二氧化鉬雜化納米探針的構(gòu)建及性能

何 鵬,韓文豪,畢 成,牛淑妍

(青島科技大學(xué) 化學(xué)與分子工程學(xué)院，山東青島266042)

借助于局部表面等離子體共振(LSPR)技術(shù)[1]，納米材料可以有效地聚集和放大共振激發(fā)下其表面附近的入射光[2-3]。納米材料的近場(chǎng)增強(qiáng)性能也賦予了等離子體納米材料吸收光的能力。納米級(jí)的等離子體材料由于其優(yōu)越的光學(xué)特性，在光催化、光熱療法(PTT)和表面增強(qiáng)拉曼散射(SERS)等應(yīng)用方面有巨大的應(yīng)用潛力[4-6]。Au納米籠[7]、Ag納米晶體[8]和Pd納米片[9]等納米結(jié)構(gòu)貴金屬材料作為常規(guī)的等離子體納米材料引起了廣泛的科學(xué)關(guān)注。盡管上述材料對(duì)LSPR進(jìn)行了有效的放大處理，但等離子激元貴金屬納米材料仍存在一些嚴(yán)重缺陷，例如成本高、生物相容性和穩(wěn)定性差等缺陷，這不可避免的限制了其實(shí)際應(yīng)用[10]。

過(guò)渡金屬氧化物由于其金屬陽(yáng)離子的d電子層電子比較活潑，容易導(dǎo)致電子或空穴載流子的局域化，具有耐熱性、抗毒性、光敏、熱敏的特性。近幾年，人們發(fā)現(xiàn)一些過(guò)渡金屬氧化物具有局部表面等離子共振效應(yīng)(LSPR)，表現(xiàn)出表面增強(qiáng)拉曼散射(SERS)活性，可作為SERS基底而受到高度關(guān)注[11-12]。SERS已被證明是一種有效的檢測(cè)痕量物質(zhì)的有效工具，除貴金屬外，等離子體半導(dǎo)體和過(guò)渡金屬氧化物由于價(jià)格低廉，拉曼增強(qiáng)性能優(yōu)越，常被用作SERS的基底，如銅硫系(Cu Te、CuS和CuSe)[13-16]、W18O29和Cu2O等。由于銅硫系其增強(qiáng)因子(EF)相對(duì)較弱，不能夠滿足對(duì)痕量化學(xué)分子的高靈敏度檢測(cè)。W18O29、Cu2O等氧化物雖然具有較高的EF值，可達(dá)8.0×105，但是其穩(wěn)定性差，在空氣中易被氧化，LSPR效應(yīng)也會(huì)隨著氧空穴的消失而減弱[17-18]。而氧化鉬(MoO2)不僅具有強(qiáng)的LSPR效應(yīng)，而且含有大量的氧空位，具有較好的穩(wěn)定性[19]。此外，MoO2還具有較高的近紅外吸收特性，可用作光熱轉(zhuǎn)換材料，用于光熱治療(PTT)[20-21]。

本研究通過(guò)多巴胺在堿性條件下的自聚合特性，在多巴胺聚合的過(guò)程中加入Mo O2納米粒子，自聚合成為摻雜MoO2的聚多巴胺納米材料。通過(guò)引入多巴胺，可以聚集Mo O2納米粒子，進(jìn)一步增強(qiáng)光熱性能。隨后在聚多巴胺粒子的表面原位還原上鉑顆粒以合成最終的MPDPs納米粒子。設(shè)計(jì)合成的MPDPs納米粒子同時(shí)具備表面增強(qiáng)拉曼、光熱和產(chǎn)生氧氣的作用，納米粒子粒徑為40 nm，并有望通過(guò)胞吞作用進(jìn)入腫瘤細(xì)胞實(shí)現(xiàn)對(duì)癌癥的檢測(cè)與治療。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1．1 試劑與儀器

檸檬酸鈉，上海阿拉丁化學(xué)試劑公司;氯鉑酸，上海阿拉丁化學(xué)試劑公司;TCEP，阿達(dá)瑪斯試劑公司;鹽酸多巴胺，上海阿拉丁化學(xué)試劑公司;MoS2(＜2μm)，上海阿拉丁化學(xué)試劑公司;乙醇，天津天力化學(xué)試劑有限公司;H2O2，天津天力化學(xué)試劑有限公司。

