miR-588表達(dá)水平與乳腺癌化療療效的關(guān)聯(lián)研究

朱曉靜，欒文強(qiáng)，董利，王聰

（濮陽市人民醫(yī)院腫瘤一科，河南 濮陽 457000）

乳腺癌是常見的女性惡性腫瘤，是威脅女性健康的重大疾病之一。化療是乳腺癌常見的治療方式，提高乳腺癌化療療效一直是臨床治療的重點(diǎn)和難點(diǎn)[1]。MicroRNA(miRNA)通過堿基與mRNA特異性結(jié)合，調(diào)節(jié)mRNA的降解以及蛋白質(zhì)的表達(dá)[2]，更重要的是對(duì)致癌基因、抑癌基因也具有一定聯(lián)系，同時(shí)miRNA的表達(dá)水平對(duì)化療藥物的敏感度也有一定影響[3-4]。microRNA-588(miR-588)是乳腺癌相關(guān)的miRNA，但是臨床中關(guān)于miR-588水平與乳腺癌化療療效的研究較少。本研究對(duì)126例乳腺癌患者的療效以及miR-588表達(dá)水平進(jìn)行比較分析，了解miR-588對(duì)化療療效的影響，以為臨床提供參考。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2019年3月至2021年1月在本院接受乳腺癌化療患者126例，根據(jù)患者的療效分為兩組，顯效組（87例）和無效組（39例）。收集兩組患者臨床就診資料，進(jìn)行回顧性分析。

1.2 納入和排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴患者為首次接受乳腺癌化療治療；⑵患者乳腺癌病理分期為Ⅰ～Ⅲ期；⑶患者或其家屬對(duì)此次研究的內(nèi)容和方法知情，并已簽署知情同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴患者合并有其他惡性腫瘤；⑵患者合并有免疫系統(tǒng)疾病；⑶患者患有嚴(yán)重凝血疾病、神經(jīng)系統(tǒng)或其他重要器官衰竭癥。

1.3 方法

1.3.1 根據(jù)所有患者的就診記錄，統(tǒng)計(jì)等級(jí)其年齡、身體質(zhì)量指數(shù)（Body mass index，BMI）、腫瘤直徑、腫瘤類型、臨床病理分期，有無吸煙、飲酒史、化療方案。

1.3.2 分組標(biāo)準(zhǔn) 所有患者化療結(jié)束后，根據(jù)實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) （Response Evaluation Criteria in Solid Tumors，RECIST）[5]對(duì)兩組患者的近期療效進(jìn)行評(píng)估。完全緩解（Complete remission,CR）：腫瘤體積肉眼完全消失持續(xù)1個(gè)月以上；部分緩解（Partial response,PR）：腫瘤大直徑*最大垂直直徑減小50%以上,且無新發(fā)病灶,持續(xù)至少1個(gè)月；腫瘤穩(wěn)定（Stable disease,SD）：病灶最大雙徑乘積增大范圍小于25%，同時(shí)減小不超過50%，,無新發(fā)病灶,持續(xù)至少1個(gè)月；腫瘤進(jìn)展（Progression disease,PD）：病灶最大雙徑乘積增大超過25%，并伴隨新病灶出現(xiàn)。CR、PR納入顯效組，SD、PD納入無效組。

1.3.3 miR-588表達(dá)檢測(cè)：取患者乳腺癌組織以及距離腫瘤邊緣5 cm的正常組織，采用RNA提取試劑盒（蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材有限公司）、反轉(zhuǎn)錄試劑盒（上海翊圣生物科技有限公司）進(jìn)行總RNA提取、逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA后，在熒光定量?jī)x中進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR （Quantitative Real-time PCR）擴(kuò)增。擴(kuò)增條件：95℃預(yù)變性3min，95℃變性12 s、62℃退火40 s，共進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，最后表達(dá)量采用2-△△Ct法進(jìn)行檢測(cè)，內(nèi)參照為U6。miR-588正向引物：CGTAGCTTCAGCTAGCCTC；反向引物：CCTTCATCACGCAGCGCA。U6正向引物：GGCATCGATCAGCTAGC；反向引物：TCGATCGGATCAGTAAGTTAGC。

1.3.4 血清指標(biāo)檢測(cè) 抽取患者外周靜脈血5.0 ml,，經(jīng)離心、抽取上層清液、冷置于后采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)其半乳糖凝集素-9（Galectin,Gal-9）、腫瘤壞死因子-α（Tumor necrosis factor,TNF-ɑ）血清濃度，分別采用卡邁舒(上海)生物科技有限公司Gal-9檢測(cè)（雙抗體夾心ABC-ELISA）試劑盒、武漢菲恩生物科技有限公司TNF-ɑ檢測(cè)（ELISA)試劑盒。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS20.0軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，行χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以（±s）表示，兩組間行獨(dú)立t檢驗(yàn)。miR-588表達(dá)水平、血清Gal-9、TNF--α水平與化療療效的相關(guān)性采用Kendall相關(guān)性分析，對(duì)乳腺癌患者化療療效的預(yù)測(cè)價(jià)值采用受試者工作特征曲線（The receiver operating characteristic curve，ROC）分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌患者化療療效情況 本研究納入的126例乳腺癌患者，經(jīng)4個(gè)化療療效后，CR患者30例、PR患者57例、SD患者29例、PD患者10例，因此無效組39共例、顯效組患者87例。其中無效組患者的乳腺癌患者癌癥組織中miR-588的相對(duì)表達(dá)水平為2.89±0.24，癌旁正常組織為5.39±0.49，顯效組患者為3.70±0.51，三者間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=312.246,P＜0.001)。

