幾種常見動(dòng)物疫病的化驗(yàn)室診斷

李月華

（山東省樂陵市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，山東 樂陵 253600）

隨著動(dòng)物檢疫工作的不斷創(chuàng)新以及完善，在動(dòng)物疫病防控管理中的成效也在不斷提升，僅僅依靠傳統(tǒng)患病動(dòng)物外貌觀察的檢驗(yàn)方式，已經(jīng)難以符合當(dāng)前的動(dòng)物疫病檢驗(yàn)檢測(cè)要求，需要通過病理實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作的開展，進(jìn)一步強(qiáng)化檢疫工作的質(zhì)量，為了能夠符合各地區(qū)檢疫工作的要求，需要不斷提升檢驗(yàn)檢測(cè)速度，提高檢驗(yàn)準(zhǔn)確率，加快檢驗(yàn)報(bào)告獲取速度。

1 黃疸、黃脂肉的診斷

黃疸以及黃脂肉的診斷方式相同，可以同時(shí)進(jìn)行，明確檢測(cè)之后對(duì)脂肪樣本采集并剪碎放置試管內(nèi)，加入5mL5%的氫氧化鈉溶液進(jìn)行適當(dāng)震蕩后煮沸1min，使用流水對(duì)試管進(jìn)行冷卻，加入5mL乙醚以及膽汁色素，放入試管內(nèi)進(jìn)行進(jìn)一步的震蕩，放置在常溫環(huán)境下進(jìn)行靜置，待溶液穩(wěn)定后觀察上層的乙醚中是否有胡蘿卜素融入，如其顏色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色，則可判定存在黃脂肉疾病，氫氧化鈉顏色變?yōu)辄S色則可判定存在黃疸，如上下層顏色均變?yōu)辄S色，即可判定黃疸、黃脂肉合并存在。

2 羊丹毒的診斷

羊丹毒類型不同，在檢測(cè)時(shí)的樣本選擇方面也存在差別，敗血型羊丹毒診斷中的應(yīng)用主要采集患病動(dòng)物的心血或者肝腎組織進(jìn)行檢驗(yàn)檢測(cè)，如果被檢測(cè)患病動(dòng)物的病癥表現(xiàn)偏向于疹塊型羊丹毒病癥，需要在病變部位的周邊皮膚組織內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)樣本的采集，如果患病動(dòng)物表現(xiàn)偏向于慢性型羊丹毒病癥，在樣本選擇時(shí)需要采集其腫脹部位組織。

2.1 涂片鏡檢革蘭氏染色、吉姆薩染色法或瑞氏染色法均是羊丹毒病癥診斷中較為常用的染色方法，主要通過顯微鏡觀察病變菌種的表現(xiàn)并進(jìn)行分析，主要觀察指標(biāo)為小桿菌的分布狀態(tài)、分布數(shù)量，尤其需重視白細(xì)胞周圍菌體的檢測(cè)需要重點(diǎn)區(qū)分，以此來提升診斷質(zhì)量，強(qiáng)化診斷價(jià)值，脾腎抹片檢測(cè)菌體檢測(cè)應(yīng)用中的準(zhǔn)確性更高，更為推薦選擇。

2.2 分離培養(yǎng)的方法如果檢測(cè)所用檢測(cè)樣本為新鮮的病理材料，培養(yǎng)基接種條件要求溫度為37℃，培養(yǎng)持續(xù)1～2d便能夠觀察培養(yǎng)基上出現(xiàn)菌落生長(zhǎng)，菌落的顏色大多為透明狀，形狀與露珠較為類似，此類菌落的生長(zhǎng)長(zhǎng)勢(shì)較弱，且肉湯顏色為輕度混濁樣表現(xiàn)，有輕微的白色沉淀物，出現(xiàn)凝膠的狀態(tài)不會(huì)有明顯變化，較不容易出現(xiàn)液化癥狀。

2.3 對(duì)動(dòng)物的接種按照疹塊10倍的比例加入生理鹽水進(jìn)行組織懸液的制作，也可通過鴿子或小白鼠進(jìn)行肉湯培養(yǎng)物的制作，如為鴿子需要注射0.5～1mL組織懸液，如為小白鼠則需注射0.2mL組織懸液，之后方可取出0.5mL及0.1mL的菌液，向鴿子和小白鼠體內(nèi)繼續(xù)注射，如鴿子或小白鼠在接種后3～4h出現(xiàn)死亡則可制作涂片，將死亡鴿子或小白鼠的心血以及腎臟器官作為主要材料制作涂片以及鏡檢，觀察是否存在羊丹毒桿菌。

3 羊瘟的診斷

3.1 監(jiān)測(cè)樣品的采集以及切片的制作羊瘟診斷樣本采集大多選擇瀕臨死亡或已經(jīng)死亡的新鮮羊腎臟以及扁桃體組織，采集后的樣本需要進(jìn)行滅菌處理，常用的檢測(cè)方式主要為熒光抗體方式。在切片制作時(shí)需選擇瀕臨死亡或已經(jīng)死亡羊的新鮮腎臟組織塊以及扁桃體組織進(jìn)行冰凍切片，后放置在載玻片上，自然干燥后加入純丙酮內(nèi)進(jìn)行進(jìn)一步的處理，本環(huán)節(jié)要求時(shí)間為15min，計(jì)時(shí)結(jié)束后將其取出清洗自然干燥。

3.2 染色方法在已經(jīng)處理好的組織切片上滴入2～3滴熒光標(biāo)記處理后的羊瘟抗體，放置在37℃的環(huán)境下靜置30min，以保證熒光抗體的吸收質(zhì)量，在染色過程中要求防止染色液干涸，染色后用PBS液對(duì)組織切片進(jìn)行3次浸泡以及沖洗，每次浸泡時(shí)間為2min，取出后在室溫下放至半干進(jìn)行鏡檢。

3.3 結(jié)果判定對(duì)羊瘟檢測(cè)的結(jié)果判定需要使用熒光顯微鏡進(jìn)行切片的觀察，如果切片存在上皮細(xì)胞胞漿，顏色為翠綠色，能夠明顯觀察到熒光狀態(tài)表現(xiàn)，組織細(xì)胞形態(tài)清晰為陽性，反之則為陰性。

4 結(jié)語

動(dòng)物疫病的出現(xiàn)對(duì)養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)濟(jì)效益產(chǎn)生的影響是不容忽視的，甚至?xí){到動(dòng)物肉、蛋、奶產(chǎn)品的品質(zhì)，影響到消費(fèi)者的食品安全水平，既不利于人們的日常飲食質(zhì)量保證，也會(huì)影響到社會(huì)環(huán)境的穩(wěn)定性。因此，需要加強(qiáng)對(duì)動(dòng)物疫病化驗(yàn)室診斷工作的重視，根據(jù)各類動(dòng)物疫病類型細(xì)化診斷方案，提升診斷質(zhì)量，保障動(dòng)物疫病控制以及畜牧養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。