紫外分光光度計(jì)，Cary 50 UV-Vis-NIR型，美國(guó)Varian公司;透射電子顯微鏡，JEM-2000EX型，日本Hitachi公司;激光拉曼光譜儀，Renishaw in Via型，英國(guó)Renishaw公司;納米顆粒跟蹤分析儀，ZetaView型，德國(guó)Particle Metrix公司;XPS分析儀，Thermo ESCALAB 250XI型，美國(guó)賽默飛世爾公司;FT-IR光譜儀，Nicolet 6700型，美國(guó)Nicolet公司。

實(shí)驗(yàn)中所用的試劑均為分析純(AR)，未做進(jìn)一步處理，所用的溶液均為超純水配制。

實(shí)驗(yàn)中用到的合成寡核苷酸鏈均為上海生工生物工程股份有限公司提供，序列如表1所示。

表1 實(shí)驗(yàn)中用到的DNA序列Table 1 DNA sequence used in the experiment

1．2 MoO2納米粒子的合成

將1.6 m L的H2O2添加到30 m L含30 mg MoS2粉末的乙醇中，攪拌15 min后，將混合物移入特氟隆高壓釜中，在180℃下加熱5 h，得到藍(lán)綠色的產(chǎn)品，冷卻至室溫后收集。然后使用1 000 D的透析袋在去離子水中透析48 h，再用0.22μm孔的纖維素酯膜進(jìn)行真空過(guò)濾。隨后，將收集的懸浮液冷凍干燥，并制備出二氧化鉬。最終將粉末于－20℃儲(chǔ)存以進(jìn)一步進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1．3 MPDPs納米粒子的合成

首先將10 mg Mo O2粉末溶解在10 mmol·m L－1Tris-HCl(p H＝8.5)中，在10 m L 1 mg·m L－1的Mo O2溶液中分別加入0.1，0.25，0.5，0.75，1和2 mg的鹽酸多巴胺粉末，室溫下攪拌4 h，離心分散后重新溶解在去離子水中。取5 m L的PDA＠Mo O2溶液加入0.7 m L氯鉑酸水溶液(4 mg·m L－1)，在90℃的油浴中攪拌反應(yīng)24 h以在聚多巴胺表面原位還原Pt顆粒。反應(yīng)結(jié)束后離心洗滌，分散在去離子水中并與4℃儲(chǔ)存。

1．4 光熱實(shí)驗(yàn)

為驗(yàn)證MPDPs納米粒子的光熱增強(qiáng)效果，使用808 nm紅外激光器和手持式熱敏成像檢測(cè)器進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。首先分別在相同條件下使用激光器(1.2 W·cm－2)對(duì)去離子水、MoO2溶液、PDA＠Mo O2溶液和MPDPs納米粒子照射10 min，依次拍照記錄每分鐘的溫度變化。隨后停止激光照射，并每隔1 min拍照記錄MPDPs納米粒子的冷卻溫度，重復(fù)上述操作5次，繪制冷卻曲線，并計(jì)算光熱轉(zhuǎn)換效率。

1．5 SERS檢測(cè)

為驗(yàn)證MPDPs納米粒子的SERS增強(qiáng)效果，在MPDPs納米粒子的表面通過(guò)巰基-醌基的作用連接上Cy5拉曼信號(hào)DNA分子。取1μL修飾Cy5的MPDPs納米粒子滴在金玻璃片上，干燥后用激光拉曼光譜儀的633 nm激光器進(jìn)行SERS檢測(cè)。