2.2 兩組患者基線資料以及相關(guān)指標(biāo)對(duì)比 無效組患者的病變組織miR-588表達(dá)水平以及血清Gal-9濃度低于顯效組（P＜0.05），TNF--α血清水平高于顯效組（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組患者基線資料以及相關(guān)指標(biāo)對(duì)比[n/（%），±s]

表1 兩組患者基線資料以及相關(guān)指標(biāo)對(duì)比[n/（%），±s]

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2.3 Kendall相關(guān)性分析 Kendall分析顯示，腫瘤組織中miR-588表達(dá)水平以及血清Gal-9均與化療療效為正相關(guān)關(guān)系（P＜0.05），TNF--α濃度為負(fù)相關(guān)關(guān)系（P＜0.05）。見表2。

表2 乳腺癌化療患者相關(guān)參數(shù)的Kendall分析

2.4 相關(guān)指標(biāo)預(yù)測(cè)乳腺癌患者化療療效的ROC分析ROC分析顯示，腫瘤組織中miR-588表達(dá)水平、Gal-9、TNF--α均具有一定的化療療效預(yù)測(cè)價(jià)值（P＜0.05），其中miR-588表達(dá)水平＞3.626、血清Gal-9濃度＞18.372 ng/L或TNF--α＜29.250 ng/L的患者，化療療效更佳。見表3、圖1。

圖1 相關(guān)指標(biāo)預(yù)測(cè)乳腺癌患者化療療效的ROC曲線

表3 相關(guān)指標(biāo)預(yù)測(cè)乳腺癌患者化療療效的ROC分析

3 討論

miRNA在細(xì)胞內(nèi)具有多種調(diào)節(jié)作用，參與分化、發(fā)育、組織生長(zhǎng)等多種生理過程。哺乳動(dòng)物70%的miRNA是位于TUs區(qū)，不僅在基因位置上保守,序列上也呈現(xiàn)出高度的同源性[6-8]。研究表明，miR-588的表達(dá)水平與癌癥組織的遷移過程有關(guān)，通過了解乳腺癌患者組織中miR-588的表達(dá)差異與化療療效的影響[9]，對(duì)于控制乳腺癌發(fā)展具有重要意義。

本研究結(jié)果顯示，乳腺癌患者癌癥組織中miR-588相對(duì)表達(dá)水平顯著低于癌旁正常組織。這可能是因?yàn)閙iR-588可靶向調(diào)控畸胎瘤細(xì)胞源性生長(zhǎng)因子—顆粒體蛋白（Granulin,GRN）轉(zhuǎn)化過程，從而抑制惡性腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。陶爽等人[10]的研究中也指出，miR-588在乳腺癌腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)水平低于癌旁正常組織，且過表達(dá)會(huì)抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。本研究結(jié)果還顯示，無效組乳腺癌患者病變組織中miR-588表達(dá)水平低于顯效組，Kendall分析顯示miR-588表達(dá)水平與化療效果具有一定相關(guān)性，說明miR-588表達(dá)不僅與乳腺癌的發(fā)生有關(guān)，同時(shí)還影響患者的化療療效。乳腺癌終末期通常伴有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，威脅患者生命，而乳腺癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化是其腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。miR-588可與靶基因酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員2(Adenosine triphosphate binding cassette superfamily G member 2,ABCG2)的3’UTR的非翻譯區(qū)結(jié)合，可介導(dǎo)其轉(zhuǎn)錄和修飾[11-12]，ABCG2是跨膜運(yùn)轉(zhuǎn)蛋白，可促使腫瘤上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，降低上皮細(xì)胞間的黏附能力，給予腫瘤細(xì)胞更大的活動(dòng)、侵襲能力[13]，因此miR-588參與腫瘤細(xì)胞的凋亡、轉(zhuǎn)移過程，與乳腺癌療效、腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。陳元元等人[14]的研究中指出，GRN為miR-588的下游通路，miR-588高表達(dá)可降低GRN水平，從而實(shí)現(xiàn)抑制乳腺癌腫瘤細(xì)胞遷移、侵襲，本研究結(jié)果與其一致。

在Yu Miao等人[15]關(guān)于miR-588的研究中指出，miR-588下調(diào)會(huì)降低乳腺癌患者在接受順鉑化療后的敏感性，其發(fā)生預(yù)后不良、淋巴轉(zhuǎn)移、雌激素受體功能損害發(fā)生率升高;且miR-588低表達(dá)患者的生存期更短。此外,He C等人[16]也表示，SNHG8在前列腺、乳腺癌、腫瘤癌等多種癌癥中充當(dāng)癌基因，可促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖和發(fā)展，而miR-588/ATG7與小核仁RNA宿主基因8對(duì)腫瘤細(xì)胞的自噬作用有密切關(guān)系。本研究結(jié)果還顯示，Gal-9也與乳腺癌化療療效具有一定相關(guān)性，這是因?yàn)镚al-9作為凝集素成員，與腫瘤、免疫信號(hào)的傳導(dǎo)有密切關(guān)系。與T細(xì)胞黏蛋白-3結(jié)合后可誘導(dǎo)免疫耐受，促使T細(xì)胞免疫系統(tǒng)的激活，細(xì)胞凋亡從而提高化療效果。TNF-α在ROC分析中的敏感度較低，同時(shí)TNF-α受多種感染性疾病等因素的影響，因此并不具有代表性。

綜上所述，miR-588在乳腺癌腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)水平高于正常組織，同時(shí)miR-588水平高表達(dá)也是乳腺癌患者化療效果顯著的保護(hù)因子。臨床中可根據(jù)患者miR-588組織表達(dá)水平以預(yù)測(cè)化療效果，可為臨床乳腺癌化療計(jì)劃的制訂提供參考。