50種常用香料對(duì)銅綠微囊藻的生態(tài)毒性效應(yīng)

張薛薇,開振鵬,宋衛(wèi)國(guó),陳珊珊（1.上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所,上海 01403；.上海應(yīng)用技術(shù)大學(xué)化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院,上海 01418；3.上海市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全評(píng)價(jià)專業(yè)技術(shù)服務(wù)平臺(tái),上海 01106）

香料是一類被人們嗅覺(jué)或味覺(jué)感知的特殊香味的物質(zhì).由于具有使人身心愉悅的功能,被廣泛應(yīng)用于食品、飲料、化妝品、洗滌用品、醫(yī)藥、皮革、織物等行業(yè)的各類產(chǎn)品中.由于天然香料資源稀少、價(jià)格昂貴,以人工合成香料代替天然香料的做法較為流行.隨著物質(zhì)生活水平的不斷提高,世界香料產(chǎn)品的消耗量和產(chǎn)量逐年遞增.香料也通過(guò)生活污水、工業(yè)污水系統(tǒng)以及地表徑流排放到環(huán)境中.許多研究者們?cè)鴪?bào)道,不僅能夠在環(huán)境中,如在地表水、污泥、大氣及海洋中檢測(cè)到各種香料殘留,在生物體內(nèi),如魚類、海洋哺乳動(dòng)物,甚至人體組織和母乳中均已檢測(cè)到香料的殘留組分.Simonich等[1]在美國(guó)一些主要廢水處理廠中的污水發(fā)現(xiàn) 16種香料的殘留量為0.3～154μg/L.Fromme等[2]在柏林的多條河流和沉積物中均檢測(cè)到了佳樂(lè)麝香（HHCB）和吐納麝香（AHTN）殘留,其中在嚴(yán)重污染區(qū)域,殘留量為地表水 1.59μg/L,沉積物 0.92mg/kg d.w..除了水體和污泥,Peck等[3]在密爾沃基市南部靠近密西根湖附近收集的空氣樣本,發(fā)現(xiàn)超過(guò) 80%的樣品中含有合成麝香,其中麝香二甲苯（MX）,麝香酮（MK）為主要污染物.海洋同樣受到了合成香料的污染,Vecchiato等[4]在西西里海峽采集了42個(gè)海水樣本中的27個(gè)檢測(cè)到了合成香料,濃度總和高達(dá) 0.112 μg/L.此外,香料可以通過(guò)多種途徑進(jìn)入生物體內(nèi).不同實(shí)驗(yàn)室在鯽魚、中華鱘等魚類樣品中也檢測(cè)到了多種合成麝香[5-6],海洋哺乳動(dòng)物體內(nèi)也多次檢出 HHCB[7-8].早在 1996年,Müller等[9]報(bào)道了人體組織中合成麝香化合物的殘留.結(jié)果表明所有的樣品中均檢測(cè)到合成麝香,其中主要是MK和MX.Moon等[10]收集的43名韓國(guó)女性的脂肪組織樣品中均檢測(cè)到 HHCB,濃度范圍為 28-211ng/g.Liebl等[11]第一次在母乳中發(fā)現(xiàn)合成麝香污染,主要污染物 MX的濃度范圍為10～1220ng/g,平均含量為 100ng/g,此后 Kang 等[12]也報(bào)道了韓國(guó)婦女血清、臍帶血清以及母乳樣本的合成麝香污染情況.以上研究表明,以合成麝香為主體的香料物質(zhì)不僅污染水體、海洋、大氣環(huán)境,也通過(guò)食物鏈最終傳遞到人體組織及母乳,其污染程度已不容忽視.

盡管人們普遍認(rèn)為香料對(duì)生物體沒(méi)有明顯毒性,但是越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn),香料尤其是合成香料對(duì)多種生物的生長(zhǎng)有危害.Gooding等[13]研究了AHTN和 HHCB對(duì)淡水貽貝幼體的 LC50值在0.5～2mg/L,濃度為1mg/L的合成麝香會(huì)導(dǎo)致貽貝幼體生長(zhǎng)緩慢.Wollenberger等[14]的研究也發(fā)現(xiàn)合成麝香強(qiáng)烈抑制水蚤的幼蟲發(fā)育.合成麝香對(duì)脊椎動(dòng)物有抗雌激素效應(yīng)（對(duì)人的雌激素受體 EC50值在0.009～0.10nmol/L之間）[15].另外多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)顯示過(guò)多人工香料暴露可能增加癌癥的發(fā)生幾率[16].然而,當(dāng)前香料毒性的研究主要集中在對(duì)動(dòng)物的危害,而對(duì)植物和藻類的研究相對(duì)匱乏.