1．6 實(shí)驗(yàn)原理

MPDPs納米粒子的合成步驟如圖1所示。首先由硫化鉬通過(guò)無(wú)表面活性劑的溶劑熱方法來(lái)制備氧化鉬納米材料，隨后由于鹽酸多巴胺的堿性自聚合特性，將氧化鉬納米材料摻雜在聚多巴胺納米球中，形成PDA＠Mo O2納米粒子。最后，在聚多巴胺納米粒子的表面原位還原上Pt顆粒以合成MPDPs納米粒子。通過(guò)合適的合成時(shí)間，制備的Mo O2納米材料表現(xiàn)出強(qiáng)烈的近紅外吸收能力，產(chǎn)生強(qiáng)烈的LSPR效應(yīng)和光熱效果?；谶@種獨(dú)特的性能，等離子Mo O2納米片可作為SERS活性基底和光熱治療劑，用于痕量生物分子的檢測(cè)和腫瘤熱消融。在此基礎(chǔ)上，利用聚多巴胺的包覆和累積作用，進(jìn)一步增強(qiáng)了Mo O2納米粒子的LSPR效應(yīng)和光熱效率。同時(shí)，MPDPs納米粒子表面的Pt顆粒具有產(chǎn)氧和進(jìn)一步增強(qiáng)LSPR效應(yīng)的作用，可以提高SERS增強(qiáng)效果和光熱性能，優(yōu)秀的產(chǎn)氧能力能夠?yàn)楹罄m(xù)的光動(dòng)力治療解決乏氧的問(wèn)題。

圖1 MPDPs的合成示意圖Fig．1 Schematic illustration of phased-controlled synthesis of MPDPs NPs

2 結(jié)果與討論

2．1 MPDPs的TEM表征

用透射電子顯微鏡(TEM)表征了Mo O2納米粒子、Mo O2＠PDA和MPDPs的微觀結(jié)構(gòu)和形貌，見(jiàn)圖2。圖2(a)顯示了等離子體Mo O2納米粒子的TEM照片，可以清楚地看到Mo O2納米粒子是均勻分散的，并且大小均勻，橫向尺寸約為3 nm。TEM圖像還顯示Mo O2的晶格條紋為0.24 nm，對(duì)應(yīng)單斜Mo O2的(200)面。通過(guò)多巴胺在堿性溶液中的自聚合反應(yīng)合成了Mo O2＠PDA納米粒子，見(jiàn)圖2(b)?？梢园l(fā)現(xiàn)，納米材料具有雙層結(jié)構(gòu)，對(duì)應(yīng)于深色的為Mo O2，和對(duì)比度較低的PDA涂層。Mo O2＠PDA納米材料為大小較為均一的球型納米粒子，粒徑約為40 nm。PDA具有豐富的胺基和羥基，顯示出對(duì)金屬離子的還原能力和配位點(diǎn)。因此，PDA被用作還原劑以將Pt4＋離子還原為Pt納米顆粒。同時(shí)，PDA納米粒子在穩(wěn)定和支撐Pt納米粒子方面也起著重要作用。大約5 nm的Pt納米顆粒均勻地分布在表面(圖2(c))。

圖2 MoO2納米粒子、MoO2＠PDA納米粒子和MPDPs納米粒子的TEM照片F(xiàn)ig．2 TEM images of MoO2 NPs，Mo O2＠PDA NPs and MPDPs NPs

通過(guò)EDS能譜分析可以進(jìn)一步確定MPDPs納米粒子的元素組成，見(jiàn)圖3。氧元素和鉬元素來(lái)自氧化鉬納米粒子，碳和氮元素由PDA外殼提供，鉑元素由最外層的Pt納米顆粒提供。圖中各元素的位置分布與探針中納米粒子的位置相對(duì)應(yīng)，進(jìn)一步證明了MPDPs納米探針的成功合成。

圖3 MPDPs的EDS能譜表征圖Fig．3 STEM-HAADF image，and the corresponding element mapping images of MPDPs

為了合成出大小更均一、形貌更好的MPDPs納米粒子，還對(duì)實(shí)驗(yàn)的條件進(jìn)行了優(yōu)化。首先對(duì)合成Mo O2＠PDA過(guò)程中鹽酸多巴胺用量的優(yōu)化，見(jiàn)圖4。在其他實(shí)驗(yàn)條件均不變改變鹽酸多巴胺質(zhì)量的情況下，當(dāng)加入量為0.5 mg鹽酸多巴胺粉末時(shí)，形成的Mo O2＠PDA納米粒子具有更均勻的球形，且大小更均勻。加入量過(guò)小則有大量的Mo O2納米粒子沒(méi)有被PDA包裹，加入量過(guò)多則分散不均勻且易形成大的顆粒聚集物。因此，選擇0.5 mg的鹽酸多巴胺粉末作為最終的加入量。

