EBV及HCMV活動(dòng)性感染與自然流產(chǎn)的關(guān)系探討

徐雙，李榮，馮君陽(yáng)

（南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第一附屬醫(yī)院婦科，河南 南陽(yáng) 473000）

自然流產(chǎn)(spontaneous abortion)是指妊娠期在28周及以下、由人為因素造成的自然妊娠終止，其中超過(guò)80%的自然流產(chǎn)發(fā)生在妊娠期12周之前，且多與胚胎染色體異常有關(guān)[1-2]。造成自然流產(chǎn)的原因包括夫妻雙方染色體異常、孕婦內(nèi)分泌失調(diào)、母體生殖道異?；虿≡w感染等,其中人巨細(xì)胞病毒(Human cytomegalorirus，HCMV)是孕婦及胎兒宮內(nèi)感染的常見(jiàn)病毒類型,對(duì)孕婦及孕早期胎兒的危

害較大。此外還有EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）等傳染性病毒，可進(jìn)入血液循環(huán)通過(guò)感染B淋巴細(xì)胞造成全身性感染,并長(zhǎng)期潛伏在人體淋巴組織中[3-4]。臨床研究發(fā)現(xiàn),自然流產(chǎn)孕婦體內(nèi)HCMV、EBV感染率要高于正常孕婦，但HCMV、EBV引發(fā)宮內(nèi)感染甚至自然流產(chǎn)的生物機(jī)制和尚不清楚，仍需做進(jìn)一步探究[5]?；诖?，本實(shí)驗(yàn)選取120例自然流產(chǎn)孕婦，通過(guò)分析孕婦體內(nèi)的HCMV、EBV病毒水平分析其與自然流程的關(guān)系，為臨床預(yù)防自然流產(chǎn)提供更多理論依據(jù)。報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2017年2月至2019年12月收治的120例自然流產(chǎn)孕婦作為觀察組研究對(duì)象，另選取100例同期體檢正常孕婦作為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴所有孕婦均經(jīng)本院檢查，檢查結(jié)果符合《婦產(chǎn)科學(xué)》相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；⑵所有孕婦均無(wú)生殖器結(jié)構(gòu)、染色體異常情況；⑶內(nèi)分泌科檢查指標(biāo)正常，無(wú)內(nèi)分泌相關(guān)疾病。排除標(biāo)準(zhǔn):⑴因遺傳、內(nèi)分泌等因素導(dǎo)致的自然流產(chǎn)；⑵同時(shí)合并有惡性腫瘤疾??；⑶近期內(nèi)使用過(guò)致使胚胎異常藥物。觀察組患者年齡23～36(27.24±3.23)歲，孕周10～24(16.45±3.58)周。對(duì)照組年齡22～34(26.85±3.37)歲，孕周10～25(16.76±3.62)周。兩組實(shí)驗(yàn)的年齡、孕周等一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性(P＞0.05)。本實(shí)驗(yàn)已征得本院醫(yī)學(xué)倫理會(huì)批準(zhǔn)同意，所有實(shí)驗(yàn)對(duì)象及其家屬均對(duì)本實(shí)驗(yàn)?zāi)康募跋嚓P(guān)內(nèi)容知情同意，并自愿簽署知情同意書。

1.2 方法 兩組實(shí)驗(yàn)對(duì)象在清晨空腹?fàn)顟B(tài)下抽取6 ml靜脈血，均分為三份，一份靜脈血內(nèi)加溶血試劑提取HCMV-DNA：溶血試劑破壞全血內(nèi)的紅細(xì)胞后，采用PCR-熒光法提取全血DNA，經(jīng)過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)獲取HCMV-DNA檢測(cè)值，檢測(cè)過(guò)程嚴(yán)格按照核酸檢測(cè)試劑盒（蘇州華益美生物科技有限公司，國(guó)械注準(zhǔn)20163400039）說(shuō)明書進(jìn)行。一份靜脈血采用2000 r/min離心處理15 min，取上清液待用：采用EB病毒(EBV)核酸試劑盒（武漢明德生物科技股份有限公司，國(guó)械注準(zhǔn)20183400411）檢測(cè)人外周血中NA-IgG、EA-IgM、VCA-IgM、VCAIgG。病毒感染陽(yáng)性及陰性：標(biāo)本所檢測(cè)指標(biāo)水平與臨界質(zhì)控物OD值之比超過(guò)1.2則為陽(yáng)性，低于0.8則為陰性。EA-IgM、VCA-IgM診斷陽(yáng)性表示為急性、重復(fù)性EBV感染，高親和力VCA-IgG診斷陽(yáng)性表示為近期EBV感染，NA-IgG診斷陽(yáng)性表示為既往感染；檢測(cè)cMV-IgM陽(yáng)性水平，cMV-IgM診斷陽(yáng)性表示為HCMV活動(dòng)性感染，反之，診斷陰性則表示為HCMV非活動(dòng)性感染[7-8]。一份靜脈血采用2000 r/min離心處理15 min取上清液，采用試劑盒（北京熱景生物技術(shù)有限公司，京食藥監(jiān)械準(zhǔn)字20142400877，規(guī)格40T/盒）以ELISA法檢測(cè)血清腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白介素-1(interleukin-1,IL-1)、白細(xì)胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的表達(dá)水平，的說(shuō)明書進(jìn)行，本研究所采用IL-1、IL-6、IFN的ELISA檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自美國(guó)Genzyme公司[9]。

