雙重超聲造影評(píng)估胃癌細(xì)胞侵襲及血管生成的價(jià)值

龐娟娟 張永鳳 王 雪

目前，我國胃癌的發(fā)病率逐漸升高，大部分胃癌患者早期不會(huì)出現(xiàn)明顯癥狀，因此早期胃癌的診斷準(zhǔn)確率較低［1］。臨床上以灶細(xì)胞活檢和病理結(jié)果作為診斷胃癌的金標(biāo)準(zhǔn)，但胃鏡檢查具有創(chuàng)傷性，無法作為常規(guī)篩查手段。楊琴［2］發(fā)現(xiàn)雙重超聲造影可通過造影劑和超聲影像反映腫瘤部位血流灌注情況，已應(yīng)用于肝、肺、直腸癌等腫瘤疾病的診斷，但對(duì)于胃癌早期細(xì)胞侵襲和新生血管形成研究較少。基于此，本研究對(duì)40例胃癌患者行雙重超聲造影檢查，旨在探討超聲造影評(píng)估胃癌患者癌細(xì)胞增殖、侵襲功能及血管新生的臨床應(yīng)用價(jià)值。

資料與方法

一、研究對(duì)象

選取2018年8月至2019年12月我院收治的40例胃癌患者（觀察組），男22例，女18例，年齡46～77歲，平均（62.25±5.74）歲，體質(zhì)量49～81 kg，平均（60.65±6.65）kg；病理分化中低分化24例，中高分化16例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)病理確診為胃癌；②3個(gè)月內(nèi)未行胃鏡檢查，無放化療干預(yù)史；③不伴其他惡性腫瘤疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠期或哺乳期患者；②存在認(rèn)知功能障礙或無法正常溝通交流者；③合并凝血功能障礙疾病者；④對(duì)本研究方法或藥物不耐受者。另選同期行胃鏡檢查的健康成人50例（健康對(duì)照組），男27例，女23例，年齡44～79歲，平均（61.87±6.03）歲，體質(zhì)量50～82 kg，平均（61.16±6.85）kg。兩組一般資料比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者及家屬均簽署知情同意書。

二、儀器與方法

1.雙重超聲造影：使用麥迪遜Accuvix XQ彩色多普勒超聲診斷儀，探頭頻率3.5～5.0 MHz。檢查前受檢者禁食8 h，取仰臥位，常規(guī)超聲觀察其空腹?fàn)顟B(tài)下肝脾腎胃膽及盆腔等部位是否存在異?；芈暎?］；然后服用造影劑600 ml（1.5%泛影葡胺，南京正大天晴制藥有限公司），觀察食管、胃部灌注情況，于不同體位下掃查胃底部、胃中部、胃竇，明確病變部位，記錄胃部形態(tài)和病灶信息（位置、體積、回聲、形態(tài)、浸潤程度等），調(diào)整圖像直至出現(xiàn)腫瘤病灶最清晰、最大橫截面。經(jīng)肘正中靜脈注入造影劑（碘帕醇注射液，南京正大天晴制藥有限公司）2.4 ml與生理鹽水5.0 ml混合液，隨即注射生理鹽水5.0 ml沖管，啟動(dòng)計(jì)時(shí)器，觀察病灶區(qū)域動(dòng)態(tài)造影圖像并儲(chǔ)存。造影過程為5 min，觀察腫瘤病灶與正常組織的超聲造影感興趣區(qū)，分析儀器內(nèi)置時(shí)間-強(qiáng)度曲線（TIC），獲得超聲造影參數(shù)增強(qiáng)時(shí)間（ET）、峰值時(shí)間（TTP）、曲線上升支斜率（WIR）。

2.實(shí)驗(yàn)室檢查：①胃癌細(xì)胞侵襲基因mRNA表達(dá)檢測(cè)使用熒光定量法，操作流程嚴(yán)格按照KAPA Express Extract試劑盒（廣州燕嘉生物科技有限公司）說明書，檢測(cè)指標(biāo)包括真核起始因子4E（EIF4E）、CD44基因、E-鈣黏蛋白（E-cadherin）、泛素樣含PHD和環(huán)指域蛋白1（UHRF1）的mRNA侵襲表達(dá)量；②血管新生指標(biāo)檢測(cè)使用酶聯(lián)免疫吸附法，操作流程嚴(yán)格按照試劑盒（上海滬震實(shí)業(yè)有限公司）說明書，檢測(cè)指標(biāo)包括內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、促生長(zhǎng)因子（IGF-1）、α-1-微球蛋白-胰蛋白酶抑制劑前體（AMBP）、可溶性E-鈣黏蛋白（SE-CAD）等。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié) 果

