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    miRNA-155與胰腺疾病

    2017-01-11 08:52:42王冬燕湯茂春趙嚴(yán)
    中華胰腺病雜志 2017年5期
    關(guān)鍵詞:胰腺癌胰腺特異性

    王冬燕 湯茂春 趙嚴(yán)

    miRNA-155與胰腺疾病

    王冬燕 湯茂春 趙嚴(yán)

    microRNA(miRNA)是一類單鏈非編碼RNA,是與多種疾病發(fā)生發(fā)展有關(guān)的新的調(diào)節(jié)分子家族之一。miRNA不編碼蛋白,具有高度的保守性、時序性和組織特異性,通過與靶mRNA的3′端非編碼區(qū)3′-UTR結(jié)合,降解或者抑制mRNA的翻譯,導(dǎo)致靶基因的轉(zhuǎn)錄后沉默,從而參與靶基因功能的調(diào)節(jié)[1-3]。miR-155位于人類21號染色體的非編碼轉(zhuǎn)錄體BIC第3個外顯子內(nèi),是一個多功能 miRNA,它在多種炎癥、自身免疫性疾病、腫瘤(結(jié)直腸癌、肝癌、胰腺癌、胃癌)等人體多種病理生理過程中發(fā)揮重要作用。miR-155在活化的各種免疫細(xì)胞中表達普遍升高,是免疫系統(tǒng)最主要的miRNA之一,參與天然免疫應(yīng)答和特異性免疫應(yīng)答。本文就miR-155在胰腺相關(guān)疾病中的作用做一綜述。

    一、miR-155與免疫系統(tǒng)及炎癥的關(guān)系

    目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多個miRNAs參與免疫系統(tǒng)的發(fā)生發(fā)展及病理生理性免疫應(yīng)答反應(yīng)。miR-155是免疫系統(tǒng)最重要的miRNA之一,miR-155敲除的小鼠表現(xiàn)為免疫缺陷,機體抵抗微生物入侵的能力降低。近年來,miR-155在免疫應(yīng)答反應(yīng)中的作用得到廣泛的研究,其在活化的免疫細(xì)胞中表達明顯升高[4],不僅參與天然免疫,而且在特異性免疫中也起重要的作用。miR-155是目前發(fā)現(xiàn)的靶基因最多的miRNAs之一,可以直接作用于多種基因,如轉(zhuǎn)錄因子、細(xì)胞因子、蛋白受體及酶類等,發(fā)揮其調(diào)節(jié)和輔助等功能。目前在巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞中,miR-155的靶基因有IKKε、FADD、SOCS1、TNF和BACH1等,它們通過調(diào)節(jié)JNK及IFN信號通路、NF-κB、AP-1等調(diào)節(jié)天然免疫應(yīng)答反應(yīng)。B細(xì)胞中的miR-155靶基因有c-MAF、PU.1、AID和SHIP等,它們分別在B細(xì)胞成熟、產(chǎn)生高親和力抗體、記憶性B細(xì)胞的形成和體細(xì)胞高頻突變中起重要的作用。T細(xì)胞中的miR-155通過直接作用于c-MAF、IFN-gRα、SOCS1及Smad2等維持輔助性T細(xì)胞分化的平衡及內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。

    miR-155在多種炎癥性疾病中異常表達,并與這些疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。O′Connell等[5]發(fā)現(xiàn),miR-155的表達與自身免疫性腦脊髓炎(EAE)的發(fā)生密切相關(guān),miR-155-/-小鼠不能發(fā)展為EAE。他們還發(fā)現(xiàn),miR-155除了促進巨噬細(xì)胞釋放炎癥性細(xì)胞因子,更重要的是可以促進促炎性輔助性T細(xì)胞(Th1和Th17)的分化。然而,這正是導(dǎo)致EAE發(fā)生的直接因素。Bluml等[6]發(fā)現(xiàn),miR155-/-小鼠在Th17細(xì)胞中發(fā)生極化現(xiàn)象,Th17細(xì)胞因子IL-17、IL-22生成減少。這些研究表明Th17細(xì)胞與miR-155密切相關(guān),miR-155通過影響T細(xì)胞分化而參與疾病炎癥進程的,在炎癥發(fā)生過程中起著重要的促炎癥效應(yīng)。

    二、miR-155與AP的關(guān)系

    在AP發(fā)病過程中,早期全身炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)引起的MODS和晚期感染壞死是AP患者死亡最重要的兩個“事件”,炎癥是這兩個事件的核心問題。實驗證明胰腺水腫、壞死、滲出后,激活淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等免疫細(xì)胞釋放促炎因子IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α、IL-17、IL-23等,而抗炎因子IL-4、IL-10降低,導(dǎo)致促炎-抗炎因子平衡紊亂,從而產(chǎn)生SIRS和MODS直至死亡[7]?;谏鲜鲇^點可以把重癥急性胰腺炎(SAP)看成一種全身系統(tǒng)疾病,從AP 發(fā)生SIRS再到并發(fā)MODS,機體出現(xiàn)免疫過激和免疫抑制先后并呈的病理生理改變,免疫過激與AP早期的多器官衰竭有關(guān),而免疫抑制則是胰腺中后期感染的潛在誘因[8]。