銅綠微囊藻（Microcystis aeruginosa）是一種廣泛分布的淡水藍(lán)藻,它是造成水體水華的重要藻類,是水生生態(tài)系統(tǒng)中的初級(jí)生產(chǎn)者,作為一類原核生物,銅綠微囊藻對(duì)一些污染物更為敏感.而且由于其容易獲得、個(gè)體小、繁殖快,是一種很好的測(cè)試生物[17].許多研究者發(fā)現(xiàn)雙酚 A,萘、芘、菲,生長(zhǎng)素吲哚乙酸等各種有機(jī)污染物暴露可對(duì)銅綠微囊藻生長(zhǎng)產(chǎn)生影響,表現(xiàn)為不同濃度下產(chǎn)生促進(jìn)或抑制作用[17-19].朱小琴等[20]評(píng)價(jià)了酚酸類,生物堿類,脂肪酸和酯類共13種化感物質(zhì)的抑藻效應(yīng).結(jié)果表明,生物堿類物質(zhì)對(duì)微藻生長(zhǎng)的抑制效果最強(qiáng),其抑制率＞80%.以往這些研究的目的多集中于各類化合物在湖泊富營(yíng)養(yǎng)化過(guò)程中的作用或者化感控藻,進(jìn)而完成水華控制相關(guān)的機(jī)理研究,并未以銅綠微囊藻為指示性藻類而研究水體中存在的某一大類污染物對(duì)其的生態(tài)毒性.因此,本實(shí)驗(yàn)以銅綠微囊藻為受試對(duì)象,重點(diǎn)研究 50種常用香料對(duì)其生長(zhǎng)的影響、葉綠素、蛋白質(zhì)濃度、抗氧化損傷酶活力等生理指標(biāo)的變化,豐富香料的毒性數(shù)據(jù),以期為全面評(píng)估香料的生態(tài)環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)和科學(xué)使用香料提供參考依據(jù).

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器和材料

儀器:紫外-可見光分光光度計(jì)（UV1901）,冷凍高速離心機(jī)（Centrifuge 5804R）,超聲波細(xì)胞破碎儀（JY92-IIDN）,酶標(biāo)儀（Multiskan FC）,高壓蒸汽滅菌鍋（LDZH-200KBS）,電子分析天秤（XS 105DualRange）,光照培養(yǎng)箱（SPX-300B-G）.

本實(shí)驗(yàn)所用銅綠微囊藻FACHB 905購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院武漢水生生物研究所淡水藻種庫(kù).實(shí)驗(yàn)前在BG11培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)備用.在無(wú)菌條件下,在250mL的錐形瓶中各加入10mL備用藻液和不同含量的香料,最后加入無(wú)菌培養(yǎng)基,使培養(yǎng)液總體積為100mL.將接種后的培養(yǎng)基置于無(wú)菌光照培養(yǎng)箱中,設(shè)置光照強(qiáng)度為 3200lx,溫度（28±0.5）℃,光暗比12h:12h,每日早中晚?yè)u動(dòng)錐形瓶,并隨機(jī)更換位置,防止因光照不均勻帶來(lái)影響.

50種供試香料化合物均購(gòu)于梯希愛(ài)（上海）化成工業(yè)發(fā)展有限公司,純度＞96%（詳見表 1）.分析純?cè)噭┮掖肌⒍谆鶃嗧浚―MSO）等購(gòu)自上海安譜科學(xué)儀器有限公司.根據(jù)化合物的理化性質(zhì)和溶解度,分別將各供試香料用上述溶劑溶解,配制成濃度為100mg/L的母液.超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、過(guò)氧化物酶（POD）以及丙二醛（MDA）測(cè)定所用的試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所.

1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

向?qū)嶒?yàn)組中分別加入表1中50種香料化合物,使各實(shí)驗(yàn)組每個(gè)錐形瓶中化合物濃度為 0.01,0.05,0.1,0.5,1,5,10mg/L,每組設(shè)置5個(gè)平行.同時(shí)設(shè)置不添加香料的對(duì)照組,按上述培養(yǎng)條件培養(yǎng).以9d為實(shí)驗(yàn)周期,每日測(cè)定藻密度.