圖4 不同質(zhì)量鹽酸多巴胺加入量的MoO2＠PDA納米粒子的TEM照片F(xiàn)ig．4 TEM images of MoO2＠PDA NPs with different quality of dopamine involved

此外，還對(duì)氯鉑酸的用量進(jìn)行了優(yōu)化，見(jiàn)圖5。圖5(a)到(c)分別加入0.7 m L 2、4和6 mg·m L－1的氯鉑酸水溶液。加入的氯鉑酸的量越大，形成的Pt納米顆粒的數(shù)量越多。但是4和6 mg·m L－1的氯鉑酸對(duì)Pt納米顆粒的還原數(shù)量影響不大，因此，選擇4 mg·m L－1的氯鉑酸為最終的加入量。

圖5 不同濃度氯鉑酸制備的MPDPs納米粒子的TEM照片F(xiàn)ig．5 TEM image of MPDPs NPs with different concentration of H 2 PtCl6 was involved

2．2 材料的其他表征

圖6為MPDPs納米顆粒的XPS掃描光譜。由圖6可見(jiàn)，5種元素明顯的結(jié)合能結(jié)合峰位于233.06 e V(Mo 3d)，283.87 e V(C 1s)，400.71、415.08 e V(Mo 3p)，530.93 e V(O 1s)和71.0 e V(Pt 4f)。XPS的測(cè)試結(jié)果與氧化鉬及鉑的出峰位置一致，表明MPDPs納米顆粒成功合成。

圖6 MPDPs納米粒子的XPS表征圖Fig．6 High-resolution XPS of MPDPs NPs

圖7 顯示了MPDPs納米粒子的XRD衍射峰。圖中特征衍射峰位置及晶面指數(shù)都已標(biāo)出，MPDPs中Mo O2的晶面指數(shù)有(100)、(110)、(200)和(220)，Pt NPs的晶面指數(shù)有(111)、(200)和(220)，通過(guò)將MPDPs納米粒子的特征衍射峰與單斜Mo O2(JCPDS No.32-0671)和Pt粉(JCPDS No.0040802)的樣品對(duì)比，可以表明MPDPs納米粒子同時(shí)包含Mo O2和Pt NPs，而且由衍射峰細(xì)且尖銳，表明MPDPs納米粒子結(jié)晶狀態(tài)良好。

圖7 MPDPs納米粒子的XRD表征圖Fig．7 XRD patterns of MPDPs NPs

MPDPs納米粒子的FT-IR光譜見(jiàn)圖8。其500～800 cm－1是Mo—O—Mo拉伸振動(dòng)的特征吸收峰，1 052和1 038 cm－1處的兩個(gè)峰和3 423 cm－1處的一個(gè)峰可歸因于MoO和O—H拉伸振動(dòng)。此外，N—H的伸縮振動(dòng)位于3 190和3 229 cm－1，C—O的振動(dòng)位于1 295 cm－1以及1 630 cm－1的芳香環(huán)中CC伸縮振動(dòng)吸收，證實(shí)了PDA真實(shí)存在。另外，通過(guò)紫外可見(jiàn)(UV-vis)吸收光譜以研究氧化鉬樣品的光學(xué)性質(zhì)，見(jiàn)圖9。黑線表示Mo O2，在700～850 nm范圍內(nèi)都表現(xiàn)出強(qiáng)烈的可見(jiàn)光和NIR吸收，可作為光熱轉(zhuǎn)換物。MPDPs納米粒子不僅同時(shí)具備Mo O2的強(qiáng)烈的可見(jiàn)光和NIR吸收特性，還具有Pt的UV吸收峰(870 nm左右)。此外，通過(guò)Zeta電位對(duì)MPDPs在層層修飾的過(guò)程電位的監(jiān)測(cè)，如圖10所示，Mo O2納米片的Zeta電位為－18.5 m V;包裹多巴胺后，由于PDA為電負(fù)性，Mo O2＠PDA電位進(jìn)一步變負(fù)為－26.1 m V;因?yàn)樵贿€原的鉑納米顆粒的正電性，使得MPDPs的電位變?yōu)椋?1.3 m V。

