提升液相色譜法檢測(cè)食品添加劑準(zhǔn)確性的措施

喬奇 姜濤

為了達(dá)到防腐的目的、改善口感、獲得更高品質(zhì)的產(chǎn)品，食品添加劑常被應(yīng)用到食品生產(chǎn)中。隨著技術(shù)的不斷發(fā)展，食品添加劑的種類也越來越多，每一種食品添加劑都有著自己的獨(dú)特功能。但近些年來，很多商家在食品生產(chǎn)過程中所添加的食品添加劑都是超標(biāo)準(zhǔn)的，甚至很多屬于法律明文禁止添加的，嚴(yán)重威脅到廣大消費(fèi)者的身體健康。隨著物質(zhì)生活水平的不斷提升，人們對(duì)于生活質(zhì)量的要求越來越高，加上在奶粉、包子、月餅等食品行業(yè)所曝光的添加致癌添加劑等內(nèi)幕，越來越多的人將關(guān)注點(diǎn)集中到食品添加劑的安全問題上。

在食品添加劑的檢測(cè)方法中，色譜分析法與其他傳統(tǒng)的檢測(cè)方法相比，安全性與準(zhǔn)確性更高。當(dāng)前我國相關(guān)部門針對(duì)食品添加劑的檢測(cè)主要是借助液相色譜法，因此如何高效合理地應(yīng)用液相色譜法完成對(duì)食品添加劑的檢測(cè)工作具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

一、準(zhǔn)備工作

1.流動(dòng)相的過濾與脫氣。液相色譜檢測(cè)法常使用純水與色譜純?cè)噭┳鳛榱鲃?dòng)相，雖然都是純凈物，但是其中也可能含有雜質(zhì)顆粒，要在檢測(cè)之前借助規(guī)格為0.45μm的濾膜對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行過濾處理，去除其中存在的雜質(zhì)顆粒，避免在檢測(cè)過程中堵塞色譜柱的內(nèi)腔，一旦發(fā)生堵塞，不僅會(huì)損壞色譜儀，還會(huì)影響到檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。為了避免檢測(cè)時(shí)流動(dòng)相干擾到泵的正常運(yùn)行，還要在注入流動(dòng)相之前做好脫氣處理，減少實(shí)驗(yàn)中氣泡的產(chǎn)生，以免影響到檢測(cè)效果。通常會(huì)借助煮沸或者超聲脫氣的方法進(jìn)行，由于處理過程中可能存在溶劑揮發(fā)的問題，因此借助超聲波原理進(jìn)行的超聲脫氣法應(yīng)用更為普遍，不僅不會(huì)影響到溶劑的成分，所需要的時(shí)間也比較短，只要20分鐘就能完成。同時(shí)，前期準(zhǔn)備工作還要最大限度地保證溶劑瓶之間不會(huì)出現(xiàn)碰撞現(xiàn)象，避免溶劑瓶發(fā)生碎裂。

2.HPL的柱壓和排氣泡的檢查。檢測(cè)之前要針對(duì)HPL的柱壓情況進(jìn)行檢查，這直接關(guān)系到最終的檢測(cè)數(shù)據(jù)是否準(zhǔn)確。如果HPL柱壓過高時(shí)，要想將柱壓降下來，就要將HPL的保護(hù)柱拆下來，借助肉眼對(duì)其中的柱壓變化進(jìn)行觀察。如果發(fā)現(xiàn)柱壓出現(xiàn)下降，則意味著保護(hù)柱需要更換；如果柱壓沒有變化，依然保持過高的狀態(tài)，則需要進(jìn)一步做檢查。工作人員需要將色譜柱拆下后再觀察柱壓的變化情況，如果柱壓還是過高，就要清洗色譜柱的管路，查看是否存在雜質(zhì)堵塞管路的情況。如果柱壓依然沒有變化，則要繼續(xù)檢查，將色譜柱的進(jìn)出口反接，借助高強(qiáng)壓的流動(dòng)相來清洗色譜柱，同時(shí)觀察柱壓的變化情況。如果依然沒有效果，就要更換色譜柱的入口篩板，查看是否有雜物堵塞篩板。如果經(jīng)過上述檢查都沒有起到作用，就只能聯(lián)系廠家維修處理。

