抗結(jié)核藥物超敏反應患者PBMCs中T淋巴細胞亞群及CD69、CD40L的表達意義*

吳于青，姜國強，劉 ，周燕紅，張梁偉

(江西省胸科醫(yī)院結(jié)核科，南昌 330006)

超敏反應是結(jié)核病患者在藥物治療過程中常見不良反應之一，約占抗結(jié)核藥物不良反應的1/5[1-3]；患者在治療過程中出現(xiàn)超敏反應后，輕者中斷治療延誤病情，而對于出現(xiàn)嚴重的皮膚不良反應患者，如藥物反應伴嗜酸性粒細胞增多和系統(tǒng)癥狀(DRESS)、Sterens-Johnson綜合征(SJS)、中毒性表皮壞死松解癥(TEN)等，則可導致死亡?？菇Y(jié)核藥物超敏反應的發(fā)生機制尚不清楚，目前觀點認為主要以遲發(fā)型超敏反應為主，由抗原特異性T淋巴細胞介導，在致敏藥物刺激后，藥物特異性的T淋巴細胞活化并在其表面表達多個活化標記物，如CD25、CD69、CD71、CD40L等，淋巴細胞活化后分泌相關的細胞因子，產(chǎn)生炎性反應[4]。

本研究通過對抗結(jié)核藥物超敏反應患者外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)中T淋巴細胞亞群Th1細胞、Th2細胞、CD4+CD25+Treg及CD69、CD40L表面分子的表達變化進行檢測，探討抗結(jié)核藥物超敏反應的細胞免疫特性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇本院2019年1月至2020年1月符合初治肺結(jié)核治療過程中出現(xiàn)超敏反應診斷的患者60例作為病例組，其中男26例，女34例，平均年齡37.9歲(18～65歲)。本研究經(jīng)過本院倫理委員會討論并通過，所有研究對象均簽訂知情同意書。初治肺結(jié)核診斷標準：初治肺結(jié)核患者均符合中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準-肺結(jié)核診斷(WS 288-2017)?？菇Y(jié)核藥物超敏反應的判斷[5-6]：患者臨床表現(xiàn)及實驗室檢查符合2010年出版《中國臨床皮膚病學》中藥物超敏反應的診斷，并由2名?？漆t(yī)師共同診斷為藥物超敏反應(同時判斷出皮疹的類型)。排除標準：(1)合并獲得性免疫缺陷病毒(HIV)感染者；(2)合并自身免疫性相關疾病或長期服用激素類藥物者；(3)采血前1周內(nèi)有輸血史或做過PET-CT檢查者；(4)采血前已行抗過敏治療并使用了免疫抑制劑者；(5)既往有藥物過敏史者。對照組選擇同期抗結(jié)核治療過程中未出現(xiàn)超敏反應的患者，根據(jù)性別、年齡、來源與病例組1∶1匹配，所有患者抗結(jié)核治療方案均為2H(異煙肼)R(利福平)Z(吡嗪酰胺)E(乙胺丁醇)/4HR，患者入組以后，統(tǒng)一于清晨空腹用肝素抗凝管采外周靜脈血備檢，標本室溫保存，4 h內(nèi)送檢。

1.2 方法

采用流式細胞儀檢測PBMCs中Th1細胞比例、Th2細胞比例、CD4+CD25+Treg比例及CD69、CD40表達水平。

1.3 統(tǒng)計學處理

2 結(jié) 果

2.1 入組患者的一般特征

病例組患者入組后，根據(jù)性別、年齡(相差不超過3歲)、患者來源1∶1匹配對照組，使兩組患者具有可比性，兩組患者的一般情況比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 病例組和對照組患者社會人口統(tǒng)計學特征

2.2 患者PBMCs中Th1細胞、Th2細胞、CD4+CD25+Treg表達比較

經(jīng)流式細胞儀結(jié)果分析，病例組患者PBMCS中的CD4+IFN-γ+Th1細胞比例較對照組明顯升高(P<0.01)，CD4+IL-4+Th2細胞比例較對照組升高，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與對照組比較，病例組患者PBMCS中CD4+CD25+Treg比例較對照組降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 病例組和對照組患者外周血T淋巴細胞亞群表達比較

