牛詩瓊,鄧紹團,林雪萍,王宇苗,羅招凡*
糖尿病是除心血管疾病、癌癥以外危害人類健康的第3大疾病,包含1型糖尿病(Type 1 diabetes,T1DM)、2型糖尿病(Type 2 diabetes,T2DM)以及隱匿性自身免疫性糖尿病(Latent autoimmune diabetes,LADA)。LADA病因較為復(fù)雜,受多種因素的影響,以胰島B細(xì)胞破壞為主,其在免疫學(xué)特征、病理特征、代謝特征等方面與T1DM 和T2DM存在著諸多相似與不同,被認(rèn)為是處于T1DM 和T2DM之間的“灰色地帶”[1]。以往研究表明,25(OH)D可以調(diào)節(jié)體液免疫應(yīng)答介導(dǎo)的胰島自身免疫反應(yīng),其濃度與T1DM患者胰島細(xì)胞自身抗體滴度和陽性率具有一定相關(guān)性[2]。但尚未見25(OH)D水平與LADA患者臨床生化指標(biāo)、尿異形RBC率、胰島細(xì)胞自身抗體之間相關(guān)性的研究報道。本研究回顧性分析了臨床診斷為LADA患者73例,探討其25(OH)D水平與臨床生化和胰島細(xì)胞自身抗體之間的關(guān)系。
1.1 研究對象 選取2018年8月至2019年12月中山大學(xué)附屬第七醫(yī)院臨床診斷為LADA患者73例,男37例,女36例,年齡(35.01±8.56)歲。診斷標(biāo)準(zhǔn):參照2005年國際糖尿病免疫學(xué)會(IDS)標(biāo)準(zhǔn)并結(jié)合中華醫(yī)學(xué)會糖尿病學(xué)分會(CDS)制定的LADA專家共識[3],臨床診斷為糖尿病并具備以下3點:①胰島細(xì)胞自身抗體陽性;②年齡≥18歲;③確診后至少6個月時間內(nèi)不需要或依賴胰島素治療。排除標(biāo)準(zhǔn):排除妊娠婦女、惡性腫瘤、嚴(yán)重心腎功能不全和其他免疫性疾病后,符合上述條件即可納入為LADA研究對象。另選取健康體檢人群68例作為對照組,男38例,女30例,年齡(34.75±9.85)歲。按統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)測定并記錄所有對象的一般臨床資料,包括:年齡、性別、身高、體重、收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP),并計算體重指數(shù)(BMI)。
1.2 儀器與試劑 儀器:生化分析由Cobas6000自動生化分析儀完成,尿異形紅細(xì)胞由AVE-766尿液分析流水線檢測完成,25(OH)D的檢測由羅氏E601電化學(xué)發(fā)光完成。試劑:胰島細(xì)胞自身抗體試劑盒由深圳亞輝龍?zhí)峁?/p>
1.3 方法
1.3.1 生化指標(biāo)的檢測 采集空腹或餐后2 h血液,1 000 r/min離心10 min后留取血清,分別測定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、空腹C肽(FCP)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2hPG)、餐后2h C肽(2hFCP)。
1.3.2 胰島細(xì)胞抗體的檢測 采集患者空腹血液,利用深圳亞輝龍生產(chǎn)的糖尿病自身抗體免疫印跡檢測試劑盒,檢測谷氨酸脫羧酶抗體(Glutamic acid decarboxylase antibody,GADA)、鋅轉(zhuǎn)運蛋白8抗體(Zinc transporter 8 autoantibodies,ZnT-8A)、蛋白酪氨酸磷酸酶抗體(Protein tyrosine phosphatase antibody,IA-2A)、胰島細(xì)胞抗體(Islet cell antibody,ICA)、胰島素自身抗體(Insulin autoantibody,IAA)。
1.3.3 25(OH)D檢測 應(yīng)用羅氏E601電化學(xué)發(fā)光,按照25(OH)D檢測試劑盒(試劑盒為原裝試劑)要求進(jìn)行測試,并設(shè)立相應(yīng)質(zhì)控。根據(jù)25(OH)D水平將LADA分為3組,A組25(OH)D≥30 ng/ml,為正常組;B組25(OH)D 20~30 ng/ml,為不足組;C組25(OH) D<20 ng/ml為缺乏組。
2.1 各組間一般臨床資料比較 LADA患者73例,其中A組24例,B組28例,C組21例。經(jīng)統(tǒng)計分析表明,A組、B組、C組BMI均低于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),LADA患者組間BMI、病程差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。A組、B組、C組、對照組各組間年齡、性別、SBP、DBP組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),說明各組間基線齊,具有可比性。見表1。