3.清洗色譜柱，保持色譜柱的平衡狀態(tài)。經(jīng)過上述準(zhǔn)備工作，檢測(cè)人員還要檢查室內(nèi)環(huán)境的溫度，準(zhǔn)備好必須用到的檢測(cè)設(shè)備和器具，清洗好色譜柱。清洗色譜柱的過程中要先用混有甲醇的水來沖洗，再用甲醇清洗半小時(shí)，最后借助流動(dòng)相的清洗來平衡色譜柱的基線。

二、過程分析

1.進(jìn)行空白試驗(yàn)。食品檢測(cè)開始前要先進(jìn)行一次空白實(shí)驗(yàn)，確定好標(biāo)準(zhǔn)空白，也就是工作基線。然后再確定試劑空白，也就是在不添加樣品的前提下按照實(shí)驗(yàn)操作步驟做好前期處理工作，將得到的制備樣進(jìn)樣。通過進(jìn)行空白實(shí)驗(yàn)，能夠最大限度地排除儀器設(shè)備與試劑對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾，提高結(jié)果的準(zhǔn)確性。

2.開展定性試驗(yàn)。定性實(shí)驗(yàn)進(jìn)行之前，要通過進(jìn)樣標(biāo)準(zhǔn)溶液來確保標(biāo)準(zhǔn)液的保留時(shí)間以及靈敏度，這對(duì)于需要開展多組食品添加劑檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)來說更加重要，比如在檢測(cè)苯甲酸、山梨酸、糖精鈉等食品添加劑時(shí)都要先開展單標(biāo)與混標(biāo)的測(cè)試實(shí)驗(yàn)，確認(rèn)色譜柱的保留時(shí)間以及柱分離的效果。這樣能夠有效避免發(fā)生檢測(cè)對(duì)象出錯(cuò)的現(xiàn)象，如果有條件的話，還可以借助質(zhì)譜檢測(cè)器對(duì)被檢測(cè)的組分進(jìn)一步定性，避免假陽性結(jié)果。

3.做好定量檢測(cè)。在正式開始樣品檢測(cè)前要先做好標(biāo)準(zhǔn)序列，按照一定的濃度順序?qū)?biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)樣，制定標(biāo)準(zhǔn)曲線，在此基礎(chǔ)上將經(jīng)過前期處理的樣品檢測(cè)結(jié)果代入，計(jì)算最終的結(jié)果。需要注意的是，其中存在曲線線性相關(guān)系數(shù)，如果系數(shù)越接近1，說明曲線線性效果越好，得到的結(jié)果越準(zhǔn)確。如果被檢測(cè)樣品超出了標(biāo)準(zhǔn)曲線的檢測(cè)范圍，就需要對(duì)樣品進(jìn)行稀釋后再進(jìn)樣，計(jì)算結(jié)果時(shí)將稀釋的倍數(shù)加入其中。

4.作出結(jié)果判定。我國出臺(tái)的《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760-2014）對(duì)各種食品添加劑從具體使用單位到添加的限量標(biāo)準(zhǔn)都做出了明確的規(guī)定，實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果出來后可以與標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對(duì)比，得到最終的結(jié)果判定。如果得到的檢測(cè)結(jié)果是未檢出，就要在報(bào)告中注明檢測(cè)方法的檢出限；如果得到的檢測(cè)結(jié)果處于臨界值，就要將測(cè)量不確定度計(jì)算出來后再進(jìn)行結(jié)果判定。

三、后處理工作

食品添加劑檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)束之后，要做好后續(xù)的處理工作，及時(shí)清洗實(shí)驗(yàn)中使用過的各種儀器與器具。具體來說，要徹底清洗已經(jīng)使用過的HPLC儀器中的色譜柱，可以用甲醇水先沖洗半小時(shí)后再觀察柱壓的狀態(tài)，確保已經(jīng)恢復(fù)到使用前的狀態(tài)。還要用純水定期清洗單向閥、保護(hù)柱、流動(dòng)性過濾頭等設(shè)備，為了確保水質(zhì)，要現(xiàn)場(chǎng)過濾清水，最大限度地減少雜質(zhì)與細(xì)菌的存在，確保檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。