miR-29a-3p靶向組蛋白去乙?；?對(duì)高糖誘導(dǎo)的小鼠足細(xì)胞損傷的影響

徐艷梅 黃杰 熊艷 許琛 汪磊 趙夏 張璐璐 許傳文

(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬普愛(ài)醫(yī)院腎內(nèi)科,湖北 武漢 430030)

糖尿病腎病(DN)是糖尿病常見(jiàn)并發(fā)癥并可導(dǎo)致終末期腎衰竭，其發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，既往研究顯示炎癥介質(zhì)釋放、細(xì)胞凋亡及氧化應(yīng)激等均可通過(guò)破壞腎小球過(guò)濾屏障進(jìn)而引發(fā)DN〔1〕。足細(xì)胞又稱為腎球臟層上皮細(xì)胞，具有合成腎小球基底膜主要成分及維持腎小球過(guò)濾屏障完整性等功能，研究發(fā)現(xiàn)腎小球足細(xì)胞損傷可能是導(dǎo)致DN發(fā)生及發(fā)展的主要因素〔2〕。因此尋找有效治療及防止足細(xì)胞損傷的方法成為亟待解決的問(wèn)題。研究表明，高糖可顯著下調(diào)體外培養(yǎng)的人近端腎小管上皮細(xì)胞中微小RNA(miR)-29a的表達(dá)，高糖可通過(guò)下調(diào)miR-29a進(jìn)而造成基質(zhì)膠原聚集最終導(dǎo)致DN〔3〕。急性腎損傷患者血清中miR-29a表達(dá)水平降低，過(guò)表達(dá)miR-29a能抑制腎小管上皮細(xì)胞凋亡〔4〕。在糖尿病小鼠中，miR-29表達(dá)下調(diào)，過(guò)表達(dá)miR-29能夠抑制高糖環(huán)境導(dǎo)致的腎小管上皮細(xì)胞的損傷〔5〕。通過(guò)生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)miR-29a-3p與組蛋白去乙?；?HDAC)4的 3′UTR存在結(jié)合位點(diǎn)，研究顯示HDAC4在STZ誘導(dǎo)的DN大鼠模型的腎臟中表達(dá)顯著增加，同時(shí)體外實(shí)驗(yàn)顯示高糖刺激能誘導(dǎo)足細(xì)胞HDAC4的表達(dá)〔6〕。但miR-29a-3p靶向HDAC4對(duì)高糖誘導(dǎo)的小鼠足細(xì)胞損傷的影響未見(jiàn)相關(guān)研究。本研究通過(guò)高糖誘導(dǎo)小鼠足細(xì)胞MPC5模擬DN環(huán)境，探討miR-29a-3p對(duì)高糖誘導(dǎo)損傷MPC5細(xì)胞的影響，并驗(yàn)證其與HDAC4的靶向關(guān)系，為臨床靶向治療DN提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1細(xì)胞與試劑 小鼠腎臟足細(xì)胞系MPC5購(gòu)自上?？道噬锟萍加邢薰?。DMEM培養(yǎng)基、胰蛋白酶及胎牛血清均購(gòu)自上海滬峰生物科技有限公司；miR-29a-3p mimic及陰性轉(zhuǎn)染質(zhì)粒、miR-29a-3p抑制劑(anti-miR-29a-3p)、anti-miR-NC均購(gòu)自上海吉瑪有限公司；si-HDAC4、陰性對(duì)照siRNA(si-NC)、HDAC4過(guò)表達(dá)質(zhì)粒(pcDNA-HDAC4)與空白對(duì)照空質(zhì)粒(pcDNA)均購(gòu)自廣州銳博生物科技有限公司；實(shí)時(shí)熒光定量試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒及Trizol試劑均購(gòu)自美國(guó)Life Technology公司；細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒及脂質(zhì)體Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑盒均購(gòu)自杭州吉諾生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司；兔抗鼠HDAC4一抗購(gòu)自美國(guó)Protein Tech Group公司；兔抗鼠結(jié)蛋白(desmin)抗體、兔抗鼠Bcl-2、Bax、酶切caspase-3多克隆抗體均購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司；兔抗鼠synaptopodin抗體、GAPDH及辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的山羊抗兔IgG均購(gòu)自北京博奧森公司。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染及分組 MPC5細(xì)胞復(fù)蘇，放入DMEM培養(yǎng)基，培養(yǎng)基主要成分為體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清、青霉素(100 kU/L)、鏈霉素(100 mg/L)及γ-干擾素(10 kU/L)，在溫度37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，第2天更換為不含γ-干擾素的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)10～14 d后收集細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)〔7〕。收集成熟MPC5細(xì)胞接種于培養(yǎng)瓶(25 cm2)中，密度為5×108/L，待細(xì)胞生長(zhǎng)融合至70%～80%時(shí)更換為不含胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，饑餓處理24 h，隨機(jī)分為正常對(duì)照(NG)組、高糖刺激(HG)組，其中NG組中加入D-葡萄糖5 mmol/L；HG組中加入D-葡萄糖30 mmol/L〔8〕。收集HG組對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期MPC5細(xì)胞并接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板，待細(xì)胞融合度至90%時(shí)參照Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行miR-29a-3p mimic、miR-NC細(xì)胞轉(zhuǎn)染，si-HDAC4、si-NC轉(zhuǎn)染至MPC5細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染6 h后更換新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)48 h收集細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.2qRT-PCR法檢測(cè)MPC5細(xì)胞中miR-29a-3p及HDAC4 mRNA表達(dá) 參照Trizol提取試劑盒說(shuō)明書(shū)提取各組MPC5細(xì)胞總RNA，利用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)RNA濃度、純度，RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，以cDNA為模板進(jìn)行qRT-PCR擴(kuò)增，miR-29a-3p及HDAC4 引物均由上海生工生物工程股份有限公司合成。PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件為95℃ 5 min循環(huán)1次，95℃變性15 s，60℃退火30 s，72℃延伸30 s，共循環(huán)40次。miR-29a-3p以U6為內(nèi)參基因，HDAC4以GAPDH為內(nèi)參基因，采用2-ΔΔCt法計(jì)算miR-29a-3p及HDAC4 mRNA相對(duì)表達(dá)量。

