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    除草劑乙草胺對(duì)棉花根尖細(xì)胞有絲分裂的影響

    2021-03-29 10:04:38
    新疆農(nóng)墾科技 2021年1期
    關(guān)鍵詞:乙草胺畸變乳油

    (新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院,新疆烏魯木齊 830000)

    棉花是我國(guó)重要的戰(zhàn)略物資,也是我國(guó)重要的農(nóng)作物之一,新疆由于其獨(dú)特的地理優(yōu)勢(shì)及光熱資源,是全國(guó)最大的商品棉生產(chǎn)基地[1]。棉花的主副產(chǎn)品都有較高的利用價(jià)值,不僅可用于油料,也可以用作紡織品的原料,在世界經(jīng)濟(jì)和社會(huì)的迅速發(fā)展方面起著重要的作用。但棉田雜草常年與棉花爭(zhēng)奪水分、養(yǎng)分和空間,嚴(yán)重影響棉花的生長(zhǎng)、分枝和結(jié)桃,造成棉花產(chǎn)量損失14%~16%,危害嚴(yán)重時(shí),可造成棉花減產(chǎn)高達(dá)60%[2],嚴(yán)重制約了棉花的優(yōu)質(zhì)、高效生產(chǎn)[3]。

    除草劑乙草胺具有低毒、高效、安全、持效期長(zhǎng)、殘留量小等眾多特點(diǎn)[4],對(duì)禾本科雜草的防除效果優(yōu)于闊葉雜草。在土壤中持效性為45 d左右[5],在玉米播種后出苗前用50%乙草胺乳油108 mL/667 m2,藥后28 d,對(duì)雜草的株防效可達(dá)89.7%,對(duì)玉米安全且增產(chǎn)[6],90%乙草胺乳油施用量為3 L/hm2,可有效防除甘薯田禾本科的雜草和部分闊葉雜草,最高防效可達(dá)90%以上,增產(chǎn)25.3%[7];麥類(lèi)和谷類(lèi)作物對(duì)乙草胺敏感,不宜施用。乙草胺直接在作物上噴施會(huì)嚴(yán)重抑制其出苗,不可直接在作物上噴施,在過(guò)道或行間噴施也可能對(duì)苗期作物產(chǎn)生逆境脅迫,當(dāng)植物處于逆境時(shí),體內(nèi)活性氧和自由基的濃度急劇升高導(dǎo)致植物細(xì)胞不能正常代謝,進(jìn)而對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生傷害,影響其正常生長(zhǎng)發(fā)育,除草劑對(duì)作物來(lái)說(shuō)是一種逆境脅迫,為適應(yīng)這種脅迫,植株體內(nèi)的保護(hù)酶系統(tǒng)會(huì)發(fā)生一系列的變化[8]。

    目前在試驗(yàn)室條件下關(guān)于除草劑乙草胺對(duì)棉花根尖細(xì)胞有絲分裂影響的研究較少。本研究參考農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上乙草胺的使用濃度與時(shí)間,設(shè)置乙草胺處理棉花根尖的使用濃度分別為0.1 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L、1.5 mg/L 和2.0 mg/L,處理時(shí)間分別為12 h、24 h、48 h 和72 h,探討乙草胺對(duì)棉花根尖細(xì)胞有絲分裂指數(shù)和染色體形態(tài)的影響,為棉田安全有效地使用乙草胺提供細(xì)胞遺傳學(xué)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 供試材料

    供試棉花種子為新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院提供的新陸早50號(hào)。

    供試試劑:60%乙草胺乳油、卡諾氏固定液、改良石炭酸品紅、70%乙醇、蒸餾水、1 mol/L HCL。

    供試儀器:顯微鏡、電子天平、水浴鍋、恒溫箱、蓋玻片、載玻片、鑷子、叉子、刀片、離心管、吸量管、量筒、燒杯、一次性手套等。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 根尖培養(yǎng)與處理

    將飽滿(mǎn)的棉花種子在室溫下用蒸餾水浸泡24 h,待種子吸脹萌發(fā),放入滴有蒸餾水的濕潤(rùn)濾紙上常溫培養(yǎng),待棉花根尖長(zhǎng)0.2 cm 時(shí)用不同濃度(0.1 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L、1.5 mg/L、2.0 mg/L)的乙草胺分別處理12 h、24 h、48 h 和72 h,以蒸餾水處理為對(duì)照。

