負(fù)載雷公藤甲素的TPGS-b-(PCL-ran-PGA)納米制劑體外抑制宮頸癌細(xì)胞生長的研究

鄭義, 鄭靜薇, 周煜玲, 梁欣, 包君麗, 楊菊紅, 曾凡杞*

1.中國科學(xué)院大學(xué)深圳醫(yī)院醫(yī)學(xué)實驗中心, 廣東 深圳 518106;2.吉林大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院, 長春 220100

宮頸癌在全球婦女的發(fā)病率僅次于乳腺癌。據(jù)統(tǒng)計，全球每年約有57萬宮頸癌新發(fā)病例，占所有癌癥新發(fā)病例的5%，其中80%的病例來自發(fā)展中國家[1-2]。我國宮頸癌每年新增發(fā)病例數(shù)超過13萬，占世界新發(fā)病例的28.8%[3]，我國每年有2萬婦女死于宮頸癌，且其發(fā)病呈年輕化態(tài)勢[4]。目前，宮頸癌的治療主要以手術(shù)切除、放化療為主，但療效有限，易復(fù)發(fā)；新型免疫治療，如抗體靶向治療(如抗CTLA4抗體、PD-1抗體或PD-L1抗體)和過繼細(xì)胞治療(adoptive cell therapy, ACT)已在臨床上應(yīng)用，但療效不理想[5-6]。故研究新的宮頸癌治療藥物和方法仍非常必要和迫切。

雷公藤甲素(triptolide，TPL),又稱雷公藤內(nèi)酯、雷公藤內(nèi)酯醇，是傳統(tǒng)中藥雷公藤的主要活性成分之一。雷公藤甲素含有獨特的化學(xué)結(jié)構(gòu)和生物活性，不溶于水，溶于二甲基亞砜、三氯甲烷、丙酮、乙醇等有機(jī)溶劑。研究表明TPL具有抗腫瘤、抗炎、抗老年性癡呆、抗生育和免疫抑制活性等[7-8]，是廣泛用于臨床的中藥單體。但雷公藤甲素能產(chǎn)生嚴(yán)重的不良反應(yīng)，如胃腸道毒性、肝臟毒性、血液毒性、心臟毒性、泌尿系統(tǒng)毒性、男性和女性生殖系統(tǒng)功能異常、免疫系統(tǒng)毒性等，這些毒副作用呈現(xiàn)劑量依賴[7-8]。因此，為了推廣雷公藤甲素在臨床上的使用，需要對雷公藤甲素減毒增效,一般有兩種方法：①對TP的結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾,雷公藤甲素被改造成水溶性的新藥明尼甲素能更有效地抑制胰腺癌細(xì)胞生長[9];②對雷公藤甲素的劑型進(jìn)行改造，如采用納米技術(shù)，制備負(fù)載雷公藤甲素納米粒，達(dá)到減毒增效的目的[10-11]。

基于納米載體的藥物傳遞系統(tǒng)，特別是納米粒，在藥物傳遞領(lǐng)域已產(chǎn)生巨大進(jìn)步，因為載藥納米粒具有游離型藥物的比較優(yōu)勢，包括靶向能力，能加強(qiáng)在腫瘤部位藥物的累積，克服因胞內(nèi)藥物傳遞的耐受，實現(xiàn)可控和持續(xù)性釋放，以加強(qiáng)藥物的生物依從性，也能改變游離型藥物動力學(xué)和毒性。我們之前利用聚ε-己內(nèi)酯(PCL)、含有PEG鏈的聚乙二醇1000維生素E琥珀酸酯(TPGS)和聚乙醇酸 (PGA)首次成功合成了TPGS-b-(PCL-ran-PGA)生物可降解材料[12]，并以其作為載體負(fù)載紫杉醇、伊曲康唑和siRNA等小分子化合物[12-14]。