一、兩組雙重超聲造影檢查情況

超聲造影顯示觀察組胃壁廣泛不規(guī)則增厚，胃腔嚴(yán)重狹窄，呈“面包圈”征，強(qiáng)化部分與鄰近正常組織界限不明顯；病灶區(qū)域局部血流速度加快，造影劑強(qiáng)化時(shí)間縮短。觀察組ET、TTP水平均低于健康對(duì)照組，WIR高于健康對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。見表1和圖1。

表1 兩組超聲造影參數(shù)比較（±s）

表1 兩組超聲造影參數(shù)比較（±s）

ET：增強(qiáng)時(shí)間；TTP：峰值時(shí)間；WIR：曲線上升支斜率

組別健康對(duì)照組觀察組t值P ET（s）15.44±1.89 9.29±1.01 18.556＜0.001 TTP（s）29.62±3.35 23.17±2.54 10.075＜0.001 WIR 5.28±0.73 7.86±0.93 14.356＜0.001

二、兩組實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)比較

觀察組EIF4E、CD44、UHRF1水平均高于健康對(duì)照組，E-cadherin水平低于健康對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。觀察組VEGF、IGF-1、AMBP、SE-CAD水平均高于健康對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。見表2。

圖1 兩組雙重超聲造影圖

表2 兩組實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)比較（±s）

表2 兩組實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)比較（±s）

EIF4E：真核起始因子4E；E-cadherin：E-鈣黏蛋白；UHRF1：泛素樣含PHD和環(huán)指域蛋白1；VEGF：內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；IGF-1：促生長(zhǎng)因子；AMBP：α-1-微球蛋白-胰蛋白酶抑制劑前體；SE-CAD：可溶性E-鈣黏蛋白

組別健康對(duì)照組（50）觀察組（40）t值P組別健康對(duì)照組（50）觀察組（40）t值P EIF4E 97.32±9.55 215.48±25.55 30.204＜0.001 VEGF（μg/L）74.92±9.04 253.87±59.07 68.404＜0.001 CD44 98.32±10.20 223.71±25.49 31.783＜0.001 IGF-1（μg/L）103.40±13.78 332.88±46.43 33.209＜0.001 E-cadherin 99.86±10.15 23.29±2.89 46.190＜0.001 AMBP（μg/ml）5.26±0.78 10.33±1.63 19.410＜0.001 UHRF1images/BZ_27_1538_476_1538_477.png103.31±11.64 243.18±29.01 31.137＜0.001 SE-CAD（μg/L）10.61±1.76 25.68±4.27 22.687＜0.001

三、相關(guān)性分析

Pearson相關(guān)分析顯示，ET、TTP與E-cadherin均呈正相關(guān)，與EIF4E、CD44、UHRF1、VEGF、IGF-1、AMBP、SE-CAD均呈負(fù)相關(guān)（均P＜0.001）；WIR與Ecadherin呈負(fù)相關(guān)，與EIF4E、CD44、UHRF1、VEGF、IGF-1、AMBP、SE-CAD均呈正相關(guān)（均P＜0.001）。見表3。

表3 超聲造影參數(shù)與胃癌細(xì)胞侵襲、血管生成指標(biāo)的相關(guān)性分析

討 論

胃癌是消化道常見惡性腫瘤之一，近年來我國發(fā)病率逐漸增高。血管新生是胃癌局部腫瘤惡性發(fā)展的重要特征，測(cè)定局部病灶組織內(nèi)的微血管密度可獲取其血管新生程度，進(jìn)而確定病灶惡性發(fā)展程度。病灶血管新生檢測(cè)方法多采用細(xì)胞組織活檢法觀察其微血管數(shù)量，過程復(fù)雜易出錯(cuò)，且會(huì)對(duì)患者造成二次傷害［4］。近年來，雙重超聲造影逐漸運(yùn)用于胃癌的診斷和血管新生評(píng)估，其可清晰顯示局部病灶內(nèi)的血流灌注情況。本研究通過分析超聲造影參數(shù)與胃癌細(xì)胞侵襲基因mRNA和胃部新生血管組織間的關(guān)系，旨在探討雙重超聲造影評(píng)估胃癌患者癌細(xì)胞侵襲和血管新生的臨床應(yīng)用價(jià)值。

