ATP熒光檢測(cè)法在傳染病防治監(jiān)督領(lǐng)域中的運(yùn)用分析

鄭效海 邊廷敏

1.山東省淄博市臨淄區(qū)衛(wèi)生健康執(zhí)法大隊(duì),山東 淄博 255400;2.山東省淄博市臨淄區(qū)疾病預(yù)防控制中心,山東 淄博 255400

引言:衛(wèi)生監(jiān)督工作綜合性、技術(shù)性及科學(xué)性等諸多特征共存，在現(xiàn)場(chǎng)實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)表現(xiàn)出衛(wèi)生監(jiān)督執(zhí)法的高技術(shù)性，也是落實(shí)執(zhí)法任務(wù)、高效應(yīng)對(duì)緊急公共衛(wèi)生事件的重要保障。從本質(zhì)上分析，ATP熒光檢測(cè)法隸屬于快速的微生物檢測(cè)方法范疇，在上個(gè)世紀(jì)90年代ATP熒光系統(tǒng)被引入至國(guó)內(nèi)，經(jīng)20余年的發(fā)展歷程，該項(xiàng)技術(shù)在環(huán)境衛(wèi)生、食品安全監(jiān)測(cè)等諸多領(lǐng)域中均有應(yīng)用，取得的成績(jī)也是較理想的。

1 ATP檢測(cè)原理及其特點(diǎn)分析

該項(xiàng)檢測(cè)方法是采用熒光素檢測(cè)ATP的含量值，在Mg2+與熒光素酶的催化作用在，熒光素、氧氣會(huì)和ATP進(jìn)行發(fā)光反應(yīng)形成長(zhǎng)為560nm熒光，在他類反應(yīng)物投入過量的情景下，ATP含量越高，發(fā)光強(qiáng)度越大，進(jìn)而通過檢測(cè)發(fā)光強(qiáng)度值去檢出試樣內(nèi)ATP含量。

技術(shù)的主要優(yōu)勢(shì)特征有：(1)操作過程簡(jiǎn)易、快速，能實(shí)現(xiàn)在監(jiān)測(cè)場(chǎng)所的即時(shí)性檢測(cè)；(2)反應(yīng)敏捷，當(dāng)下采用的手持式熒光檢測(cè)儀的檢測(cè)界限通常是10-15mol，能夠符合大部分樣本的現(xiàn)實(shí)監(jiān)測(cè)需求，臺(tái)式檢測(cè)儀的檢測(cè)界限更高；(3)該檢測(cè)法下的反應(yīng)簡(jiǎn)單、有助于減少操作時(shí)的人為誤差，再現(xiàn)性優(yōu)良，對(duì)實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)沒有提出嚴(yán)苛的要求；(4)食用范圍較廣，能夠精確檢測(cè)出環(huán)境、食品試樣內(nèi)維生素機(jī)及他類有機(jī)物殘留情況。

但ATP檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用階段也暴露出一定不足，主要表現(xiàn)在外界客觀因素容易干擾反應(yīng)過程、無法鑒定菌種及使用費(fèi)用較昂貴等方面。

2 ATP檢測(cè)法在傳染病防治監(jiān)督實(shí)踐中的應(yīng)用

2.1醫(yī)院感染控制 一旦發(fā)生醫(yī)院感染事件，一方面會(huì)增加國(guó)家醫(yī)療衛(wèi)生資源的耗用量，另一方面也會(huì)使廣大病患承受更大的痛楚，使患者、社會(huì)乃至國(guó)家均承受著巨大的經(jīng)濟(jì)損失。大部分醫(yī)院感染患者是接觸性感染，醫(yī)務(wù)人員手、受污染的醫(yī)療器械等是主要的傳播媒介。故而，在醫(yī)院感染防控階段，加強(qiáng)醫(yī)護(hù)人員手衛(wèi)生、器械清洗和消毒質(zhì)量管理具有很大現(xiàn)實(shí)意義。

柯雅娟等[1]采用ATP技術(shù)對(duì)醫(yī)院內(nèi)外科醫(yī)護(hù)人員手的衛(wèi)生質(zhì)量作出監(jiān)測(cè)評(píng)估，并基于比較發(fā)現(xiàn)運(yùn)用ATP檢測(cè)方法后有助于提升手術(shù)室人員手衛(wèi)生的依從性。盡管清洗是當(dāng)下大部分醫(yī)療器械實(shí)現(xiàn)有效滅菌的關(guān)鍵一環(huán)，當(dāng)針對(duì)其清洗質(zhì)量的評(píng)估當(dāng)下尚未形成標(biāo)準(zhǔn)化的測(cè)評(píng)方法，ATP生物發(fā)光技術(shù)評(píng)估醫(yī)療器械清洗前后清潔度改善情況的報(bào)道并不多，但有很多醫(yī)者陸續(xù)研究了該法的應(yīng)用情況。比如，邢書霞等[2]比較了超聲波清洗器清洗前后細(xì)菌總數(shù)和標(biāo)定菌量及RLU值曲線之間形成的相關(guān)性以后，獲得了RLU值對(duì)數(shù)值，將其與實(shí)測(cè)值比較后，確認(rèn)兩者沒有形成明顯差異，表明當(dāng)細(xì)菌總數(shù)在1.0×102～1.0×102CFU區(qū)間內(nèi)時(shí)，可利用ATP法檢出RLU值取代細(xì)菌總數(shù)，大體上能呈現(xiàn)出清洗前后細(xì)菌殘留實(shí)況，邢書霞等推薦使用ATP熒光法測(cè)評(píng)器械清洗效果，若檢出RLU值≤2000，則提示器械清洗效果達(dá)標(biāo)。還有文獻(xiàn)內(nèi)記載，于兩所英國(guó)醫(yī)院內(nèi)觀測(cè)63支內(nèi)鏡使用后的清洗效果，均使用微生物學(xué)、ATP檢測(cè)，將ATP、微生物含量分別<500RLU/樣品、<103cfu/樣品時(shí)設(shè)定為合格標(biāo)志，歷經(jīng)研究后發(fā)現(xiàn)，ATP法檢出的不合格樣品要多于微生物法。