2.3 患者PBMC中CD40L和CD69的表達比較

經(jīng)流式細胞儀結(jié)果分析，病例組患者PBMCS中的細胞表面CD40L和CD69的表達水平較對照組均明顯升高(P<0.05)，見表3。

表3 病例組和對照組患者PBMCS中的細胞表面CD40L和CD69的表達比較

3 討 論

超敏反應是結(jié)核病患者在治療過程中常見的藥物不良反應之一，到目前為止，抗結(jié)核藥物導致的超敏反應的發(fā)生機制尚不清楚。患者出現(xiàn)超敏反應后往往需要中斷治療，從而導致治療不規(guī)則影響我國結(jié)核病的防控。臨床觀察發(fā)現(xiàn)抗結(jié)核藥物超敏反應的臨床表現(xiàn)主要以各種皮膚損害為主，部分患者伴有發(fā)熱、肝腎損害、血嗜酸細胞比例升高等[7-8]，符合Ⅳ型(遲發(fā)型)超敏反應的表現(xiàn)。目前有觀點認為，藥物作為抗原或半抗原初次接觸T淋巴細胞后引起T淋巴細胞活化，形成藥物特異性T淋巴細胞克隆長期存留于組織和血液中，當記憶性T淋巴細胞再次接觸致敏藥物后便迅速活化并增殖，產(chǎn)生不同的炎癥因子而引起各種臨床表現(xiàn)。CD4+CD25+Treg細胞是一組具有免疫抑制功能的T淋巴細胞，能抑制自身反應性T細胞和B淋巴細胞的活化、增殖、免疫球蛋白的分泌及各種炎性細胞因子的產(chǎn)生。

本研究運用流式細胞儀檢測抗結(jié)核藥物超敏反應患者PBMCs中T淋巴細胞亞群、Treg及細胞表面分子CD69、CD40L的表達，并與同期抗結(jié)核治療過程中未出現(xiàn)超敏反應的初治肺結(jié)核患者比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，抗結(jié)核藥物超敏反應患者PBMCs中CD4+IFN-γ+Th1細胞比例和細胞表面CD69、CD40L的表達水平明顯高于對照組(P<0.05)，CD4+CD25+Treg細胞比例低于對照組(P<0.05)，但CD4+IL-4+-γ+Th2細胞比例兩組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。據(jù)此筆者認為，在抗結(jié)核藥物超敏反應發(fā)生過程中，患者特異性T淋巴細胞表面CD69、CD40L等分子表達上調(diào)，細胞活化增殖，其中以Th1細胞活化增殖為主，成為針對此藥物抗原的殺傷性T淋巴細胞,而具有免疫抑制功能的Treg細胞比例下降，外周血中促炎因子分泌增多，而抗炎因子釋放減少，導致組織器官損害，與部分研究結(jié)果[9-13]類似。

在細胞免疫中,當抗原提呈細胞(APC)將抗原提呈給幼稚T細胞形成主要組織相溶性復合體-T淋巴細胞受體(MHC-TCR)復合物時,T淋巴細胞表面的CD40L表達上調(diào)，一般在復合物形成之后4 h內(nèi),T淋巴細胞表面的CD40L與APC上的CD40結(jié)合,并刺激APC產(chǎn)生協(xié)同刺激分子,在抗原信號及協(xié)同信號雙重作用下,T淋巴細胞被激活為針對某種抗原的殺傷T淋巴細胞,產(chǎn)生相應的細胞因子而發(fā)揮效應功能。由于抗結(jié)核藥物是聯(lián)合運用，患者在抗結(jié)核藥物超敏反應發(fā)生后，致敏藥物的快速識別一直是工作中的難點，本研究中，抗結(jié)核藥物超敏反應患者外周血T淋巴細胞表面CD69、CD40L等分子表達迅速增加聚集，并較好地體現(xiàn)出此類患者機體的免疫應答，提示檢測該類分子在遲發(fā)型超敏反應患者外周淋巴細胞中的改變可用于遲發(fā)型超敏反應的診斷及致敏藥物的識別，這也是筆者今后研究的方向。

CD4+T淋巴細胞根據(jù)其產(chǎn)生的細胞因子分為不同的亞群：Th1細胞、Th2細胞和Treg等，其中Th1細胞和CD4+CD25+Treg的比率決定了免疫反應的發(fā)生和程度，以及疾病的進程[14-16]。本研究顯示抗結(jié)核藥物超敏反應發(fā)生過程中患者以Th1淋巴細胞活化增殖為主，變化符合遲發(fā)型超敏反應發(fā)生特點，下一步將繼續(xù)對相關的細胞因子表達水平進行研究，將來基于誘導或增強能夠抑制過敏性炎性反應的Treg的新型治療策略也許是可取的。