    1.2.2 固定解離壓片

    將處理完成的棉花根尖用蒸餾水清洗干凈,用卡諾氏固定液固定24 h,清洗根尖上的卡諾氏固定液,清洗的根尖放入裝有1 mol/L HCL 的小燒杯中,在60 ℃水浴條件下解離5 min,用改良苯酚品紅染色液染色3~4 min,常規(guī)壓片。

    1.2.3 鏡檢計(jì)數(shù)

    試驗(yàn)設(shè)5 次重復(fù),對(duì)每一個(gè)試驗(yàn)組觀察6~8個(gè)不同濃度與不同時(shí)間處理不同植株的棉花根尖,每個(gè)制片統(tǒng)計(jì)約250個(gè)細(xì)胞。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同濃度的乙草胺對(duì)棉花根尖細(xì)胞有絲分裂指數(shù)的影響

    通過(guò)研究發(fā)現(xiàn),乙草胺抑制棉花根尖細(xì)胞有絲分裂周期,影響細(xì)胞有絲分裂指數(shù)。由表1可知,乙草胺最低處理濃度為0.1 mg/L時(shí),處理時(shí)間12 h 和24 h 的有絲分裂指數(shù)分別為8.46%和8.18%,均低于對(duì)照,且差異不顯著。這說(shuō)明低濃度的乙草胺對(duì)棉花根尖細(xì)胞有絲分裂的抑制作用不明顯。當(dāng)乙草胺濃度為0.1 mg/L時(shí),處理48 h和72 h的有絲分裂指數(shù)分別為7.69%和6.58%,與對(duì)照之間存在極顯著差異(p <0.01)。當(dāng)乙草胺濃度為1.0 mg/L 時(shí),與對(duì)照之間存在極顯著差異(p <0.01),說(shuō)明高濃度的乙草胺干擾細(xì)胞代謝過(guò)程,影響細(xì)胞有絲分裂數(shù),降低細(xì)胞有絲分裂指數(shù)。

    由試驗(yàn)結(jié)果可知,當(dāng)處理時(shí)間固定不變時(shí),乙草胺對(duì)棉花根尖細(xì)胞有絲分裂的抑制作用隨著濃度的提高而增加。隨著乙草胺毒性作用時(shí)間的延長(zhǎng),棉花根尖細(xì)胞有絲分裂指數(shù)逐漸降低,乙草胺處理時(shí)間越長(zhǎng),棉花根尖細(xì)胞有絲分裂指數(shù)越低。說(shuō)明一定濃度的乙草胺對(duì)棉花根尖細(xì)胞的有絲分裂的抑制作用表現(xiàn)出乙草胺毒性的積累效應(yīng)。

    2.2 除草劑乙草胺對(duì)棉花根尖細(xì)胞染色體形態(tài)的影響

    表1 乙草胺不同處理濃度與處理時(shí)間對(duì)棉花根尖細(xì)胞分裂指數(shù)與染色體形態(tài)的影響

    用不同濃度的乙草胺對(duì)棉花根尖細(xì)胞進(jìn)行處理,對(duì)根尖分裂細(xì)胞的染色體形態(tài)進(jìn)行了仔細(xì)觀察。用乙草胺處理棉花根尖細(xì)胞出現(xiàn)染色體畸變現(xiàn)象,畸變現(xiàn)象主要有染色體斷片、染色體不均等分裂、染色體環(huán)、染色體黏連、染色體滯后等(圖1)。

    由表1可知,當(dāng)乙草胺處理濃度為0.1 mg/L,處理12 h,沒(méi)有觀察到染色體畸變類(lèi)型;當(dāng)乙草胺濃度達(dá)到1.0 mg/L,處理時(shí)間12 h,染色體畸變率為1.38%,與對(duì)照之間存在顯著差異(p <0.05)。處理24 h,乙草胺處理濃度為0.5 mg/L 時(shí),染色體畸變率與對(duì)照相比差異顯著(p <0.05),乙草胺處理濃度為1.0 mg/L時(shí),染色體總畸變率達(dá)到2.54%。且與對(duì)照之間的差異極顯著(p <0.01)。處理48 h,乙草胺處理濃度0.5 mg/L時(shí),染色體畸變率與對(duì)照相比有顯著差異(p <0.05)。