2.2疫源地消毒控制

伴隨SARS、禽流感等傳染病的流行，汶川、蘆山地震等自然地質(zhì)災(zāi)害等的發(fā)生，不同級(jí)別疾控機(jī)構(gòu)陸續(xù)建立的背景下，早期有針對(duì)性的指導(dǎo)相關(guān)單位、群體進(jìn)行消毒工作，這是早期有效防控傳染病的有效辦法之一。在控制消毒效果質(zhì)量方面，細(xì)菌采樣與培養(yǎng)法檢測(cè)是經(jīng)典法，其對(duì)專業(yè)知識(shí)與技能水平提出較高要求，耗用的時(shí)間長(zhǎng)、成本也較高。既往有人員試圖使用ATP熒光法控制疫源地消毒質(zhì)量，比較其和微生物培養(yǎng)法對(duì)模擬及疫源地現(xiàn)場(chǎng)消毒處理前后的細(xì)菌總數(shù)，發(fā)現(xiàn)ATP法能更迅速的檢測(cè)、測(cè)評(píng)疫源地物體表層消毒情況[3]。

2.3檢測(cè)水內(nèi)細(xì)菌總數(shù)

水內(nèi)細(xì)菌總數(shù)為水質(zhì)監(jiān)測(cè)實(shí)踐中的常用指標(biāo)之一，其能直接呈現(xiàn)出水質(zhì)被細(xì)菌的污染程度。國(guó)內(nèi)有人員在標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)采用既往有人員試圖使用ATP熒光法、常規(guī)平皿計(jì)數(shù)法分別檢測(cè)細(xì)菌總數(shù)，發(fā)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果有較好的線性相關(guān)性，據(jù)此認(rèn)定ATP法為一項(xiàng)能快速、便捷、準(zhǔn)確檢出菌落總數(shù)的技術(shù)類型，適用于快速檢測(cè)自來水等領(lǐng)域中。還有人員結(jié)合現(xiàn)行規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)采用ATP法監(jiān)測(cè)溫泉水內(nèi)細(xì)菌總數(shù)，檢出的溫泉浴池水污染狀況和權(quán)威衛(wèi)生部門作出的測(cè)評(píng)結(jié)果是一致的，其準(zhǔn)確度和實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌培養(yǎng)法作比較相關(guān)性范圍是92%～97%[4]。

3 構(gòu)建游離ATP有效去除體系，改進(jìn)ATP熒光法

游離ATP的含量是影響ATP技術(shù)檢測(cè)微生物含量的主要影響因素之一，當(dāng)下采用的去游離ATP前處理法及酶解ATP法都不能完全去除游離ATP。故而應(yīng)構(gòu)建游離ATP有效去除體系，比如將Mg(OH)2添加到菌液內(nèi)取誘導(dǎo)游離ATP聚沉過程，歷經(jīng)離心過程將其去除；基于正交實(shí)驗(yàn)對(duì)比多種ATP水解酶在去除游離ATP的效果，進(jìn)而獲取效能最佳的游離ATP去除劑。

雖然既往ATP法在檢測(cè)微生物方面表現(xiàn)出較高的靈敏度，但部分情景下依然無法達(dá)到衛(wèi)生學(xué)要求。為應(yīng)對(duì)如上情況，實(shí)踐中可聯(lián)合使用過濾法、前培養(yǎng)法去提高靈敏度。比如，當(dāng)試驗(yàn)樣品內(nèi)固體成分占比較高以及活菌數(shù)目偏少時(shí)，輔助使用過濾法也不利于完成 ATP測(cè)定任務(wù)，工作人員可以在較短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行前培養(yǎng)，誘導(dǎo)被檢細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖過程，最后能抵達(dá)可用APT法檢測(cè)的程度。

4 結(jié)束語

和傳統(tǒng)經(jīng)典檢測(cè)技術(shù)方法相比較，ATP熒光檢測(cè)法在操作簡(jiǎn)便性、快捷性及檢測(cè)結(jié)果精確度等諸多方面均占據(jù)優(yōu)勢(shì)，在現(xiàn)場(chǎng)衛(wèi)生監(jiān)測(cè)領(lǐng)域中表現(xiàn)出較高適用性，特別是在傳染病防治監(jiān)管中，但當(dāng)下關(guān)于該法應(yīng)用的相關(guān)研究文獻(xiàn)報(bào)道并不多。在技術(shù)應(yīng)用階段，我們應(yīng)重視微生物數(shù)目、pH、溫度及游離型APT形成的影響，并思考相關(guān)應(yīng)對(duì)措施，進(jìn)而使用ATP法檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度得到更大保障，為我國(guó)衛(wèi)生行業(yè)健康發(fā)展提供更強(qiáng)大支持。