本研究以TPGS-b-(PCL-ran-PGA)為載體，制備包載雷公藤甲素的納米粒(TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL)，研究載有雷公藤甲素的納米粒的表征，包括粒徑大小、表面zeta電位、包封率、累積釋放率等，并研究TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL對宮頸癌細(xì)胞HeLa的體外抑制和凋亡的影響，以期為治療宮頸癌藥物的研究提供參考。

1 材料和方法

1.1 主要試劑

本研究中生物可降解材料TPGS-b-(PCL-ran-PGA)按照Huang等[12]的方法合成，最后的產(chǎn)品通過熱重分析、液體核磁共振波譜儀等鑒定表征，證明是成功的；聚乙烯醇(PVA)購自德國Fluka公司；二氯甲烷(分析純)購自上?；瘜W(xué)試劑有限公司；外消旋丙交酯(rac-LA)購置于山東代罡生物有限公司，HeLa細(xì)胞本實驗室保存，DMEM培養(yǎng)基和胎牛血清(FBS)購自Gibco公司。

1.2 主要儀器

超聲波勻質(zhì)儀(UH 500A，天津奧特賽斯儀器有限公司)；光學(xué)顯微鏡(Olympas BHA，日本)；低溫高速離心機(jī)(Avanti J-25，Beckman 美國)；液體核磁共振波普儀(INOVA500，美國)；紅外光譜儀(Therl TIO Nicrolet 1510，美國)；紫外可見全波長掃描儀(SpectraMax 384 Plus 美國分子儀器)；熱重分析(TGA，TGA 2050熱重分析儀，美國)；低溫冷凍真空干燥機(jī)(LABCONCO公司，美國)；粒徑及電位分析儀(zeta PALS Brookhaven Instruments CO,美國)。

1.3 納米粒的制備

1.3.1TPGS-b-(PCL-ran-PGA)共聚物的合成和表征 準(zhǔn)確稱取 7.5 g 己內(nèi)酯單體、1.5 g 外消旋丙交酯單體、1 g 維生素E TPGS 為原料，取原料質(zhì)量0.1%的催化劑辛酸亞錫催化劑加入聚合管中，進(jìn)行抽真空脫氣和氮氣置換過程，重復(fù)3次，將聚合管封口，于145℃油浴加熱下進(jìn)行開環(huán)聚合反應(yīng)。聚合反應(yīng)16 h后，產(chǎn)物經(jīng)冷卻溶于二氯甲烷中，并加入過量甲醇使共聚物沉淀。過濾除去甲醇未反應(yīng)的單體和 Vitamin E TPGS。將所得沉淀于45 ℃真空干燥48 h即得聚合產(chǎn)物TPGS-b-(PCL-ran-PGA)共聚物。利用質(zhì)譜儀、熱降解曲線和傅立葉變換紅外光譜等儀器設(shè)備對 TPGS-b-(PCL-ran-PGA)共聚物進(jìn)行表征[12]。

1.3.2TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒的制備和表征 采用修正的超聲乳化/溶劑揮發(fā)法制備成負(fù)載TPL的TPGS-b-(PCL-ran-PGA)納米粒。簡要地說，一定量的雷公藤甲素和100 mg TPGS-b-(PCL-ran-PGA)共聚物完全溶解于8 mL二氯甲烷(DCM)。將形成的溶液轉(zhuǎn)入攪拌的120 mL含0.03%(質(zhì)量體積分?jǐn)?shù))TGPS溶液中，同時采用25 W超聲120 s，形成水包油乳狀液。將乳液在減壓條件下?lián)]發(fā)過夜，去除其中的有機(jī)溶劑后，20 000 r·min-1離心15 min，清洗3遍去除空載藥物和表面活性劑。將產(chǎn)生的顆粒再懸浮在10 mL的去離子水中，冷凍干燥2 d。用相同方法制備TPGS-b-(PCL-ran-PGA) 空納米粒和TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/香豆素-6納米粒。我們對TPGS-b-(PCL-ran-PGA)與TPL之間的比例(200∶1,100∶1,150∶1,20∶1)進(jìn)行了優(yōu)化。