表1 50種香料對(duì)銅綠微囊藻生物量增長(zhǎng)的抑制率（濃度1mg/L）Table 1 Inhibitory rate of 50kinds of fragrance materials on biomass growth of M.aeruginosa at 1mg/L

續(xù)表1

1.3 指標(biāo)測(cè)定

實(shí)驗(yàn)選取了對(duì)銅綠微囊藻的生長(zhǎng)有顯著抑制作用的4種香料2-甲氧基萘、麝香草酚、月桂烯和吲哚,分別于第3、6、9d時(shí)測(cè)定葉綠素a、蛋白含量和抗氧化酶活性.這 4種化合物的處理濃度為 1mg/L,每組設(shè)置5個(gè)平行.設(shè)置不添加香料的為空白對(duì)照組.

1.3.1 銅綠微囊藻生長(zhǎng)測(cè)定 每隔24h使用紫外-可見光分光光度計(jì),于OD680處檢測(cè)各處理組和對(duì)照組藻培養(yǎng)液的吸光度,連續(xù)檢測(cè) 9d.利用預(yù)先測(cè)定的藻細(xì)胞濃度與吸光度值的相關(guān)公式計(jì)算微囊藻細(xì)胞濃度:

式中:Y為藻細(xì)胞數(shù)量,106個(gè)細(xì)胞/mL; X為680nm處的光密度值OD.

1.3.2 葉綠素a含量測(cè)定 分別在第3、6、9d于各處理組和對(duì)照組藻培養(yǎng)液中取5mL藻液,10000r/min離心10min收集藻細(xì)胞,加入5mL 95%乙醇,置于 4℃冰箱黑暗提取 24h,將提取液離心（10000r/min,10min）,取上清液,以95%乙醇作為參比,以665、649nm 下的吸光值計(jì)算葉綠素含量.運(yùn)用以下公式計(jì)算葉綠素a的濃度[21]:

1.3.3 粗酶液提取和蛋白質(zhì)含量測(cè)定 在實(shí)驗(yàn)的第3、6、9d于各處理組和對(duì)照組藻培養(yǎng)液中取5mL藻液,10000r/min離心 10min,收集藻細(xì)胞,加入0.01mol/L的磷酸鹽緩沖液（PBS）重懸,4℃細(xì)胞破碎儀超聲 5min.細(xì)胞完全破碎后,將樣品在 4℃下10000r/min離心10min,取上清液使用酶標(biāo)儀測(cè)定樣品中蛋白質(zhì)含量.銅綠微囊藻的蛋白質(zhì)含量測(cè)定采用修正的Bradford法[22].

1.3.4 抗氧化酶活性和丙二醛含量測(cè)定 利用1.3.3中提取的粗酶液測(cè)定抗氧化酶活性.SOD的活性采用羥胺法測(cè)定;POD利用愈創(chuàng)木酚法測(cè)定;CAT的測(cè)定運(yùn)用鉬酸銨比色法;MDA采用硫代巴比妥酸TBA比色法測(cè)定.以上測(cè)定均采用試劑盒完成.

1.4 數(shù)據(jù)處理

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果均采用mean±SD的形式表示,運(yùn)用GraphPad prism 6軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析及單因素方差分析（One-way ANOVA）.

2 結(jié)果與討論

2.1 香料對(duì)銅綠微囊藻生長(zhǎng)的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在測(cè)試濃度下（0.01～10mg/L）大部分香料對(duì)銅綠微囊藻的生物量增長(zhǎng)（以細(xì)胞數(shù)計(jì)算）均沒(méi)有顯著影響.但是在高濃度下,2-甲氧基萘、麝香草酚、月桂烯和吲哚顯著抑制銅綠微囊藻的生長(zhǎng),這4種香料處理組表現(xiàn)為實(shí)驗(yàn)4d后藻細(xì)胞濃度顯著低于對(duì)照組.本實(shí)驗(yàn)以培養(yǎng)第9d的藻細(xì)胞濃度計(jì)算不同香料在不同濃度下的抑制率.表 1顯示 46種香料在1mg/L的濃度下對(duì)藻的抑制率均低于20%,而2-甲氧基萘、麝香草酚、月桂烯和吲哚的抑制率分別為58.82%、62.09%、79.58%和56.91%.實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn),在處理濃度1mg/L下橙花叔醇、肉桂醇、胡椒酮等對(duì)銅綠微囊藻的生長(zhǎng)有一定的促進(jìn)作用,但不顯著.依據(jù)不同濃度下生物量增長(zhǎng)的抑制百分率,計(jì)算出2-甲氧基萘、麝香草酚、月桂烯和吲哚對(duì)銅綠微囊藻的生物量增長(zhǎng)抑制率半效應(yīng)濃度 EyC50值分別為1.81,1.26,0.55,1.40mg/L.

