例肝功能損害)；20例發(fā)生圍生兒不良結(jié)局(7例死胎、6例新生兒透明膜病、3例新生兒窒息、4例新生兒心臟發(fā)育不全)。子癇前期組母體和圍生兒不良結(jié)局發(fā)生率均高于對(duì)照組[(30.61%(30/98)比2.00%(2/100)，20.41%(20/98)比2.00%(2/100)](χ2=29.905，P<0.001；χ2=16.982，P<0.001)；子癇前期患者中，母體不良結(jié)局組和圍生兒不良結(jié)局組孕婦血清IFI16、ET-1明顯高于妊娠結(jié)局正常組(t=11.131、t=7.880,均P<0.001；t=9.768、t=7.295，均P<0.001)，而NO水平低于妊娠結(jié)局正常者(t=8.437、t=8.005,均P<0.001)。見表4。

表4 子癇前期患者IFI16、ET-1和NO水平與妊娠不良結(jié)局的關(guān)系

2.5IFI16、ET-1和NO預(yù)測子癇前期患者不良妊娠結(jié)局價(jià)值的分析 通過繪制并分析ROC曲線顯示，IFI16、IFI16+ET-1、IFI16+NO和IFI16+ET-1+NO在預(yù)測子癇前期母體不良結(jié)局和圍產(chǎn)兒不良結(jié)局方面均具有一定價(jià)值(P<0.05)，但三者聯(lián)合檢測的預(yù)測價(jià)值最高，見表5、表6、圖1。

表5 IFI16、ET-1和NO在子癇前期母體不良結(jié)局中的預(yù)測價(jià)值

表6 IFI16、ET-1和NO在子癇前期圍生兒不良結(jié)局中的預(yù)測價(jià)值

IFI16：γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16；ET-1：內(nèi)皮素-1；NO：一氧化氮；ROC：受試者工作特征曲線

3 討 論

據(jù)統(tǒng)計(jì)，子癇前期的全球發(fā)病率為3%～8%，死亡人數(shù)占產(chǎn)婦死亡的15%[11-12]，故引起全球廣泛關(guān)注。子癇前期早期主要與胎盤植入部位螺旋動(dòng)脈重鑄障礙相關(guān)，隨著病情進(jìn)展，可致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，外周血管阻力增加，導(dǎo)致高血壓和蛋白尿出現(xiàn)[13]。ET-1主要存在于血管內(nèi)皮細(xì)胞，是內(nèi)皮細(xì)胞激活和(或)損傷的血清學(xué)指標(biāo)之一[14]。但目前對(duì)于內(nèi)皮細(xì)胞損傷致子癇前期產(chǎn)生的具體機(jī)制仍不清楚。有學(xué)者認(rèn)為，胎盤來源“細(xì)胞因子”與母體內(nèi)皮細(xì)胞相互作用致內(nèi)皮細(xì)胞損傷是胎盤組織和母體血管內(nèi)皮損傷之間的重要紐帶[15]。此外，目前針對(duì)子癇前期的治療方法也僅是對(duì)癥治療，而非針對(duì)病因的治療，患者癥狀往往持續(xù)直至胎盤娩出，故對(duì)胎兒和母體的損傷是持續(xù)性的[16]。另有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，子癇前期對(duì)母嬰的損傷可持續(xù)至妊娠及分娩結(jié)束后，有子癇前期病史母體和子代(特別是剖宮產(chǎn)兒)未來高血壓和心血管疾病的患病率遠(yuǎn)高于正常妊娠者及其子代[17]。因此，明確子癇前期的發(fā)病機(jī)制，進(jìn)行病因?qū)W治療對(duì)子癇前期母嬰近遠(yuǎn)期生活狀態(tài)均十分重要。

IFI16作為HIN-200家族成員之一，其N端為PYRIN結(jié)構(gòu)域，C端為HIN-200結(jié)構(gòu)域，中間被一段富含絲氨酸-蘇氨酸-脯氨酸的間隔區(qū)隔開(S/T/P)，可被信使RNA剪切產(chǎn)生3種亞型：IFI16A、IFI16B和IFI16C[18]。早期研究認(rèn)為，IFI16蛋白是一種核蛋白，后續(xù)發(fā)現(xiàn)其可以長度依賴性方式與雙鏈DNA結(jié)合，在病毒DNA識(shí)別和固有免疫推動(dòng)方面占有一定地位[19]。近年研究發(fā)現(xiàn)IFI16蛋白具有調(diào)控細(xì)胞生長、分化、凋亡及DNA損傷等細(xì)胞生物學(xué)功能[20]。本研究中，子癇前期組IFI16蛋白和ET-1水平明顯高于對(duì)照組，而NO水平顯著低于對(duì)照組，提示IFI16可能參與子癇前期的發(fā)生發(fā)展，與上述研究結(jié)果一致。張展等[21]研究發(fā)現(xiàn)，子癇前期患者胎盤組織和血清中的IFI16水平明顯升高，但該研究未涉及妊娠結(jié)局。本研究通過Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，IFI16與ET-1、NO及部分臨床特征相關(guān)指標(biāo)明顯相關(guān)，提示IFI16可能主要通過損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞影響子癇前期臨床特征，與上述觀點(diǎn)一致。同時(shí)，本研究結(jié)果還顯示，子癇前期患者中母體不良結(jié)局組和圍生兒不良結(jié)局組孕婦血清IFI16、ET-1明顯高于妊娠結(jié)局正常組，而NO水平則相對(duì)降低，提示IFI16、ET-1和NO與子癇前期妊娠不良結(jié)局有關(guān)，其原因可能是IFI16和ET-1是子癇前期疾病進(jìn)展的重要危險(xiǎn)因子，而NO是子癇前期的主要保護(hù)因子[22]。本研究通過繪制ROC曲線發(fā)現(xiàn)，IFI16在預(yù)測子癇前期母體不良結(jié)局和圍生兒不良結(jié)局上均有一定價(jià)值，但I(xiàn)FI16、ET-1和NO三者聯(lián)合診斷價(jià)值最高，為子癇前期孕兒不良結(jié)局的預(yù)測提供了新的方向。

綜上所述，與正常妊娠孕婦相比，子癇前期患者血清IFI16水平升高，且IFI16水平與ET-1、臨床特征變化及妊娠不良結(jié)局密切相關(guān)，有望成為預(yù)測不良妊娠結(jié)局的有效指標(biāo)。