1.4 納米粒的鑒定

1.4.1納米粒的粒徑大小、zeta電位和形態(tài)學(xué)檢測 空TPGS-b-(PCL-ran-PGA)和TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒用去離子水(pH 7.0)分散。TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒的粒徑大小和zeta電位用動態(tài)光散射檢測儀(nanobrook omni, brookhaven instrument corp, USA)檢測。所有測試在室溫下3管平行檢測。納米粒的形態(tài)檢測用透射電子顯微鏡(TEM, JEOL JEM-1230, Japan)檢測。

1.4.2載藥量和包封率 TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒的包封率和載藥量用Agilent 1050 HPLC (agilent technologies, Palo Alto, CA, USA)分析。在25°C用1個C18柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm, agilent technologies, USA)分析。甲醇：水(58∶42，體積分?jǐn)?shù))作為TPL的流動相，流速為1 mL·min-1。檢測波長為218 nm。根據(jù)下列公式計算納米粒的包封率(encapsulation efficiency，EE)和載藥量(drug loading, DL)。EE(%)=納米粒中藥物量/加入的藥物量×100%，DL(%)=納米粒中載藥量/納米粒的量×100%。

1.4.3體外藥物釋放 從TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒TPL的累積釋放動力學(xué)在pH 7.4的磷酸鹽緩沖液(PBS)中確定。等量的TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒懸浮在PBS，用有蓋的玻璃瓶分離，在37 ℃孵育箱孵育，以120頻次·min-1晃動。在預(yù)定的時間點(0.5、1、2、4、6、8、10、12、14 d)，通過離心(14 000 r·min-1, 15 min)分離納米粒，用HPLC檢測上清3個小瓶中TPL的累積量，測量TPL的累積釋放量。

1.5 細(xì)胞培養(yǎng)

1.5.1體外細(xì)胞攝取 HeLa細(xì)胞單層培養(yǎng)在含10%胎牛血清(FBS)DMEM中，37 ℃和濕化的5% CO2培養(yǎng)箱。

用熒光顯微鏡分析HeLa細(xì)胞對納米粒的攝取。 5×104細(xì)胞·孔-1接種在12孔細(xì)胞培養(yǎng)板，孵育24 h。培養(yǎng)液中用游離的香豆素-6(coumarin 6，C6)或負(fù)載C6的納米粒(相當(dāng)于培養(yǎng)物中含有0.5 μmol·L-1C6)孵育5、30和60 min，用預(yù)溫的D-PBS洗2次，然后用胰酶消化，用預(yù)冷的D-PBS洗滌。最后，細(xì)胞重懸在500 μL冰冷的D-PBS中，放在冰上暗室中10 min。樣本用熒光顯微鏡觀察。

1.5.2MTS實驗 為了體外評估不同濃度的TPGS-b-(PCL-ran-PGA)空納米粒、TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒以及TPL的細(xì)胞毒性，以6×103HeLa細(xì)胞·孔-1接種在96孔板，細(xì)胞孵育24 h，加入不同濃度TPGS-b-(PCL-ran-PGA)空納米粒、TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒以及TPL[與TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒中TPL等量]，繼續(xù)孵育72 h，除去生長培養(yǎng)基，加入100 μL含20% MTS和1% phenazine methosulfate (PMS)的無血清培養(yǎng)基孵育1 h。在490 nm檢測吸光度。未處理細(xì)胞的細(xì)胞活性定義為100%，含有培養(yǎng)基但沒有活細(xì)胞的吸光度視為0。用Prism 軟件(san diego,CA)分析IC50值。每個實驗至少做3次。

