布魯氏菌病實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)探討

姜 萍，張雪梅，焦明

（濟(jì)南市動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，山東 濟(jì)南 250109）

布魯氏菌病，簡稱布病，是由布魯氏菌引起的一種人畜共患傳染病，在世界范圍內(nèi)流行，多種動(dòng)物和人易感染，臨床上表現(xiàn)為不孕、懷孕母畜流產(chǎn)，公畜睪丸炎、附睪炎及關(guān)節(jié)炎，在我國屬于二類動(dòng)物疫病。布魯氏菌病感染傳播的速度快、范圍廣，一旦不能及時(shí)發(fā)現(xiàn)確診，造成防控不及時(shí)就會(huì)給養(yǎng)殖戶和人畜健康造成嚴(yán)重威脅，因此，準(zhǔn)確掌握布魯氏菌病的診斷方法對畜牧業(yè)養(yǎng)殖具有重要意義，布魯氏菌病的診斷方法有很多，下面就實(shí)驗(yàn)室常用的診斷方法進(jìn)行探討。

1 虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）

RBPT是一種傳統(tǒng)的布魯氏菌病檢測方法，該方法操作簡便，成本低，靈敏度高，但由于RBPT是以布魯氏菌細(xì)胞壁脂多糖上的O鏈抗原作為診斷位點(diǎn)，而多種細(xì)菌(如大腸桿菌0157、沙門氏菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌09等)在O鏈抗原結(jié)構(gòu)上和布魯氏菌高度類似，因此容易發(fā)生交叉凝集反應(yīng)，導(dǎo)致假陽性結(jié)果的出現(xiàn)，故該方法一般作為初選試驗(yàn)，用于高危群體篩查和流行病學(xué)研究。

2 試管凝集試驗(yàn)（SAT）

SAT原理是血清中IgG抗體和IgM抗體與布魯氏菌抗原的凝集反應(yīng)，與虎紅平板凝集試驗(yàn)相比，靈敏度和特異性高，可以半定量測出抗體水平。該方法常量法需要在試管中進(jìn)行倍比稀釋，操作步驟繁瑣，樣品較多時(shí)工作量大，且反應(yīng)時(shí)間長，時(shí)效性低，不適合現(xiàn)場疫情的快速診斷。隨著實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備的不斷發(fā)展與更新，近年來研究者將SAT試驗(yàn)改進(jìn)為微量法(MSAT)，李翠[]等通過試驗(yàn)證明微量法與傳統(tǒng)的試管凝集試驗(yàn)相比具有許多優(yōu)點(diǎn)，用移液器和96孔板代替吸管和試管，操作更為簡便、精確，節(jié)省樣品和試劑，且實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判定減少了人為誤差，結(jié)果更為可靠。

3 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）

補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)原理是布魯氏菌相關(guān)抗原與不完全抗體和非凝集抗體的結(jié)合反應(yīng)，該方法的常量法是血清學(xué)檢測的經(jīng)典方法，具有較高的特異性和靈敏度，適用于慢性布魯氏菌病和復(fù)發(fā)病例的診斷，對牛、羊、綿羊附睪炎的臨床診斷具有較高的應(yīng)用價(jià)值。但該方法需要的溶血素制備困難，藥品用量大，操作步驟繁瑣，不適合大批量樣品的檢測。微量法用96孔板代替試管，可同時(shí)稀釋多個(gè)樣品，既節(jié)省試劑，又提高效率。

4 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)

ELISA是一種準(zhǔn)確性和特異性較高的檢測方法，1976年Cavleson把這項(xiàng)技術(shù)運(yùn)用到檢測牛布病抗體中，2004年ELISA法被定為國際貿(mào)易中牛種和豬種布魯氏菌檢測的指定試驗(yàn)。ELISA分為間接法（i-ELISA）和競爭法（c-ELISA），兩種方法各有優(yōu)勢，其中間接法敏感性高，競爭法特異性好。該方法適用于布魯氏菌病的篩選和確定試驗(yàn)，效果優(yōu)于傳統(tǒng)凝集試驗(yàn)，ELISA試劑盒的準(zhǔn)確性和特異性也是近幾年研究和研發(fā)的熱點(diǎn)。

5 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）

PCR是一種比較先進(jìn)的診斷方法，高效的基因診斷技術(shù)已成為當(dāng)前布魯氏菌病分子生物學(xué)檢測和病原學(xué)分型的重要手段。該方法優(yōu)點(diǎn)是快速、靈敏、準(zhǔn)確，并且可以事先對樣品進(jìn)行滅活處理,從而降低布魯氏菌感染和擴(kuò)散的風(fēng)險(xiǎn)。但PCR對試驗(yàn)環(huán)境和儀器設(shè)備要求較高，試劑盒價(jià)格貴，試驗(yàn)成本高，不適于在基層推廣以及現(xiàn)場快速檢測。

6 小結(jié)

目前實(shí)驗(yàn)室常用的檢測方法各有利弊，在實(shí)際應(yīng)用中需要根據(jù)實(shí)際情況和需求采用最合適的診斷方案，也可兩種以上方法結(jié)合使用，從而做出準(zhǔn)確的判斷。隨著技術(shù)的發(fā)展進(jìn)步，布魯氏菌病診斷方法的特異性、靈敏性都在不斷提高，但開發(fā)更為快速、簡便、準(zhǔn)確的檢測方法仍然是學(xué)者們不斷探索的課題。