1.3 觀察組指標(biāo) 檢測(cè)兩組實(shí)驗(yàn)對(duì)象的EBV核心抗 原（NA-IgG）、早 期 抗 原（EA-IgM）、衣 殼 抗 原(VCA-IgM)、衣殼抗體（VCA-IgG）、HCMV的DNA(HCMV-DNA)、IgM抗體(cMV-IgM)，并分析兩者腫瘤壞死因子(TNF-α)、白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)等炎性細(xì)胞因子水平差異，比較病毒感染因子與炎癥水平的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以（±s）描述，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以n(%)描述，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組實(shí)驗(yàn)對(duì)象EBV及HCMV活動(dòng)性感染水平對(duì)比 兩組實(shí)驗(yàn)對(duì)象的NA-IgG、VCA-IgG陽(yáng)性率無(wú)顯著差別，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。觀察組患 者 的EA-IgM、VCA-IgM、HCMV-DNA、cMVIgM陽(yáng)性檢出率顯著高于對(duì)照組，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組實(shí)驗(yàn)對(duì)象EBV及HCMV活動(dòng)性感染水平對(duì)比[n（%）]

2.2 兩組實(shí)驗(yàn)對(duì)象炎性細(xì)胞因子水平對(duì)比 觀察組患者的TNF-α、IL-1、IL-6水平顯著高于對(duì)照組，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表2。

表2 兩組實(shí)驗(yàn)對(duì)象炎性細(xì)胞因子水平對(duì)比（±s）

表2 兩組實(shí)驗(yàn)對(duì)象炎性細(xì)胞因子水平對(duì)比（±s）

?

2.3 EBV、HCMV活動(dòng)性感染水平與炎性因子相關(guān)性 Spearman相關(guān)分析顯示，EA-IgM、VCA-IgM、HCMV-DNA、cMV-IgM陽(yáng)性與TNF-α、IL-1、IL-6水平均呈顯著正相關(guān)（P＜0.01）。見(jiàn)表3。

表3 EBV、HCMV活動(dòng)性感染水平與炎性因子相關(guān)性

3 討論

由非人為目的造成發(fā)生的自然流產(chǎn)在所有臨床確認(rèn)的妊娠中發(fā)生率為15%左右，發(fā)生原因包括胚胎染色體異常、內(nèi)體內(nèi)分泌失調(diào)、母體生殖道病菌感染等，孕婦主要表現(xiàn)為孕后陰道出血、明顯腹痛等[10-11]。自然流產(chǎn)后孕婦病菌感染的幾率增加，更加容易出現(xiàn)大出血等不良情況，嚴(yán)重者甚至引發(fā)急性腎功衰竭等。因此，探究自然流產(chǎn)的影響因素和發(fā)生機(jī)制，并進(jìn)行針對(duì)性的預(yù)防和術(shù)后救治措施顯得尤為重要。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)分析EBV、HCMV病毒感染，進(jìn)而探究EBV、HCMV對(duì)自然流產(chǎn)的作用機(jī)制。EBV基因組為DNA，屬皰疹病毒科嗜淋巴細(xì)胞病毒，可通過(guò)唾液傳播等方式體內(nèi)外專一性地感染人類B細(xì)胞，干擾機(jī)體內(nèi)淋巴細(xì)胞免疫和體液免疫機(jī)制，同時(shí)抑制淋巴細(xì)胞因子活性[12-13]。EBV感染表現(xiàn)為增殖性感染和潛伏性感染兩種，不同感染狀態(tài)表達(dá)不同的抗體，增殖性感染期表達(dá)EA-IgM和VCAIgM抗體，潛伏感染期表達(dá)NA-IgG和VCA-IgG抗體。