1.5.3克隆形成實驗 克隆形成實驗用于確定TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒是否能抑制宮頸癌細(xì)胞。1×103細(xì)胞接種在6孔板中。在第3天，用不同濃度的TPL或?qū)?yīng)的含等量TPL的TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒處理細(xì)胞，繼續(xù)孵育4 d。然后，用新鮮培養(yǎng)基替換，維持7 d。細(xì)胞用冰冷的甲醇和乙酸(3∶1，體積分?jǐn)?shù))混合物固定15 min。然后，用0.5%結(jié)晶紫染色。觀察克隆形成情況并拍照。計算百分克隆形成數(shù)，百分克隆形成數(shù)=實驗組克隆數(shù)/對照組克隆數(shù)×100%，以對照組為100。

1.5.4凋亡實驗 用Annexin V-FITC凋亡檢測試劑盒做凋亡實驗，操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書(南京凱基生物科技有限公司)進(jìn)行。以5×104HeLa細(xì)胞接種在24孔板中，孵育24 h，然后用空納米粒TPGS-b-(PCL-ran-PGA)、TPL(4.5 nmol·L-1)和含TPL等量的TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒處理細(xì)胞48 h。之后用預(yù)冷的PBS洗滌2次，胰酶消化，離心后，再用預(yù)冷的PBS重懸細(xì)胞。500 μL懸液中加入Annexin V FITC 5和10 μL PI溶液，在暗室冰上孵育10 min。立即用流式細(xì)胞儀分析。測試用3個復(fù)孔。

1.6 統(tǒng)計分析

統(tǒng)計采用GraphPad Prism分析軟件(La Jolla, CA)。數(shù)據(jù)用均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。用單向或雙向ANOVA確定統(tǒng)計學(xué)意義，之后用Tukey’s檢驗，當(dāng)P<0.05時視為具有統(tǒng)計學(xué)差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 負(fù)載TPL的TPGS-b-(PCL-ran-PGA)納米粒的制備和表征

2.1.1粒徑大小、ζ電位和形態(tài)學(xué)特征 TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒球形，呈單分散(圖1)。電鏡觀察到的納米粒大小為84 nm左右(圖2)，小于用DLS檢測的結(jié)果，DLS檢測的納米粒大小為95 nm，這主要由于準(zhǔn)備TEM樣品過程中納米粒脫水收縮導(dǎo)致的。TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒的ζ電位為-12.2 mV(圖3)。

圖1 包載TPL的TPGS-b-(PCL-ran-PGA)納米粒的透描電鏡圖Fig.1 TEM images of TPL loaded-TPGS-b-(PCL-ran-PGA) nanoparticles

圖2 包載TPL的TPGS-b-(PCL-ran-PGA)納米粒的粒徑大小分布Fig.2 Size distribution of TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL nanoparticles by intensity

圖3 包載TPL的TPGS-b-(PCL-ran-PGA)納米粒的zeta電位Fig.3 Zeta potential of TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL nanoparticles

2.1.2載藥能力和包封率 載藥量(drug loading capacity, DL)和包封效率(encapsulation efficiency, EE)在藥物傳遞中起重要作用。為了獲得較高的載藥量和滿足治療需要，我們對載體TPGS-b-(PCL-ran-PGA)和TPL比例進(jìn)行了優(yōu)化，其中載體與TPL比例為50∶1，有較為滿意的DL，為(50.2±4.3) μg·mg-1，EE為72.6%±2.5%(表1)。后續(xù)的實驗均以比例為1∶50制備TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒。

2.1.3體外藥物釋放 來自TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒累積TPL釋放在pH 7.4被研究，pH 7.4相當(dāng)于正常細(xì)胞的生理pH。如圖4所示，在pH 7.4緩沖液中，從納米粒的TPL逐漸釋放，表示在納米粒中藥物的包封在血漿中可以顯著延長釋放。體外釋放實驗表明納米粒藥物累積釋放呈雙相釋放，早期(1～48 h)釋放較快，在24 h累積釋放達(dá)到56.3%，在7 d內(nèi)累積釋放達(dá)到71.5%。