    結(jié)果表明,經(jīng)過(guò)不同濃度的乙草胺乳油處理后,棉花根尖分生組織的細(xì)胞在不同濃度、不同處理時(shí)間下,正常的有絲分裂受到了影響,隨著乙草胺乳油處理時(shí)間的進(jìn)一步延長(zhǎng)和濃度的增加,出現(xiàn)不同程度的染色體畸變現(xiàn)象。如出現(xiàn)了微核、染色體斷片、染色體黏連、染色體不均等分離、染色體橋等多種染色體畸變的類(lèi)型。其中,染色體不均等分離其產(chǎn)生的原因主要是乙草胺干擾了紡錘體微細(xì)胞微管的正常形成,使得染色體不能正常移動(dòng)兩極,從而導(dǎo)致染色體的兩極不等分離。

    3 討論

    有絲分裂是高等植物生長(zhǎng)發(fā)育中細(xì)胞增殖的主要方法,高等植物發(fā)生有絲分裂的部位是植物的根尖、莖葉的生長(zhǎng)點(diǎn)及幼葉等生長(zhǎng)部位的分生組織[10]。有絲分裂指數(shù)是體細(xì)胞分裂的頻率和根尖生長(zhǎng)速率的一個(gè)重要參數(shù)[11]。棉花根尖吸收乙草胺后根尖細(xì)胞染色體發(fā)生染色體畸變和細(xì)胞異常分裂,從而引起細(xì)胞分裂指數(shù)下降,抑制根尖生長(zhǎng)。由于微核與棉花染色體的畸變效應(yīng)具有明顯的相關(guān)性,可作為一種反映染色體外源性畸變因素對(duì)細(xì)胞染色體的損傷效應(yīng)強(qiáng)度的重要指標(biāo)[12]。因此,微核的外源性試驗(yàn)已經(jīng)成為了測(cè)定乙草胺對(duì)棉花根尖細(xì)胞畸變損傷效應(yīng)的簡(jiǎn)便試驗(yàn)方法。棉花根尖細(xì)胞染色體數(shù)目較多,其根尖分生區(qū)細(xì)胞分裂旺盛,對(duì)環(huán)境誘變物的損傷較為敏感,微核效應(yīng)比較容易觀察[13]。

    研究結(jié)果表明,乙草胺是內(nèi)吸性酰胺類(lèi)選擇性除草劑,對(duì)植物根系具有抑制呼吸作用,干擾核酸和蛋白質(zhì)的合成。而且在遺傳上也造成DNA分子的嚴(yán)重?fù)p傷。

    4 結(jié)論

    在本試驗(yàn)條件下,乙草胺處理時(shí)間對(duì)棉花根尖細(xì)胞有絲分裂和染色體畸變的影響要比濃度更顯著。0.1 mg/L乙草胺處理時(shí)間為12 h 和24 h時(shí)細(xì)胞分裂指數(shù)處于高水平,細(xì)胞染色體沒(méi)有出現(xiàn)畸變現(xiàn)象。處理時(shí)間長(zhǎng),乙草胺的積累對(duì)染色體的毒性比較大,細(xì)胞有絲分裂指數(shù)降低,染色體畸變與對(duì)照相比有極顯著差異。用2.0 mg/L濃度乙草胺處理72 h時(shí)后,細(xì)胞分裂指數(shù)與對(duì)照相比有極顯著性差異,染色體畸變細(xì)胞比較多,畸變率達(dá)到最高水平。乙草胺隨著處理濃度增加及時(shí)間的延長(zhǎng)對(duì)棉花根尖細(xì)胞有絲分裂和染色體形態(tài)有抑制作用增加。因此,在棉花生產(chǎn)中使用乙草胺防除雜草,應(yīng)掌握適宜的濃度,才能達(dá)到最佳除草效果。

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