為了進(jìn)一步研究香料對(duì)銅綠微囊藻的毒性,實(shí)驗(yàn)測(cè)定了有顯著抑制作用的4種香料（2-甲氧基萘、麝香草酚、月桂烯和吲哚）對(duì)銅綠微囊藻葉綠素a、蛋白質(zhì)濃度和抗氧化損傷酶活力等生理指標(biāo)的影響.

2.2 香料對(duì)銅綠微囊藻葉綠素a含量的影響

實(shí)驗(yàn)在第3、6、9d時(shí)分別測(cè)定了1mg/L的4種香料（2-甲氧基萘、麝香草酚、月桂烯和吲哚）對(duì)葉綠素a含量的影響.圖1顯示,2-甲氧基萘和麝香草酚顯著抑制銅綠微囊藻葉綠素 a的含量（P＜0.0001）;月桂烯能抑制葉綠素 a含量,但抑制能力沒(méi)有 2-甲氧基萘和麝香草酚顯著（P＜0.01）;吲哚對(duì)葉綠素a的含量無(wú)影響（P＞0.05）.2-甲氧基萘和麝香草酚對(duì)葉綠素a的抑制率隨處理時(shí)間的延長(zhǎng)沒(méi)有明顯變化,處理 3d至 9d的抑制率分別在 45%～50%和60%～70%.月桂烯處理的銅綠微囊藻3d時(shí)葉綠素a的抑制率為52.36%,然后葉綠素a的含量持續(xù)升高,在第 9d時(shí)抑制率為 11.96%.葉綠素作為光合色素,在藻類光合作用中起關(guān)鍵性作用,參與光合作用中光能的吸收、傳遞和轉(zhuǎn)化.2-甲氧基萘和麝香草酚對(duì)銅綠微囊藻光合活性的影響主要體現(xiàn)在影響胞內(nèi)光合色素的合成,從而影響了藻細(xì)胞對(duì)碳的固定和同化,導(dǎo)致光能利用效率和轉(zhuǎn)化效率下降,藻類的光合速率降低,最終對(duì)微囊藻造成生長(zhǎng)抑制,并且隨著時(shí)間的推移抑制率略有升高.

圖1 香料對(duì)銅綠微囊藻葉綠素a含量的影響Fig.1 Effects of fragrance material on chlorophyll a content of M.aeruginosa

2.3 香料對(duì)銅綠微囊藻蛋白質(zhì)含量的影響

由圖2可見,與對(duì)照組相比,1mg/L 的2-甲氧基萘和麝香草酚顯著抑制銅綠微囊藻蛋白質(zhì)含量（P＜0.0001）;并且隨著時(shí)間的推移,抑制作用沒(méi)有減弱.月桂烯和吲哚在第3d時(shí)有較強(qiáng)的抑制作用（P＜0.01）;但到了第9d,這種抑制作用就不顯著了（P＞0.05）.可見隨著暴露時(shí)間的增長(zhǎng),月桂烯和吲哚處理的銅綠微囊藻蛋白質(zhì)含量逐漸回升.這可能與生物體補(bǔ)償機(jī)制有關(guān).在香料的脅迫下,銅綠微囊藻蛋白質(zhì)合成可能受到抑制,或者香料使得合成的蛋白質(zhì)降解.實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示不同的香料影響了藻細(xì)胞蛋白質(zhì)合成和代謝不同的位點(diǎn),使得不同香料呈現(xiàn)出不同的毒理效應(yīng).這一結(jié)果與金霉素及其異構(gòu)體降解產(chǎn)物對(duì)斜生柵藻可溶性蛋白質(zhì)的影響類似[23].