2.2 體外細(xì)胞攝取

為了研究細(xì)胞對納米粒的攝取，負(fù)載C6納米粒加到培養(yǎng)了24 h的HeLa細(xì)胞培養(yǎng)物中,1 d后觀察。TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/C6被細(xì)胞有效攝取，納米粒主要分布在胞漿和核外周(圖5)，表明包封在納米粒的藥物能有效被細(xì)胞攝取，使藥物在胞內(nèi)釋放。納米粒內(nèi)化進(jìn)入細(xì)胞被視為一個結(jié)合(吸附)過程，并通過內(nèi)吞方式進(jìn)行。

圖4 TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒累積TPL釋放Fig.4 Accumulative TPL release of TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL nanoparticles

表1 TPGS-b-(PCL-ran-PGA)與TPL不同比例制備的納米粒的粒徑大小、ζ電位和包封率和載藥量的比較Table 1 Comparison of particle size, zeta potential, encapsulation efficiency and drug loading of nanoparticles composed of different ratio between TPGS-b-(PCL-ran-PGA) and TPL

2.3 TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒的細(xì)胞毒性

為了研究TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒對HeLa細(xì)胞的生長抑制，我們用MTS實驗比較游離型TPL和TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL的抑制濃度值(IC50)。結(jié)果表明游離型TPL和納米粒釋放的TPL均能以劑量依賴的方式減少Hela細(xì)胞的增殖。但是，于24、48和72 h，納米粒的IC50遠(yuǎn)低于游離型的TPL，證明同劑量TPL的納米粒較游離型對腫瘤細(xì)胞生長的抑制更顯著。因此，本研究結(jié)果表明當(dāng)TPL被納米化后具有減毒增效的作用(表2)。

表2 TPL和TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒對HeLa細(xì)胞的毒性分析Table 2 Toxicity analysis of TPL and TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL nanoparticles on HeLa cells

2.4 克隆形成的抑制作用

克隆形成實驗是基于單個細(xì)胞生長成一個克隆的體外細(xì)胞存活實驗?？寺⌒纬蓪嶒炛饕峭ㄟ^細(xì)胞生長抑制確定TPL和TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒的抗癌活性。在本研究中，未被處理的細(xì)胞產(chǎn)生大量的克隆，而TPL和TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒顯示劑量依賴的克隆形成抑制。其中TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL與等量的TPL比較，抑制能力更強(qiáng)，顯著減少了克隆形成(P<0.01)?？傊?，與等量的游離型TPL比較，納米粒中的TPL能快速內(nèi)化和持續(xù)釋放，有望顯著提高抗癌效應(yīng)(圖6)。

a,b,c—分別表示PBS、TPL和含等量TPL的TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒。**—兩者之間的差異在P<0.01水平上有統(tǒng)計學(xué)意義。圖6 克隆形成實驗Fig.6 Colony formation assay

2.5 TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒的凋亡誘導(dǎo)作用

為了研究TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒對HeLa細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用，我們通過Annexin-V結(jié)合和PI染色實驗進(jìn)行流式細(xì)胞儀分析。以5×105HeLa細(xì)胞接種到12孔細(xì)胞板中培養(yǎng)24 h后，加入空納米粒TPGS-b-(PCL-ran-PGA)、TPL和TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒，TPL的濃度為0.5 μmol·L-1，即18.0 μg·L-1，繼續(xù)孵育48 h。結(jié)果表明TPL的早期凋亡率和晚期凋亡率分別為23.1%、1.1%，總凋亡率為24.2%，而等量的TPL的TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒的凋亡率為38.0%，表明等量的TPL納米粒較TPL誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡率增加，有趣的是，空納米粒TPGS-b-(PCL-ran-PGA)也能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，可能是由于TPGS的作用。