表1 各組間患者一般臨床資料比較
2.2 各組間生化指標(biāo)、尿異形RBC率比較 A組、B組、C組FCP、餐后2hFCP均低于對照組,C組FCP、2hFCP低于A組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。A組、B組、C組尿異形RBC率、HbA1c、FPG、2hPG均高于對照組,C組尿異形RBC率、2hPG高于A組、B組,B組、C組HbA1c高于A組,B組2hPG高于A組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。各組間ALT、AST、TC、TG差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表2。
表2 各組患者肝功能指標(biāo)及尿異形RBC率比較
表3 各組患者胰島B細(xì)胞功能指標(biāo)比較
2.3 各組間胰島細(xì)胞抗體陽性率比較 73例LADA患者中GADA陽性40例,陽性率54.79%,ZnT-8A陽性49例,陽性率67.12%,IA-2A陽性19例,陽性率26.03%。ICA陽性11例,陽性率15.07%,IAA陽性14例,陽性率19.18%。5種胰島細(xì)胞自身抗體陽性率ZnT-8A>GADA>IA-2A>IAA>ICA。其中GADA陰性的33例患者中,ZnT-8A陽性25例,GADA陽性或ZnT-8A陽性患者總計65例,占比89.04%,各組間胰島細(xì)胞自身抗體陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),見表4。
表4 各組間患者胰島細(xì)胞自身抗體陽性率情況[例(%)]
2.4 各組間胰島細(xì)胞抗體數(shù)量比較 A、B、C組患者檢測出1種胰島細(xì)胞自身抗體分別為17、17、7例,占比分別為70.83%、60.71%、33.33%,≥2種胰島細(xì)胞自身抗體分別為7、11、14例,占比分別為29.17%、39.29%、66.67%,結(jié)果表明,三組間1種胰島細(xì)胞自身抗體陽性率和≥2種胰島細(xì)胞自身抗體陽性率差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=6.78,P=0.03),A組1種胰島細(xì)胞自身抗體陽性率高于C組,≥2種胰島細(xì)胞自身抗體陽性率低于C組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ=6.33,P=0.02),B組與A組、C組比較,抗體陽性數(shù)量差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.59,P=0.44;χ2=3.60,P=0.06),見表5。
表5 各組患者胰島細(xì)胞自身抗體數(shù)量差異[例(%)]
2.5 25(OH)D與生化指標(biāo)、尿異形RBC率、胰島細(xì)胞自身抗體個數(shù)相關(guān)性分析 LADA患者25(OH)D水平與尿異形RBC率、HbA1c、FPG、2hPG、胰島細(xì)胞自身抗體個數(shù)呈負(fù)相關(guān),r值分別為-0.25、-0.42、-0.47、-0.35、-0.36,與FCP、2hFCP呈正相關(guān),r值分別為0.22、0.27(P<0.05),25(OH)D水平與ALT、AST、TG、TC無明顯相關(guān)性(P>0.05),見表6。
表6 LADA患者25(OH)D水平與生化指標(biāo)、尿異形RBC率、胰島細(xì)胞自身抗體個數(shù)相關(guān)性分析
LADA與T1DM的自身免疫發(fā)病機制相同,不同之處在于其胰島細(xì)胞受自身反應(yīng)性T細(xì)胞介導(dǎo),導(dǎo)致的免疫損害呈緩慢性進(jìn)展[4],因此,LADA起病緩慢、癥狀較輕,常被誤診為T2DM。25(OH)D是一種調(diào)節(jié)骨骼和鈣磷代謝的神經(jīng)內(nèi)分泌激素,與糖尿病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)??捎绊懚喾N細(xì)胞的增殖、分化、凋亡,具有調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)、維持免疫內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的功能[5]。胰島細(xì)胞自身抗體是判斷胰島自身免疫進(jìn)展的重要指標(biāo),抗體陽性對胰島B細(xì)胞分泌減弱有指導(dǎo)意義[6]。以往研究報道,25(OH)D缺乏與T1DM、T2DM發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系,25(OH)D濃度影響糖尿病患者糖代謝、脂肪代謝、胰島細(xì)胞功能等[7]。
