全自動微流控免疫熒光法檢測血清低水平甲胎蛋白慢性乙肝患者甲胎蛋白異質(zhì)體比率的臨床應(yīng)用價值*

黃素欽,陳 力,林 城

福建醫(yī)科大學孟超肝膽醫(yī)院檢驗科，福建福州 350025

原發(fā)性肝癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，其病死率位居惡性腫瘤病死率的第3位，其中80%的原發(fā)性肝癌與慢性乙型肝炎(簡稱乙肝)病毒感染有關(guān)[1-2]。肝細胞癌的早期診斷和有效治療是患者獲得長期生存的關(guān)鍵。目前，甲胎蛋白(AFP)聯(lián)合影像學檢查是肝細胞癌的常規(guī)診斷方法，雖然AFP是目前運用最廣泛的肝細胞癌篩查和診斷標志物，但是30%～40%的原發(fā)性肝癌患者AFP水平并不會升高[3]。研究表明，AFP異質(zhì)體比率(AFP-L3%)在肝細胞癌的風險評估、早期診斷和預(yù)后評估等方面均有重要的臨床應(yīng)用價值[4-6]。AFP-L3%傳統(tǒng)檢測方法重復(fù)性差，檢測靈敏度低，尤其在低水平AFP標本中無法進行有效檢測，目前，應(yīng)用微流控免疫熒光技術(shù)可檢測出低水平AFP標本中AFP-L3%，可克服傳統(tǒng)檢測方法的不足[7-8]。本研究旨在采用全自動微流控免疫熒光法來檢測低水平AFP標本中AFP-L3%，從而研究其對低水平AFP肝癌患者的診斷價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年4月至2019年8月在本院住院的178例慢性乙肝患者作為研究對象，其中包括50例輕中度慢性乙肝(輕中度慢性乙肝組)、45例重度慢性乙肝(重度慢性乙肝組)、40例慢性乙肝后肝硬化(肝硬化組)、43例慢性乙肝后肝癌(肝癌組)。輕中度慢性乙肝組中，男32例，女18例；年齡(45.3±15.2)歲。重度慢性乙肝組中，男30例，女15例；平均年齡(52.1±17.2)歲。肝硬化組中，男31例，女9例，平均年齡(55.3±16.8)歲。肝癌組中，男33例，女10例；平均年齡(57.6±17.8)歲。原發(fā)性肝癌、肝硬化和慢性乙肝診斷分別符合《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范(2011年版)》[9]和《慢性乙型肝炎防治指南(2015年更新版)》[10]，肝硬化和慢性乙肝患者經(jīng)影像學檢查(CT、MRI和/或B超)排除原發(fā)性肝癌。所有研究病例血清AFP水平<20 ng/mL，且乙肝表面抗原和/或乙肝DNA陽性，排除酒精性肝病和其他甲、丙、戊型肝炎患者。所有患者均知情同意并簽署知情同意書，本研究通過醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2儀器與試劑 采用進口的日本富士膠片和光純藥株式會社μTASWako i30儀器及配套試劑檢測AFP-L3%，檢測原理是高敏感的全自動微流控免疫熒光法。采用日本富士瑞必歐株式會社的LUMlPULSE@G1200化學發(fā)光免疫分析儀及其配套試劑檢測AFP水平，檢測原理是化學發(fā)光法。

1.3方法 AFP-L3%以10.0%作為臨界值，>10.0%為陽性；AFP以10 ng/mL作為臨界值，>10 ng/mL診斷為AFP陽性。

1.4統(tǒng)計學處理 采用SPSS17.0軟件進行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析。計數(shù)資料采用頻數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗。非正態(tài)分布的計量資料采用M(P25，P75)表示，組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1各組AFP-L3%結(jié)果比較 178例患者AFP-L3%陽性數(shù)為43例，陽性率24.2%。肝癌組AFP-L3%陽性率最高，各組AFP-L3%陽性率差異有統(tǒng)計學意義(χ2=36.23,P<0.01)；重度慢性乙肝組AFP-L3%陽性率明顯高于輕中度慢性乙肝組，肝癌組明顯高于肝硬化組，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=12.41、7.02，P<0.05)，肝硬化組與重度慢性乙肝組比較，差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.09，P>0.05)。肝癌組AFP-L3%最高，各組AFP-L3%差異有統(tǒng)計學意義(F=10.35,P<0.01)。重度慢性乙肝組AFP-L3%明顯高于輕中度慢性乙肝組，肝癌組明顯高于肝硬化組(t=2.71、8.70，P<0.05)，肝硬化組與重度慢性乙肝組比較，差異無統(tǒng)計學意義(t=1.43，P>0.05)。見表1。

表1 各組AFP-L3%結(jié)果比較

2.2隨訪結(jié)果 通過隨訪10例AFP<20 ng/mL且AFP-L3%>10.0%肝硬化患者，發(fā)現(xiàn)有4例在9～15個月內(nèi)經(jīng)影像學檢查(CT，MRI和/或B超)、病理檢查及臨床癥狀相繼診斷為肝癌。

