血清Spry2基因表達(dá)水平與非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系

謝鵬

（平頂山市第一人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，河南 平頂山 467000）

肺癌是臨床最常見的惡性腫瘤之一，非小細(xì)胞肺癌約占所有肺癌的80%，由于該疾病預(yù)后性差，病死率高[1-2]。目前，對(duì)于早期非小細(xì)胞肺癌，臨床上常采用非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)進(jìn)行治療，但術(shù)后復(fù)發(fā)率較高，30%左右的患者因術(shù)后癌癥復(fù)發(fā)而死亡[3-4]。因此，對(duì)非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)的復(fù)發(fā)進(jìn)行準(zhǔn)確預(yù)測以及探究影響復(fù)發(fā)的相關(guān)因素是臨床的重要課題之一。Spry2（sprouty2）是由sprouty2基因編碼的一種Ras/絲裂原激活蛋白激酶信號(hào)通路特異性抑制蛋白。研究顯示，血清Sprouty蛋白包括4亞型,有負(fù)向調(diào)控作用，Spry2基因已被證明對(duì)卵巢癌、肝癌等多種癌細(xì)胞的增殖有關(guān)[5-6]，因此，Spry2基因的表達(dá)情況已成為腫瘤治療以及預(yù)后的研究熱點(diǎn)。但對(duì)于非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的影響以及術(shù)后復(fù)發(fā)情況研究較少。因此，本研究探討了血清Spry2基因表達(dá)水平與非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系，以期為臨床非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)預(yù)測提供新方法，。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年2月至2019年2月在我院進(jìn)行非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)患者106例進(jìn)行研究，男69例，女37例，年齡56～79歲，平均年齡（68.14±10.26）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴符合《中國非小細(xì)胞肺癌放射治療臨床指南(2020版)》中的非小細(xì)胞肺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]；⑵經(jīng)影像學(xué)及組織學(xué)活檢確診為非小細(xì)胞肺癌，在我院接受非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)患者；⑶相關(guān)臨床資料完整且患者、家屬知情并同意；⑷經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)通過。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴合并多種惡性腫瘤患者；⑵嚴(yán)重心臟病高血壓患者。術(shù)后隨訪2年，根據(jù)術(shù)后復(fù)發(fā)情況分為復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組。根治切除術(shù)后發(fā)現(xiàn)病灶殘端、同側(cè)胸腔、余肺葉等局部腫瘤復(fù)發(fā)以及對(duì)側(cè)肺組織、縱膈、肺門淋巴結(jié)遠(yuǎn)端等遠(yuǎn)端復(fù)發(fā)為復(fù)發(fā)，未見腫瘤轉(zhuǎn)移為未復(fù)發(fā)。復(fù)發(fā)組42例，男25例，女17例，年齡56～79歲，平均年齡（67.32±11.06）歲，未復(fù)發(fā)組64例，男44例，女20例，年齡56～79歲，平均年齡（68.67±10.02）歲。

1.2 觀察指標(biāo)

1.2.1 非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)臨床特征 通過隨訪調(diào)查以及門診調(diào)查，記錄患者的年齡、性別、吸煙史、病理類型、住院時(shí)間、手術(shù)時(shí)間、腫瘤分期、用力呼氣容積（forced expiratory volume in certain second，F(xiàn)EV）%、置管時(shí)間。

1.2.2 Western Blot檢測兩組患者血清S-CD105、MMP9、Spry2表達(dá)情況比較 術(shù)前，取患者空腹靜脈血3 ml，分離血清后，加入細(xì)胞裂解液裂解，采用提取細(xì)胞總蛋白，嚴(yán)格按照操作說明進(jìn)行（西寶生物科技(上海)股份有限公司）。采用二喹啉甲酸試劑盒進(jìn)行蛋白定量（上海康朗生物科技有限公司），提取10 g/孔蛋白進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳（JY-SPC型，北京君意東方電泳設(shè)備有限公司），轉(zhuǎn)膜至聚偏二氟乙烯膜，加入5%脫脂牛奶室溫封閉2 h，采用洗膜緩沖液洗膜并加一抗（S-CD105、MMP9、Spry2蛋白，稀釋比例均為1:500），于4℃孵育過夜，洗膜加二抗，于室溫下孵育2 h。電化學(xué)發(fā)光顯影，用凝膠圖象處理系統(tǒng)（JY04S-4C，北京君意東方電泳設(shè)備有限公司）分析對(duì)比條帶強(qiáng)弱，選用β-actin作為內(nèi)參。所有抗體均購自美國CST生物有限公司。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，滿足正態(tài)分布且方差齊的計(jì)量資料采用（±s）表示，采用兩樣本獨(dú)立t檢驗(yàn)比較組間差異，計(jì)數(shù)資料用率表示，采用χ2檢驗(yàn)，采用Logistic回歸分析影響非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)性因素；非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測采用受試者工作特征（Receiver operating characteristic，ROC）曲線分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)臨床特征比較非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)與患者的年齡、性別、病理類型、住院時(shí)間、置管時(shí)間、術(shù)后化療、腫瘤大小、手術(shù)時(shí)間無關(guān)（P＞0.05），與患者的癌癥腫瘤分期、腫瘤大小、吸煙史、FEV%有關(guān)（P＜0.05），見表1。