圖8 MPDPs納米粒子的FT-IR表征圖Fig．8 FT-IR pattern of MPDPs NPs

圖9 MPDPs納米粒子的UV-vis表征圖Fig．9 UV-vis patterns of MPDPs NPs

圖10 MPDPs納米粒子的Zeta電位表征圖Fig．10 Zeta patterns of MPDPs NPs

通過(guò)以上3種方法的檢測(cè)，進(jìn)一步說(shuō)明了MPDPs的成功合成。

2．3 MPDPs的產(chǎn)氧性能分析

對(duì)鉑納米粒子由于其獨(dú)特性能，可在過(guò)氧化氫的存在下分解過(guò)氧化氫產(chǎn)生氧氣。通過(guò)使用溶解氧計(jì)測(cè)量MPDPs的制氧能力，見(jiàn)圖11。加入H2O2后，溶解氧計(jì)檢測(cè)到強(qiáng)氧信號(hào)，并在28 min左右達(dá)到峰值(圖8)，并且觀察到溶液中產(chǎn)生氧氣氣泡。結(jié)合MPDPs的光熱作用，在相同條件下使用808 nm激光照射下，產(chǎn)氧量明顯增加，并且有大量氣泡冒出，這可能與光照產(chǎn)生的熱量加快過(guò)氧化氫分解有關(guān)。而其他的對(duì)照組的產(chǎn)氧量均無(wú)大幅度變化，說(shuō)明MPDPs中的Pt納米粒子可以催化過(guò)氧化氫產(chǎn)生氧氣，并且由于氧化鉬的光熱作用可進(jìn)一步促進(jìn)過(guò)氧化氫分解，增加產(chǎn)氧量。

圖11 MPDPs納米粒子在不同情況下的O2產(chǎn)生濃度圖Fig．11 O2 production concentration profiles of MPDPs nanoparticles in different conditions

2．4 MPDPs的光熱性能分析

MPDPs表現(xiàn)出跨越整個(gè)NIR窗口的等離振子共振帶，會(huì)有較好的光熱轉(zhuǎn)換作用。使用808 nm NIR激光器，功率密度為1.2 W·cm－2進(jìn)行連續(xù)波NIR激光照射，持續(xù)10 min，并用溫度檢測(cè)器進(jìn)行實(shí)時(shí)溫度監(jiān)控，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖12所示。

圖12 H2 O、MoO2、MoO2＠PDA和MPDPs光熱溫度變化圖Fig．12 Temperature evolutions of H 2 O，Mo O2，Mo O2＠PDA and MPDPs NPs

由圖12可知，對(duì)相同濃度的4種液體，隨著照射時(shí)間的延長(zhǎng)，MPDPs的溫度從23℃逐漸升高到54℃，MoO2＠PDA納米粒子的溫度從23℃逐漸升高到47℃，Mo O2納米粒子的溫度從23℃逐漸升高到40℃，而純凈水的溫度幾乎不變。

圖13為MPDPs、Mo O2＠PDA、Mo O2和PBS在光照下每分鐘的溫度變化所對(duì)應(yīng)的圖像。通過(guò)對(duì)照實(shí)驗(yàn)可以得出，功率密度為1.2 W·cm－2的NIR激光燈對(duì)于溶劑水的影響不大，只有溶質(zhì)的變化可以引起溫度的改變，被PDA包裹的Mo O2納米粒子由于聚集作用使得光熱效果增強(qiáng)，繼續(xù)原位還原上Pt納米顆粒以后，由于金屬的共振作用會(huì)進(jìn)一步提高其光熱效果。

圖13 MPDPs、MoO2＠PDA、MoO2和PBS在光照下每分鐘的溫度變化所對(duì)應(yīng)的圖像Fig．13 Images corresponding to the temprature chang of MPDPs，MoO2＠PDA，MoO2 and PBS per minute under light

為了檢驗(yàn)材料的穩(wěn)定性，接下來(lái)對(duì)MPDPs納米粒子進(jìn)行了5次重復(fù)升溫降溫實(shí)驗(yàn)(圖14)，在5次循環(huán)光照、冷卻的過(guò)程中，光熱效果幾乎沒(méi)有變化，表明MPDPs具有良好的光熱能力。

圖14 MPDPs光熱-冷卻循環(huán)溫度變化圖Fig．14 Temperature elevation of MPDPs NPs with the concentration of 1 mg·m L－1 over five LASER ON/OFF cycles with 808 nm laser irradiation