    研究發(fā)現(xiàn)[9]CD4+T細(xì)胞在實驗小鼠AP組織損傷發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用。小鼠CD4+T細(xì)胞經(jīng)體外刺激后產(chǎn)生大量Th1效應(yīng)相關(guān)的促炎癥細(xì)胞因子(IFN-γ、TNF-α)以及Th17相關(guān)的促炎癥細(xì)胞因子IL-17A[10-11]。近年來眾多研究及實驗證實,AP大鼠及患者血清中促炎癥細(xì)胞因子(如TNF-α、IL-17、IL-23)明顯增多,SAP大鼠及患者血清中含量更高,且促炎因子的血清水平與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)[12-13]。AP過程中,具有免疫調(diào)節(jié)功能的CD4+T細(xì)胞Treg下調(diào),不能維持免疫正常狀態(tài),從而進一步放大胰腺局部免疫應(yīng)答,促使SAP的發(fā)生[14]。因此CD4+T細(xì)胞參與了AP的炎癥過程,而Th1、Th17細(xì)胞功能的變化參與AP發(fā)生及AP從輕型向重型的發(fā)展。由此可以認(rèn)為miR-155可能通過多種途徑影響免疫體統(tǒng),調(diào)節(jié)相關(guān)基因表達,從而參與了AP的發(fā)展歷程。

    臨床上評估和判斷AP嚴(yán)重程度的指標(biāo)包括血清鈣、CRP、PCT及BASAP、Ranson、APACHEⅡ、Balthazar CT評分等。但血液學(xué)檢查中所有指標(biāo)均缺乏高度特異性,除了胰腺炎可引起CRP和血漿PCT指標(biāo)的變化外,還有其他感染性疾病也能引起其升高。Ranson評分需要發(fā)病48 h內(nèi)的生理指標(biāo),有時無法在發(fā)病初期明確疾病嚴(yán)重程度,缺乏早期優(yōu)勢;APACHEⅡ評分則受到年齡、既往其他系統(tǒng)疾病影響,計分多而復(fù)雜,對局部病變情況反應(yīng)不夠充分;CT評分主要針對胰腺壞死情況,在早期評估AP嚴(yán)重程度上有一定局限性[15]。研究發(fā)現(xiàn)AP患者miR-155的表達與AP的嚴(yán)重程度有著密切的關(guān)系。林姝等[16]通過對28例中、重度AP和32例輕度AP患者的血清標(biāo)本研究發(fā)現(xiàn),miR-155表達量顯著下調(diào),并且miR-155與MCTSI、BISAP、Ranson、APACHEⅡ評分均相關(guān)(P<0.05);ROC曲線下面積0.882,預(yù)測AP的最佳cut-off值為3.55,敏感性92.5%,特異性85.7%。可見miR-155對AP嚴(yán)重程度有一定的預(yù)測作用。

    三、miR-155與慢性胰腺炎的關(guān)系

    臨床上診斷慢性胰腺炎(CP)的方法首選胰腺CT,還可以經(jīng)內(nèi)鏡逆行膜膽管造影(endoscopic retrograde cholangiopan creatography,ERCP)以及胰腺功能檢測(pancreas function test,PFT)來明確診斷。但經(jīng)影像學(xué)以及內(nèi)鏡檢查后,仍然有5%~10%的患者無法確切診斷。miR-155在CP中有所增加,但胰腺癌血漿miR-155表達量顯著高于CP及正常對照組(P<0.05),胰腺癌對CP的AUC為0.762(95%CI0.678~0.846),敏感性和特異性分別為64.5%和73.8%,胰腺癌對正常對照組+CP組的AUC為0.829(95%CI0.767~0.892),敏感性和特異性分別為62.9%和84.5%[17],這一結(jié)果有助于CP與胰腺癌的鑒別診斷,從而提高正確率,降低誤診的發(fā)生。

    四、miR-155與胰腺癌的關(guān)系

    最新研究發(fā)現(xiàn),miRNA表達與多種癌癥相關(guān),大約50%被人類認(rèn)識的miRNAs在基因組上定位于與腫瘤相關(guān)的脆性位點。miR-155在Burkitt淋巴瘤中表達量上升了100倍,Hodgkin淋巴瘤等腫瘤中miR-155水平也有提高。因此,miR-155可能是作為一個癌基因和MYC協(xié)同作用。Caponi等[18]的多中心研究評估了miR-21、miR-155和miR-101作為胰腺導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀黏液性腫瘤(intraductal papillary mucinous neoplasms,IPMNs)潛在生物標(biāo)志物的意義時發(fā)現(xiàn),侵入性IPMNs與非侵入性IPMNs相比以及非侵入性IPMNs與正常組織相比,miR-21和miR-155呈現(xiàn)差異性高表達。相反,miR-101水平在非侵入性IPMNs和正常組織中明顯高于侵入性IPMNs水平。而Yu等[19]分析34例胰腺上皮內(nèi)瘤(PanIN)和15例正常胰管樣品的735種miRNAs,發(fā)現(xiàn)相對于微小非腫瘤性導(dǎo)管上皮細(xì)胞,miR-155在PanIN-2(2.6倍,P=2.6)和PanIN-3(7.4倍,P=7.4)中過表達[20]。表明miR-155在胰腺導(dǎo)管癌的癌前病變中高表達,提示miR-155表達升高是胰腺癌發(fā)生發(fā)展的早期事件。