本實(shí)驗(yàn)選取自然流產(chǎn)孕婦和體檢正常孕婦進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩組實(shí)驗(yàn)對(duì)象的NA-IgG、VCA-IgG陽(yáng)性率無(wú)顯著差異。究其原因，EBV是傳染性單核細(xì)胞增多癥的病原體，無(wú)癥狀感染多發(fā)生在幼兒，90%以上的幼兒都曾感染EB病毒，至成人群體大約90%以上都具有病毒抗體，主要針對(duì)VCA、EA、NA等病毒。機(jī)體感染EBV病毒后先出現(xiàn)VCA-IgM抗體，相應(yīng)病毒類型在胎盤外表達(dá)，3周左右VCA-IgM水平會(huì)達(dá)到高峰，在病毒消除后短時(shí)間內(nèi)又快速下降。觀察組和對(duì)照組出現(xiàn)NA-IgG、VCA-IgG抗體的例數(shù)較多，表示兩組孕婦大部分都是既往感染病毒者，體內(nèi)仍存留相應(yīng)抗體，在實(shí)驗(yàn)期間機(jī)體再次激活既往EBV感染抗體。此外，觀察組孕婦EA-IgM、VCA-IgM檢出陽(yáng)性率顯著高于對(duì)照組，表明自然流產(chǎn)孕婦急性病毒感染和重復(fù)病毒感染率顯著高于體檢正常孕婦，EBV在口咽部上皮細(xì)胞內(nèi)增殖并感染B淋巴細(xì)胞，提高細(xì)胞屏障通透性，使感染性細(xì)胞大量進(jìn)入血液循環(huán)導(dǎo)致孕婦全身性感染[14]。

HCMV屬B皰疹病毒科，主要以人類為感染宿主，通過(guò)感染人體白細(xì)胞、唾液腺遺留建立潛伏性感染，對(duì)胎兒、幼兒、器官移植等自身免疫功能較薄弱的造成嚴(yán)重?fù)p傷，同時(shí)還可引發(fā)人體多種疾病[15-16]。大部分HCMV感染者都無(wú)感染癥狀，但孕婦在妊娠期內(nèi)的免疫功能處于抑制狀態(tài)，HCMV可通過(guò)感染血管內(nèi)皮細(xì)胞和白細(xì)胞、輔助型T細(xì)胞2型(Th2)誘發(fā)激活病毒基因轉(zhuǎn)錄，提高潛伏HCMV病毒基因表達(dá)水平，進(jìn)而促進(jìn)分泌一系列損傷細(xì)胞組織和免疫功能的細(xì)胞因子。在本實(shí)驗(yàn)中，觀察組TNF-α、IL-1、IL-6水平顯著高于對(duì)照組，表明自然流產(chǎn)孕婦機(jī)體內(nèi)的炎癥水平顯著高于體檢正常孕婦。

TNF-α是一種能使多種腫瘤發(fā)生出血性壞死的物質(zhì)，在體內(nèi)體外均能殺死或抑制某些腫瘤細(xì)胞增殖。目前，TNF-α殺死某些腫瘤細(xì)胞的具體機(jī)制尚不清楚，但該物質(zhì)可作用于血管內(nèi)皮導(dǎo)致血管損傷或形成血栓，調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)免疫功能，加大刺激T淋巴細(xì)胞活躍度，進(jìn)而殺傷腫瘤細(xì)胞。此外，臨床研究已經(jīng)證實(shí)，TNF-β是EB病毒轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞的自分泌生長(zhǎng)因子，TNF-α、TNF-β可起到抑制EB病毒轉(zhuǎn)化淋巴細(xì)胞增殖的作用。IL-1屬趨化因子家族，是指由多種細(xì)胞產(chǎn)生同時(shí)作用于對(duì)細(xì)胞的一類細(xì)胞親自，產(chǎn)生于白細(xì)胞又作用于白細(xì)胞。IL-1是淋巴細(xì)胞刺激因子，在局部狀態(tài)下與病原體抗原協(xié)同活化CD4+T細(xì)胞，促進(jìn)機(jī)體形成抗體。IL-6是一種作用于多種細(xì)胞、可抑制病毒復(fù)制的細(xì)胞因子產(chǎn)生于單核巨噬細(xì)胞、Th2細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等，可在白細(xì)胞間與血細(xì)胞生長(zhǎng)因子相互協(xié)調(diào)、相互作用共同調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，介導(dǎo)T、B淋巴細(xì)胞的活化、增殖與分化[17-18]。為分析EBV、HCMV對(duì)TNF-α等炎性因子的影響機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)對(duì)EBV、HCMV病毒感染水平與炎性因子進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，EAIgM、VCA-IgM、HCMV-DNA、cMV-IgM診斷陽(yáng)性與TNF-α、IL-1、IL-6水平均呈顯著正相關(guān)。這表明，EBV、HCMV可能在侵入孕婦機(jī)體后，通過(guò)破壞血管表皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等使之產(chǎn)生免疫應(yīng)答，導(dǎo)致機(jī)體局部大量分泌各種炎性因子參與到病毒侵入感染過(guò)程中，最終破壞正常免疫功能。

綜上所述，TNF-α、IL-1、IL-6是孕婦機(jī)體內(nèi)EBV、HCMV病毒感染的關(guān)鍵作用因子，在抗原刺激作用下大量分泌的炎性因子在不同程度上破壞患者的免疫應(yīng)答過(guò)程，導(dǎo)致孕婦出現(xiàn)宮內(nèi)感染等癥狀，最終導(dǎo)致孕婦免疫力低下，造成自然流產(chǎn)。