為了計(jì)算MPDPs的光熱轉(zhuǎn)換效率還對(duì)其進(jìn)行了冷卻溫度的記錄并繪制冷卻曲線，如圖15。由冷卻曲線數(shù)據(jù)點(diǎn)的線性擬合可以得出MPDPs的時(shí)間常數(shù)ts＝294.98 s，計(jì)算[21]可得，MPDPs的光熱轉(zhuǎn)換效率為η＝63.5%。

圖15 MPDPs時(shí)間與冷卻循環(huán)溫度增量的負(fù)自然對(duì)數(shù)的關(guān)系圖,數(shù)據(jù)點(diǎn)的線性擬合得出半衰期t s為294.98 s(插圖為MPDPs的升溫和降溫曲線)Fig．15 Plot of time versus negative natural logarithm of the temperature increment for the cooling cycle，the linear fit of the data points results in a half-life time t s of 294.98 s(Instet:Temperature rise and fall curve of MPDPs)

2．5 MPDPs的SERS性能分析

為了探索MPDPs納米粒子的傳感應(yīng)用，通過(guò)使用Cy5拉曼分子作為模型分析物來(lái)評(píng)估MPDPs納米粒子的SERS性能。為了驗(yàn)證合成的MPDPs納米粒子的拉曼增強(qiáng)性能，分別在金基底上對(duì)Cy5拉曼分子、Mo O2、Mo O2＠PDA和MPDPs進(jìn)行了SERS檢測(cè)，見(jiàn)圖16。Mo O2組采用混合方法將拉曼分子與Mo O2納米粒子混合進(jìn)行SERS檢測(cè)，Mo O2＠PDA和MPDPs組則采用醌基和巰基相連的方式，將拉曼分子上的巰基與PDA表面的醌基結(jié)合連接到納米粒子表面。Cy5拉曼分子的拉曼光譜，觀察到了1 594、1 500、1 271和1 200 cm－1處的4個(gè)主要Cy5帶，分別對(duì)應(yīng)于ν(CN)拉伸，ν(CC)環(huán)、ν(CC)環(huán)，ν(CN)拉伸模式。由于Mo O2、Mo O2＠PDA和MPDPs納米粒子具有更高的靈敏度，與Cy5相比顯示出其他峰(例如1 150，1 325和1 390 cm－1)。隨著層層修飾，SERS信號(hào)不斷增強(qiáng)，說(shuō)明MPDPs納米粒子能夠大大增強(qiáng)拉曼信號(hào)。接下來(lái)通過(guò)公式(1)對(duì)MPDPs的SERS增強(qiáng)因子(EF)進(jìn)行計(jì)算。

圖16 Cy5、MoO2、MoO2＠PDA和MPDPs的SERS檢測(cè)圖Fig．16 SERS spectra of Cy5，Mo O2，MoO2＠PDA and MPDPs NPs

由公式(1)計(jì)算可得Cy5修飾的MPDPs的EF為7.2×106。而且由于PDA表面具有大量的官能團(tuán)易于生物功能化，這使得該納米探針能夠應(yīng)用于后續(xù)的DNA、多肽等生物分子的連接，從而為腫瘤細(xì)胞、細(xì)菌、病毒等生物分子的檢測(cè)和治療提供有效途徑。

3 結(jié) 論

通過(guò)多巴胺在堿性條件下的自聚合特性，合成了具有表面增強(qiáng)拉曼散射和光熱轉(zhuǎn)換性能的MPDPs納米粒子。實(shí)驗(yàn)中的MoO2納米粒子，自聚合成為摻雜Mo O2的聚多巴胺納米材料，隨后在聚多巴胺粒子的表面原位還原上鉑顆粒以合成最終的MPDPs納米粒子。設(shè)計(jì)合成的MPDPs納米粒子同時(shí)具備表面增強(qiáng)拉曼、光熱和產(chǎn)生氧氣的作用。MPDPs納米粒子出色的SERS效果由電荷轉(zhuǎn)移和分子共振的耦合產(chǎn)生。結(jié)合近紅外吸收和出色的光熱轉(zhuǎn)換能力，MPDPs納米粒子還可作為一種有PTT治療劑。鉑顆粒生成的氧氣可以為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的光敏劑PDT治療供氧，以增強(qiáng)治療效果。