2.4 香料對(duì)銅綠微囊藻抗氧化酶和丙二醛含量的影響

活細(xì)胞中自由基的濃度升高會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物衰老,癌癥的發(fā)生和免疫缺陷以及細(xì)胞膜滲漏,衰老,葉綠素被破壞等.與動(dòng)物相似,植物具有強(qiáng)大的酶防御系統(tǒng)來(lái)處理異生素.植物中的酶促防御包括能夠去除、中和氧中間體的酶,涉及超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化物酶（POD）和過(guò)氧化氫酶（CAT）等.濃度 1mg/L香料暴露下第 3d,銅綠微囊藻 SOD、POD和 CAT活性與空白對(duì)照并無(wú)顯著差異;至第6和9d時(shí),不同香料暴露呈現(xiàn)出酶活性的變化.香料對(duì)銅綠微囊藻的生物量增長(zhǎng)的抑制也呈現(xiàn)類似的現(xiàn)象,可見抗氧化酶活性的下降與銅綠微囊藻生長(zhǎng)抑制相關(guān).由圖3a至圖3c可知,2-甲氧基萘暴露導(dǎo)致SOD活性顯著降低（P＜0.0001）,其它兩種抗氧化酶則無(wú)顯著影響（P＞0.05）;麝香草酚顯著抑制了POD活性（P＜0.0001）;月桂烯也可降低 SOD 活性（P＜0.01）;經(jīng)吲哚處理的銅綠微囊藻,POD和 CAT的活性顯著低于對(duì)照組（P＜0.0001）.由于化合物結(jié)構(gòu)差異,不同的香料會(huì)影響藻細(xì)胞中不同的抗氧化酶,進(jìn)而干擾胞內(nèi)正常的生理代謝水平.該結(jié)果與金霉素及其異構(gòu)體降解產(chǎn)物對(duì)斜生柵藻抗氧化系統(tǒng)的不同影響類似[23].

MDA是一種在逆境脅迫下產(chǎn)生的脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物,其含量可指示細(xì)胞膜脂過(guò)氧化水平,并作為藻體受脅迫程度的標(biāo)志.由圖 3（d）可知,4個(gè)處理組MDA 含量均高于對(duì)照組（P＜0.05）.對(duì)照組的含量為1.68～1.85nmol/g,而處理組 MDA 含量在 2.10～2.22nmol/g之間.該結(jié)果證實(shí)了經(jīng)上述4種香料暴露的藻細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生了氧化應(yīng)激的變化.香料會(huì)破壞抗氧化酶防御系統(tǒng),使抗氧化酶的合成受到抑制,細(xì)胞內(nèi)過(guò)量的活性氧（ROS）無(wú)法及時(shí)排除,誘導(dǎo)細(xì)胞膜發(fā)生膜質(zhì)過(guò)氧化作用,引起 MDA 大量積累,最終導(dǎo)致死亡.