本研究結(jié)果顯示,25(OH)D水平正常、不足、缺乏患者的年齡、性別、病程、SBP、DBP差異無統(tǒng)計學(xué)意義,其BMI低于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
臨床上糖尿病多有代謝綜合征表現(xiàn),以往研究表明,T2DM有超重、肥胖、血脂、血壓等異常[8]。本研究證實,與T2DM不同,LADA患者BMI低于正常對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,說明LADA患者身高體重指數(shù)較正常人群偏低。通過對比各組間胰島B細(xì)胞功能、生化結(jié)果可知,A組FCP、餐后2hFCP均高于C組,A組FPG、餐后2hPG均低于C組(P<0.05),說明25(OH)D可能對胰島B細(xì)胞有一定保護作用,具體作用機制未明,可能與25(OH)D對于炎癥的抑制、胰島素合成分泌的促進(jìn)以及降低胰島素抵抗有關(guān)。本研究顯示,3個試驗組FCP、2hFCP均低于對照組,證實了LADA患者病情進(jìn)程中一般同時存在胰島素分泌不足和胰島素抵抗[9],其胰島B細(xì)胞受自身免疫性破壞,胰島素分泌功能呈現(xiàn)為進(jìn)展速度不均一的進(jìn)行性減退[10]。
隨著疾病的進(jìn)展,糖尿病患者易并發(fā)心血管、腎臟等疾病,以往研究表明,尿異形RBC率的高低可以提示血尿來源,當(dāng)非均一性血尿>80%或異形RBC>5%可提示為腎小球源性血尿[11]。本研究結(jié)果顯示,A組、B組、C組患者尿異形RBC率均高于對照組,C組尿異形RBC率高于A組、B組,B組尿異形RBC率高于A組。但各組平均尿異形RBC率均低于80%,說明部分糖尿病患者可能存在腎損害,但具體比率如何需進(jìn)一步研究。
HbA1c反映患者過去1~2個月血糖控制情況[12]。本研究中,A組HbA1c低于B、C組,說明25(OH)D水平高的患者血糖控制更加穩(wěn)定。胰島細(xì)胞自身抗體是糖尿病發(fā)展過程中自身免疫產(chǎn)生的,主要包括GADA、ZnT-8A、IA-2A、ICA、IAA。GADA分布在胰島B細(xì)胞,特異性反映胰島細(xì)胞破壞情況,是糖尿病自身抗體最早出現(xiàn)的一種抗體[13]。ZnT-8A是近年新發(fā)現(xiàn)的自身抗體,屬于鋅轉(zhuǎn)運體蛋白,在胰島素合成和分泌中發(fā)揮重要作用。經(jīng)統(tǒng)計分析表明,各組間同一胰島細(xì)胞抗體陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義,各胰島細(xì)胞自身抗體陽性率ZnT-8A>GADA>IA-2A>IAA>ICA,與陳立民[14]的研究結(jié)果有部分差異,可能與樣本來源和檢測方法不同有關(guān)。部分LADA患者血清中存在不止一種類別胰島細(xì)胞自身抗體,將抗體組合后按數(shù)量分為1種胰島細(xì)胞抗體陽性、≥2種胰島細(xì)胞抗體陽性2個類別,根據(jù)血清25(OH)D水平分別歸入相應(yīng)組別,A組1種胰島細(xì)胞抗體陽性率高于C組,≥2種胰島細(xì)胞抗體陽性率低于C組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,說明25(OH)D水平低的患者胰島細(xì)胞自身抗體越復(fù)雜。相關(guān)性分析結(jié)果表明,LADA患者 25(OH)D水平與尿異形RBC率、HbA1c、FPG、2hPG、胰島細(xì)胞自身抗體數(shù)量呈負(fù)相關(guān),與FCP、2hFCP呈正相關(guān)。
綜上所述,25(OH)D水平正常組胰島細(xì)胞自身抗體數(shù)量低于缺乏組,隨著25(OH)D水平的降低,F(xiàn)CP、2hFCP濃度降低,尿異形RBC率、HbA1c、FPG、2hPG水平增高,胰島細(xì)胞抗體數(shù)量增多。如果通過飲食、藥物等提高25(OH)D水平,可能影響胰島細(xì)胞自身抗體數(shù)量和濃度,對保護LADA患者胰島細(xì)胞可能有重要作用。