牛羊布病的診斷方法

古麗娜爾·木斯塔法

（新疆阿勒泰地區(qū)哈巴河縣加依勒瑪鄉(xiāng)農(nóng)業(yè)（畜牧業(yè)）發(fā)展服務(wù)中心，新疆 哈巴河 836701）

牛羊布病是由布氏桿菌引起的人畜共患病，該病被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織列為B類傳染病，是我國規(guī)定的二類動(dòng)物疫病，也是國際貿(mào)易必須檢疫的疾病之一。布氏桿菌可以分為6個(gè)種19個(gè)生物型，其中牛種布氏桿菌有8個(gè)生物型。牛種布氏桿菌和羊種布氏桿菌是新疆地區(qū)較為常見的布氏桿菌，對(duì)人來講，羊種布氏桿菌的毒力比牛種強(qiáng)。目前，對(duì)布氏桿菌病診斷的方法包括病原學(xué)診斷、血清學(xué)診斷以及分子生物學(xué)診斷三大類。

1 病原學(xué)診斷

無菌條件下采集胎盤小葉、陰道分泌物以及胎兒胃內(nèi)容物，對(duì)其進(jìn)行改良抗酸染色或KOSTERS染色，當(dāng)出現(xiàn)洗白內(nèi)的發(fā)顆粒和弱抗酸的布氏桿菌形態(tài)時(shí)，可以認(rèn)為是布氏桿菌感染。此外，還可以在分娩、流產(chǎn)或尸體解剖的過程中分離陰道粘液、胎盤、乳汁、乳房、睪丸、咽后淋巴結(jié)等病料，經(jīng)過分離培養(yǎng)后，可以通過其培養(yǎng)特性、形態(tài)學(xué)以及革蘭氏染色結(jié)果來判斷是否為布魯氏菌菌落。

2 血清學(xué)診斷

2.1 虎紅平板凝集試驗(yàn) 在玻璃板上分隔出數(shù)個(gè)4cm×4cm的方格，在方格中標(biāo)記待檢測的血清編號(hào)，每個(gè)方格內(nèi)滴入30μL待檢血清，再在待檢血清旁邊滴加30μL布氏桿菌抗原，將血清和抗原充分?jǐn)嚢?、混合，如果血清和抗原混合后產(chǎn)生紅色的片絮狀、顆粒狀凝集，則認(rèn)為是陽性血清；如果血清和抗原混合后為均勻的粉紅色，則認(rèn)為是陰性血清。通常判定時(shí)間不超過4min。

2.2 試管凝集試驗(yàn) 用0.5%石碳酸生理鹽水將抗原原液進(jìn)行1:10的稀釋，稀釋后的抗原加入1:12.5、1:25、1：50以及1:100的待測血清管內(nèi)混勻后，在37℃恒溫箱中放置20h，室溫下平衡2h，進(jìn)行渾濁度判定。

2.3 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn) 患有慢性布氏桿菌病的病牛在進(jìn)行平板凝集試驗(yàn)或試管凝集試驗(yàn)時(shí)，可能其凝集結(jié)果為陰性或可疑，但進(jìn)行補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)時(shí)結(jié)果為陽性。

2.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 這種方法的靈敏度和特異性都很好，結(jié)果也比較穩(wěn)定，其特異性比虎紅平板凝集試驗(yàn)或補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)稍高，在檢測時(shí)先對(duì)測試板進(jìn)行抗原包被，而后加入待檢血清，在37℃條件下反應(yīng)一段時(shí)間再先后加入酶標(biāo)二抗、底物和終止液，最后用酶標(biāo)儀進(jìn)行讀數(shù)，判定最終結(jié)果。

2.5 乳環(huán)試驗(yàn) 對(duì)產(chǎn)奶動(dòng)物來說，乳汁的獲取比較容易，但乳環(huán)試驗(yàn)僅適用于牛，將蘇木精染色抗原與牛奶進(jìn)行混合，如果牛奶中有抗體則會(huì)和抗原進(jìn)行結(jié)合，最終在牛奶表面形成藍(lán)色環(huán)狀結(jié)構(gòu)，但這一方法檢測時(shí)容易出現(xiàn)非特異性反應(yīng)，需要進(jìn)行區(qū)分。

3 分子生物學(xué)試驗(yàn)

布氏桿菌可以通過測定DNA（G+C）mol%的值以及染色體的大小來進(jìn)行判定，但這種方法只能確定布氏桿菌的菌屬，并不能區(qū)分19個(gè)生物型之間的差別，而且方法比較繁瑣，在普通實(shí)驗(yàn)室基本沒有應(yīng)用場景，但這一方法給學(xué)者帶來思考。目前，PCR技術(shù)及其衍生技術(shù)，如核酸雜交、熒光標(biāo)記等技術(shù)也都陸續(xù)應(yīng)用于布氏桿菌病的診斷中，PCR技術(shù)檢測布氏桿菌具有檢測快速、特異性高、比較靈敏等諸多優(yōu)勢(shì)，最低可以檢測1pg的DNA，這是其他手段無法實(shí)現(xiàn)的。此外，分子生物學(xué)檢測方法可以彌補(bǔ)病原學(xué)診斷和血清學(xué)診斷中不能對(duì)布氏桿菌完全鑒定區(qū)分的不足，相信通過從業(yè)人員的不懈努力，分子生物學(xué)技術(shù)將為布氏桿菌流行病學(xué)追蹤溯源提供可靠的技術(shù)保障。

4 討論

對(duì)牛羊布病的防控來講，應(yīng)當(dāng)本著“防大于治”的原則進(jìn)行綜合的防控，目前布氏桿菌疫苗的種類較多，如弱毒活疫苗、滅活疫苗、新型疫苗等等，常用于牛布病預(yù)防的疫苗為牛型19號(hào)(S19、A19)疫苗，用于羊布病預(yù)防可以使用豬型2號(hào)菌苗或羊型5號(hào)菌苗。此外，還要定期的對(duì)牛羊進(jìn)行檢疫，尤其是種畜，應(yīng)當(dāng)每年進(jìn)行一次檢疫，在疫區(qū)、疫點(diǎn)要視情況增加檢疫次數(shù)。只有免疫接種配合定期檢疫，逐漸篩選出健康牛，將陽性牛和隱性感染牛逐步淘汰，才能夠達(dá)到凈化疫場的目的，才能夠切實(shí)的控制布氏桿菌病的發(fā)生與傳播，減少該病帶來的威脅。