2.5 香料對(duì)銅綠微囊藻生長(zhǎng)影響機(jī)理初探

具有強(qiáng)烈的類似橙花香氣的 2-甲氧基萘被廣泛用于香皂、花露水和古龍香水.在本實(shí)驗(yàn)條件下,2-甲氧基萘顯著抑制了微囊藻葉綠素a和蛋白質(zhì)含量,降低了SOD酶的活性.在原核細(xì)胞和葉綠體中主要存在Fe-SOD,它們可以有效地清除超氧陰離子自由基,避免對(duì)細(xì)胞過(guò)度的損傷,維持葉綠體功能.因此,我們推斷2-甲氧基萘可能是通過(guò)抑制SOD酶活性,影響了微囊藻葉綠素 a和蛋白質(zhì)含量,進(jìn)而抑制了微囊藻的生長(zhǎng).本文研究結(jié)果與王秀翠等[19]報(bào)道的2-甲氧基萘類似物萘的暴露能顯著降低銅綠微囊藻葉綠素 a含量,最終抑制藻類生長(zhǎng)的結(jié)果一致.本實(shí)驗(yàn)中麝香草酚也可能是通過(guò)抑制POD的活性,影響了微囊藻的光合作用,導(dǎo)致藻類的死亡.沈青山等[24]研究表明高濃度的麝香草酚可以誘導(dǎo)黃曲霉孢子生產(chǎn)大量的ROS和NO達(dá)到殺菌效果,與本實(shí)驗(yàn)麝香草酚破壞藻類抗氧化酶防御系統(tǒng),產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng)的現(xiàn)象類似.從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出月桂烯也可以抑制SOD酶活性,使得藻細(xì)胞積累大量ROS,使葉綠素的濃度降低,影響藻細(xì)胞的光合作用,最終引起藻類死亡.與上述 3種香料不同,吲哚對(duì)銅綠微囊藻葉綠素 a的含量沒(méi)有顯著影響,它主要是抑制了POD和CAT酶的活性,導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)ROS的大量積累,引起藻類死亡.Lee 等[25]發(fā)現(xiàn)吲哚通過(guò)調(diào)控傳感器蛋白 SidA,影響 SidA介導(dǎo)的一系列轉(zhuǎn)錄,下調(diào)抗酸性基因表達(dá),抑制大腸桿菌生物膜形成.而內(nèi)源性氧化脅迫也會(huì)抑制大腸桿菌細(xì)胞膜的形成[26].因此,我們推斷高濃度的吲哚可以抑制藻的抗氧化酶活性,使得藻細(xì)胞積累大量ROS,影響生物膜形成,達(dá)到抑制銅綠微囊藻生長(zhǎng)的效果.不同的香料對(duì)銅綠微囊藻的作用機(jī)理存在差異,但是這 4種香料都能破壞微囊藻的抗氧化酶系統(tǒng),導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)ROS大量累積,進(jìn)而抑制藻類生長(zhǎng).不同的是,2-甲氧基萘、麝香草酚和月桂烯可能是抑制了藻類光合作用;吲哚可能是干擾了細(xì)胞膜的形成.2-甲氧基萘、麝香草酚和吲哚屬于芳香族化合物,月桂烯為烯烴類化合物,不同結(jié)構(gòu)的香料對(duì)不同的抗氧化酶活性的影響也不一樣.

當(dāng)前人們普遍認(rèn)為大部分香料對(duì)生物體沒(méi)有毒性或毒性較低,而香料對(duì)植物的影響也少有人關(guān)注.本研究表明部分香料可以通過(guò)抑制藻細(xì)胞抗氧化酶活性,破壞葉綠素含量和功能,進(jìn)而導(dǎo)致藻類生長(zhǎng)異常.環(huán)境中香料殘留的來(lái)源主要是生活和工業(yè)污水.現(xiàn)行污水處理并沒(méi)有考慮到去除其中可能的香料殘留[27].某些香料（如多環(huán)麝香等）屬于持久性有機(jī)污染物,環(huán)境中難降解,容易產(chǎn)生生物富集.研究發(fā)現(xiàn)國(guó)內(nèi)人口密度高的大中型城市河流沉積物中多環(huán)麝香污染相當(dāng)嚴(yán)重,城市污泥中（干物質(zhì)量）殘留量達(dá)到769mg/kg[27],污水中殘留量為0.005～0.55mg/L[27-28].本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在50種常用香料中有4種（2-甲氧基萘、麝香草酚、月桂烯和吲哚）對(duì)銅綠微囊藻的生長(zhǎng)有顯著的抑制作用.由于在食物鏈底端的藻類對(duì)整個(gè)生態(tài)系統(tǒng)起著至關(guān)重要的作用,因此香料對(duì)藻類的影響也應(yīng)該受到關(guān)注.

3 結(jié)論

3.1 盡管本文所研究的50種香料大部分對(duì)銅綠微囊藻的生長(zhǎng)沒(méi)有顯著影響,但是實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn) 2-甲氧基萘、麝香草酚、月桂烯和吲哚在 1mg/L暴露濃度下能顯著抑制銅綠微囊藻的生長(zhǎng),并表現(xiàn)出明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系,EyC50值分別為 1.81,1.26,0.55,1.40mg/L.

3.2 這4種香料通過(guò)抑制藻細(xì)胞抗氧化酶（SOD、POD和CAT）活性,過(guò)量累積MDA,破壞葉綠素含量和功能,進(jìn)而導(dǎo)致藻類生長(zhǎng)異常.不同結(jié)構(gòu)的香料影響不同的抗氧化酶活性.其中2-甲氧基萘、麝香草酚和吲哚均屬于芳香族化合物.作為香料中的一大類芳香族化合物,由于具有獨(dú)特的芳香氣味,被廣泛應(yīng)用.但是芳香環(huán)性質(zhì)穩(wěn)定、難降解,對(duì)環(huán)境藻類有潛在危害,因此我們需要更多關(guān)注芳香類香料的生態(tài)安全性.