表1 非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)臨床特征比較（n，%）

2.2 Logistic回歸分析影響非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素 篩選2.1中影響非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的差異變量進(jìn)行二分類Logistic回歸分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。腫瘤分期Ⅰ=0，腫瘤分期Ⅱ=1；FEV%≥70=0，F(xiàn)EV%<70=1；腫瘤<3 cm=0，腫瘤≥3 cm=1；腫瘤中低分化=0，腫瘤高分化=1；無吸煙史=0，有吸煙史=1。Logistic回歸分析顯示，腫瘤分期、FEV%是影響非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05），見表2。

表2 非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的Logistic回歸風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測模型

2.3 兩組患者S-CD105、MMP9、Spry2表達(dá)情況比較 復(fù)發(fā)組S-CD105、MMP9表達(dá)水平明顯高于未復(fù)發(fā)組，Spry2表達(dá)水平明顯低于未復(fù)發(fā)組（P<0.05），見圖1、表3。

圖1 兩組患者S-CD105、MMP9、Spry2表達(dá)情況比較

2.4 血清S-CD105、MMP9、Spry2表達(dá)水平預(yù)測非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的ROC特征S-CD105、MMP9、Spry2表達(dá)水平預(yù)測非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的AUC為0.727、0.761、0.772Spry2表達(dá)水平預(yù)測效，見表3，ROC曲線分析見圖2。

圖2 血清、S-CD105、MMP9、Spry2水平預(yù)測非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的ROC曲線分析

表3 兩組患者水平比較（±s）

表3 兩組患者水平比較（±s）

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3 討論

非小細(xì)胞肺癌早期癥狀不明顯，發(fā)病隱匿[8]，大部分患者確診時(shí)病情已進(jìn)中晚期，即使接受手術(shù)治療，由于術(shù)后復(fù)發(fā)，遠(yuǎn)期療效較差，患者5年生存率仍不超過50%，避免術(shù)后復(fù)發(fā)是提高患者生存率的主要方式之一[9-10]。非小細(xì)胞肺癌發(fā)病是多因素結(jié)果，與遺傳、環(huán)境因子、患者個(gè)人生活習(xí)慣密切相關(guān)[11-12]。本研究結(jié)果顯示，非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)與患者的年齡、性別、病理類型、住院時(shí)間、置管時(shí)間、術(shù)后化療、腫瘤大小、手術(shù)時(shí)間無關(guān)，與患者的癌癥腫瘤分期、腫瘤大小、吸煙史、FEV%有關(guān)。腫瘤分期、FEV%是非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。一般來說，小細(xì)胞肺癌根治術(shù)一般對(duì)于早期癌癥患者治療效果較好，腫瘤分期＞Ⅱ的患者，病情已惡化較嚴(yán)重，術(shù)后復(fù)發(fā)的可能性較大。FEV%代表患者的肺功能情況，F(xiàn)EV%低于70，置管時(shí)間較長，說明患者肺功能損傷較嚴(yán)重，術(shù)后病情恢復(fù)較困難，增加了疾病復(fù)發(fā)的可能性[13-14]。結(jié)合本研究說明，吸煙、癌癥發(fā)展程度、肺功能損傷情況與非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)術(shù)后復(fù)發(fā)密切相關(guān)。

表4 血清S-CD105、MMP9、Spry2水平預(yù)測非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的ROC特征

本研結(jié)果顯示，復(fù)發(fā)組S-CD105、MMP9表達(dá)水平明顯高于未復(fù)發(fā)組，Spry2表達(dá)水平明顯低于未復(fù)發(fā)組。既往研究顯示，內(nèi)皮糖蛋白（endoglin，CD105）可用于標(biāo)記微血管密度、拮抗轉(zhuǎn)化生長因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)揮抑制作用，S-CD105是血管生成的必需蛋白之一，癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移需要大量SCD105以促進(jìn)血管生成[15-16]，臨床已發(fā)現(xiàn)多種癌癥的發(fā)生與S-CD105高表達(dá)相關(guān)，因此，常使用SCD105作為腫瘤血管生成的指標(biāo)，檢測癌癥發(fā)展情況[17-18]。腫瘤細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移時(shí)，會(huì)促進(jìn)蛋白酶分泌，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)降解，基底膜受損，由此完成癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。MMP蛋白可以降解細(xì)胞外基質(zhì)，進(jìn)一步增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和侵襲。MMP-9是MMP家族中最重要的蛋白酶之一，在多種惡性腫瘤中可檢測到MMP-9過表達(dá)[19-20]。Spry2是一種重要的抑癌基因，在多種癌癥中發(fā)現(xiàn)，Spry2表達(dá)下調(diào)可激活與調(diào)控癌細(xì)胞增殖、遷移的信號(hào)通路有關(guān)的激酶以及正向調(diào)節(jié)炎性因子誘導(dǎo)癌細(xì)胞形成，SPRY2表達(dá)下調(diào)可以導(dǎo)致癌癥發(fā)生以及癌癥術(shù)后復(fù)發(fā)，Spry2表達(dá)情況與腫瘤患者預(yù)后存在相關(guān)性[21-22]。結(jié)合本研究說明，非小細(xì)胞肺癌患者體內(nèi)SCD105、MMP9表達(dá)水平升高，Spry2表達(dá)水降低，與其術(shù)后復(fù)發(fā)情況有關(guān)。在本研究中，S-CD105、MMP9、Spry2表達(dá)水平預(yù)測非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的AUC為0.727、0.761、0.772，說明臨床可根據(jù)S-CD105、MMP9、Spry2水平變化預(yù)測非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)情況。