2.3術(shù)后AFP<20 ng/mL肝癌患者中有20例復(fù)發(fā)，25例未復(fù)發(fā)。術(shù)后復(fù)發(fā)組中，18例AFP水平為5～20 ng/mL，18例AFP-L3%>10%；術(shù)后未復(fù)發(fā)組中，18例AFP水平<5 ng/mL，21例AFP-L3%<10%。術(shù)后復(fù)發(fā)組的AFP水平和AFP-L3%分別為(18.3±8.7)ng/mL、(13.2±7.8)%，均明顯高于術(shù)后未復(fù)發(fā)組的(4.2±2.4)ng/mL和(5.3±3.2)%，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=19.66、24.34，P<0.01)。

3 討 論

中國每年都會有相當比例的慢性肝炎患者發(fā)展成為肝硬化，肝硬化患者進展成為肝癌，多數(shù)患者在確診時已經(jīng)處于肝癌中晚期，錯過了最佳治療時機，所以早期診斷非常重要。雖然AFP是最常用的診斷肝癌的血清學標志物之一，但是其靈敏度和特異度不高，30%～40%的肝癌患者AFP水平并不升高。近年來，AFP-L3%被認為是一種新的早期診斷肝癌的有效的腫瘤標志物[11]?！对l(fā)性肝癌診療規(guī)范(2019年版)》中也提到，AFP-L3%可作為肝癌早期診斷的標志物，特別是針對血清AFP水平<10 ng/mL的人群[12]，雖然AFP-L3%是一個比較好的鑒別肝癌的血清學標志物，但是由于AFP-L3%的傳統(tǒng)檢測方法靈敏度低，當AFP水平低時無法準確測定AFP-L3%[13]，因此限制了AFP-L3%在低水平AFP慢性乙肝患者中的診斷效能，從而造成肝癌漏診。本研究用相較傳統(tǒng)方法更敏感的檢測方法——全自動微流控免疫熒光法檢測血清低水平AFP慢性乙肝患者的AFP-L3%水平，發(fā)現(xiàn)有相當比例的患者AFP-L3%為陽性(AFP-L3%>10.0%)，并發(fā)現(xiàn)AFP-L3%和AFP-L3%陽性率最高的都是肝癌組，其次是肝硬化和重度慢性乙肝組。

有時候肝癌早期階段很難與肝硬化鑒別開來，超聲是臨床最常用的診斷手段，但美國肝病研究協(xié)會的分析報告顯示，該種方法在肝硬化患者中檢出肝癌的靈敏度僅為63%，其主要原因是由于肝癌可被粗糙回聲的肝硬化背景所掩蓋[14]。通過隨訪10例AFP<20 ng/mL且AFP-L3%>10.0%的肝硬化患者，顯示有4例在9～15個月內(nèi)經(jīng)影像學檢查(CT、MRI和/或B超)相繼診斷為肝癌，因此在預(yù)警從肝硬化進展為肝癌方面AFP-L3%檢測陽性比影像學診斷在時間上有所提前，這與文獻[15]報道的結(jié)果一致。該研究發(fā)現(xiàn)在AFP水平不升高的情況下，有34.3%的原發(fā)性肝癌患者在確診1年前即出現(xiàn)AFP-L3%升高，表明部分低水平AFP肝癌患者可通過AFP-L3%變化情況被檢出。由于研究的病例數(shù)較少，本研究將繼續(xù)跟蹤隨訪更多病例。

腫瘤標志物不僅應(yīng)該在診斷方面起關(guān)鍵作用，還應(yīng)該在術(shù)后監(jiān)測中發(fā)揮及早、準確預(yù)判是否復(fù)發(fā)的作用。肝癌術(shù)后要監(jiān)測患者是否會復(fù)發(fā)，如能提前預(yù)測復(fù)發(fā)對患者獲得最佳治療時機是很有效的。AFP是一項很重要的監(jiān)測指標，臨床常認為AFP降到較低水平提示預(yù)后良好，但是在本研究中發(fā)現(xiàn)肝癌術(shù)后AFP水平即使降到<20 ng/mL，也并不一定代表預(yù)后良好，一些患者AFP降到<20 ng/mL而AFP-L3%卻很高，甚至達到70%以上，這些患者肝癌復(fù)發(fā)率明顯高于AFP-L3%正常者。這些肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)者的AFP水平多集中在5～20 ng/mL，AFP-L3%多集中在>10%，未復(fù)發(fā)者的AFP多集中在<5 ng/mL，AFP-L3%多集中在<10%，復(fù)發(fā)者的AFP水平和AFP-L3%均明顯高于未復(fù)發(fā)者。因此，當患者AFP水平在5～20 ng/mL時應(yīng)及時檢測其AFP-L3%，如出現(xiàn)AFP-L3%升高應(yīng)高度警覺患者是否會肝癌復(fù)發(fā)，隨后應(yīng)密切隨訪檢測患者的AFP-L3%。

血清低水平AFP慢性乙肝患者中有相當比例人群出現(xiàn)AFP-L3%陽性，采用高敏感法檢測可以提高其診斷效能，避免因傳統(tǒng)檢測方法靈敏度低造成肝癌漏檢的情況。AFP-L3%不僅能對低水平AFP肝癌患者起預(yù)警及輔助診斷作用，還能對肝癌術(shù)后AFP降到低水平的患者是否復(fù)發(fā)起預(yù)測作用。