注：a、b和c—分別表示空納米粒TPGS-b-(PCL-ran-PGA)、TPL和含等量TPL的TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒。**—兩者之間的差異在P<0.01水平上有統(tǒng)計學(xué)意義。圖7 細(xì)胞凋亡分析Fig.7 Apoptosis analysis

3 討論

雷公藤甲素(TPL)能在體內(nèi)和體外抑制癌癥細(xì)胞生長[7-8]。但因為其高度疏水性和對健康細(xì)胞的無選擇性導(dǎo)致其使用受限。因此，為了解決這些問題，本研究基于生物可降解材料TPGS-b-(PCL-ran-PGA)制備負(fù)載TPL的納米粒，體外評價其對HeLa細(xì)胞是否具有減毒增效作用。

我們用乳化/溶劑揮發(fā)法，優(yōu)化TPGS-b-(PCL-ran-PGA)與TPL之間的比例制備TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒，經(jīng)過檢測發(fā)現(xiàn)它們之間比例為50:1時得到TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒較為合適。其粒徑約為95 nm,ζ電位為-12.2mV，其大小和透射電鏡基本一致，其形態(tài)為球形，大小較為均一。電荷可以減少納米粒的聚集，維持長循環(huán)。納米粒的大小和粒徑影響納米粒進(jìn)入細(xì)胞，我們制備的TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒的大小較適合其運載，腫瘤血管的孔徑較正常組織血管的孔徑大，有助于納米粒在腫瘤部位滯留，實現(xiàn)被動靶向的目的。TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒包封率為72.6%，載藥量為50.2%，其體外累積釋放率呈雙相分布，在72 h內(nèi)其累計釋放率達(dá)到50%左右，在7 d累積釋放率達(dá)到70%左右，然后緩慢釋放，也間接證明了納米粒具有緩控釋作用。免疫熒光顯微鏡可以觀察到細(xì)胞能攝取標(biāo)記TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒。我們用MTS實驗分析TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒的細(xì)胞毒性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在24、48和72 h，與游離型TPL比較，TPLTPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒的IC50遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于游離型TPL，表明納米劑型具有更大的潛力抑制癌癥細(xì)胞生長。這可能因為納米粒被細(xì)胞快速攝取，在細(xì)胞漿內(nèi)釋放藥物[15-16]?？寺⌒纬蓪嶒灲Y(jié)果表明與等量的TPL和TPGS-b-(PCL-ran-PGA)空納米粒比較，納米粒具有緩釋特性，對腫瘤細(xì)胞持續(xù)作用，克隆形成細(xì)胞較少，此外，由于TPGS-b-(PCL-ran-PGA)成分中的TPGS具有抑制細(xì)胞的p蛋白泵，有助于抑制細(xì)胞泵出對細(xì)胞有毒的TPL，增強(qiáng)了對腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒作用。但TPL組克隆形成細(xì)胞較TPGS-b-(PCL-ran-PGA)空納米粒少，證明TPL對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用是主要的。TPGS-b-(PCL-ran-PGA)空納米粒較未處理組的克隆細(xì)胞少，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。這表明TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒對腫瘤細(xì)胞生長抑制可能是TPL和TPGS共同作用的結(jié)果。

總之，我們成功制備了適當(dāng)?shù)牧酱笮『挺齐娢坏腡PGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒，能克服游離型TPL的水溶性差和毒副作用大的缺陷。與游離型TPL比較，TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒具有更強(qiáng)的抗腫瘤活性，較高的克隆形成抑制和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的能力，主要因為TPL持續(xù)從TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒中釋放以及包載在納米粒中的藥物穩(wěn)定性提高了細(xì)胞的攝取。TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒的抗腫瘤細(xì)胞活性是TPL和TPGS共同作用的結(jié)果。TPGS-b-(PCL-ran-PGA)/TPL納米粒有望成為抗宮頸等腫瘤的潛在候選藥物。