    miR-155在胰腺癌中可以抑制多種抑癌基因表達,起到了癌基因的作用。胰腺癌早期TP53INP1缺失,誘導(dǎo)TP53INP1過表達后可見細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期停滯。有研究發(fā)現(xiàn),胰腺導(dǎo)管癌和癌旁組織中TP53INP1 mRNA表達水平相似,而癌組織中未見TP53INP1蛋白的表達,提示miR-155有效抑制TP53INP1轉(zhuǎn)錄后的翻譯[21]。Liu等[22]應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測42例胰腺癌組織及癌旁組織的miR-155表達及人sel-1樣(human sel-1-like,SEL1L)基因 mRNA的表達,發(fā)現(xiàn)兩者表達水平呈負(fù)相關(guān)。進一步通過熒光素酶檢測和瞬時高表達miRNA的方法證實胰腺癌細(xì)胞系中SEL1L是miR-155的靶基因。抑癌基因SEL1L在胰腺導(dǎo)管腺癌中表達顯著減少[23]。Liu等[24]分別將miR-155模擬物及抑制物轉(zhuǎn)染到胰腺癌細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)miR-155的表達與MutL同源基因1(MutL homologs,MLH1)蛋白的表達呈負(fù)相關(guān)。MLH1蛋白表達與胰腺癌分化及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),熒光素酶活性檢測提示MLH1是miR-155的靶基因。SOCS1對JAK/STAT3信號通路有負(fù)調(diào)控作用[25],并且在乳腺癌中被證明為miR-155的靶基因[26]。Huang等[27]將miR-155的模擬物及抑制物轉(zhuǎn)染到胰腺癌細(xì)胞PANC1和CaPan-2,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染miR-155模擬物的癌細(xì)胞miR-155的表達上調(diào),侵襲力和遷移能力增強,同時信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3(STAT-3)蛋白的表達上調(diào),而SOCS1蛋白的表達顯著下調(diào),提示miR-155調(diào)控胰腺癌細(xì)胞的侵襲和遷移是通過下調(diào)SOCS1基因的表達,從而調(diào)控STAT-3信號通路而實現(xiàn)的。

    miR-155對胰腺癌診斷、療效監(jiān)測和預(yù)后判斷也有一定價值。Kong等[28]用RT-PCR的方法檢測35例胰腺導(dǎo)管腺癌(PDAC)患者、15例CP患者及15例健康人的血漿中7個miRNA的表達水平,發(fā)現(xiàn)miR-155及miR-196a可以區(qū)分病變胰腺(PDAC/CP)及正常胰腺,提示miR-155可以作為一線篩查PDCA的血漿標(biāo)志物。LaConti等[29]采用RT-PCR檢測p48-Cre/LSL-KrasG12D轉(zhuǎn)基因胰腺癌模型小鼠的miRNA表達情況,發(fā)現(xiàn)腫瘤組織及血漿miR-155均表達上調(diào)。用吉西他濱處理該小鼠后,小鼠血漿中的miR-10及miR-155表達水平分別降低了30倍和60倍,提示這兩個miRNA可能是觀察胰腺癌療效的標(biāo)志物。Papaconstantinou等[30]采用RT-PCR檢測了88例胰腺癌及98例癌旁組織或器官捐獻的正常胰腺組織中的9個miRNA的表達,發(fā)現(xiàn)胰腺癌組織miR-155、miR-21高表達與臨床分期(T3、T4)呈正相關(guān),并且兩者都是預(yù)后不良的獨立預(yù)測因素。

    胰腺癌的miR-155表達增高,提示其可能作為胰腺癌早期診斷的特異性腫瘤標(biāo)志物。對于胰腺癌高?;颊呖陕?lián)合檢測miRNA表達及CA19-9、CA242、CEA等血清標(biāo)記物以提高對胰腺癌的診斷。在AP中,miR-155表達增高也具有一定的診斷意義。但一個miRNA可調(diào)控多個靶基因,而一個靶基因也可以由多個miRNA調(diào)控。因此,如何聯(lián)合檢測miR-155的表達水平,從而提高胰腺癌的早期診斷效率、提高對AP疾病嚴(yán)重程度的判斷是今后研究中所需要深度探討的內(nèi)容。

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    (本文編輯:屠振興)

    10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2017.05.018

    國家科學(xué)自然基金面上項目(81570578)

    200072 上海,同濟大學(xué)附屬第十人民醫(yī)院消化科

    趙嚴(yán),Email: 320zhaoyan@163.com

    2016-10-25)

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