正常生理狀態(tài)下的胃腔含大量氣體和黏液，胃壁無法形成清晰的反射面，導(dǎo)致超聲無法成為胃部疾病患者的常規(guī)檢查手段。雙重超聲造影通過向胃腔內(nèi)靜脈注射造影劑，消除胃腔內(nèi)胃氣和黏液，可較清晰地顯示胃壁內(nèi)各層次組織。超聲造影參數(shù)ET、TTP、WIR表示病變組織內(nèi)浸潤侵襲程度，當(dāng)局部病灶組織血管內(nèi)的血流速度越快、流量越大，造影劑強(qiáng)化時(shí)間就越短，通過比較造影劑灌注情況可分析局部腫瘤細(xì)胞侵襲程度和血管新生情況［5-6］。本研究選取40例胃癌患者作為觀察對(duì)象，與健康對(duì)照組比較，胃癌患者的超聲造影參數(shù)ET、TTP均降低，WIR升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），表明雙重超聲造影能夠反映胃癌病灶與正常組織間的差異。馬林偉等［7］發(fā)現(xiàn)，在疾病惡化進(jìn)展過程中，胃癌病灶內(nèi)出現(xiàn)大量新生血管，為病灶組織的惡性生物學(xué)行為提供營養(yǎng)支持，同時(shí)為病灶局部浸潤和細(xì)胞遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移提供物質(zhì)支持。張海峰等［8］發(fā)現(xiàn)，VEGF、IGF-1作為腫瘤病灶內(nèi)表達(dá)特異性最高的血管新生因子之一，是誘導(dǎo)增加促血管生長(zhǎng)因子釋放的關(guān)鍵因素。VEGF可通過直接刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)其大量生成血管結(jié)構(gòu)；IGF-1具有促有絲分裂作用，可刺激細(xì)胞快速增殖。此外，AMBP、SE-CAD等具有細(xì)胞侵襲功能的多種因子均具有促血管新生成作用。本研究觀察組VEGF、IGF-1、AMBP、SE-CAD均高于健康對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），表明胃癌患者局部腫瘤病灶內(nèi)的血管新生程度顯著增多，細(xì)胞侵襲程度顯著升高。

基因特殊表達(dá)也是病灶內(nèi)組織細(xì)胞病變的重要表現(xiàn)，如胃癌病灶內(nèi)的mRNA基因EIF4E、CD44、UHRF1高表達(dá)及E-cadherin低表達(dá)，均是通過調(diào)控基因異常表達(dá)加快腫瘤細(xì)胞病變轉(zhuǎn)移［9］。本研究結(jié)果顯示，觀察組EIF4E、CD44、UHRF1水平均高于健康對(duì)照組，E-cadherin水平低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），表明胃癌惡化發(fā)展與細(xì)胞侵襲基因特殊表達(dá)有關(guān)，可作為胃癌病灶惡性發(fā)展的判斷指標(biāo)。本研究相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，ET、TTP與E-cadherin均呈正相關(guān)，與EIF4E、CD44、UHRF1、VEGF、IGF-1、AMBP、SE-CAD均呈負(fù)相關(guān)（均P＜0.05）；WIR與E-cadherin呈負(fù)相關(guān)，與EIF4E、CD44、UHRF1、VEGF、IGF-1、AMBP、SE-CAD均呈正相關(guān)（均P＜0.05）。提示雙重超聲造影參數(shù)ET、TTP、WIR與胃癌細(xì)胞侵襲、血管新生存在一定相關(guān)，與劉婕和賀海玲［10］的研究結(jié)論一致。

綜上所述，超聲造影參數(shù)ET、TTP、WIR能準(zhǔn)確評(píng)估胃癌患者癌細(xì)胞侵襲和血管新生，具有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值。今后需進(jìn)一步納入不同分期胃癌患者進(jìn)行超聲造影對(duì)比分析，為臨床治療提供更加準(zhǔn)確的參考依據(jù)。