1.2.3Western印跡法檢測(cè)MPC5細(xì)胞中HDAC4、synaptopodin、desmin、Bcl-2、Bax及酶切caspase-3蛋白表達(dá) 收集各組MPC5細(xì)胞，裂解蛋白后提取細(xì)胞總蛋白，利用二喹啉甲酸(BCA)法測(cè)定蛋白濃度，分別取40 μg蛋白經(jīng)10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)，結(jié)束后將蛋白凝膠轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯(PVDF)膜，5%BSA脫脂奶粉封閉，30 min后分別加入蛋白一抗，置于4℃孵育過(guò)夜，次日使用TBST洗膜，分別加入二抗，室溫下孵育2 h，TBST洗膜，使用增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光試劑(ECL)顯影，各蛋白均以GAPDH為內(nèi)參基因，放入凝膠成像系統(tǒng)分析儀并采用Quantity One軟件分析各蛋白條帶灰度值。

1.2.4流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MPC5細(xì)胞凋亡 分別取各組MPC5細(xì)胞，胰蛋白酶消化后收集細(xì)胞，預(yù)冷磷酸鹽緩沖液(PBS)清洗細(xì)胞，1 200 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min(離心半徑 6 cm)，棄PBS，加入結(jié)合緩沖液，重懸細(xì)胞，分別加入Annexin V-FITC(5 μl)、PI(1 μl)，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)MPC5細(xì)胞凋亡情況并利用Flowjo軟件計(jì)算細(xì)胞凋亡率。

1.2.5雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn) 收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期MPC5細(xì)胞接種于24孔細(xì)胞培養(yǎng)板(1×105個(gè)/ml)，待細(xì)胞融合度至80%時(shí)分別將miR-29a-3p mimic、miR-NC與WT-HDAC4、MUT-HDAC4質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入MPC5細(xì)胞中，繼續(xù)培養(yǎng)48 h后檢測(cè)MPC5細(xì)胞熒光強(qiáng)度。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、單因素方差分析、SNK-q檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1高糖刺激對(duì)各組腎臟足細(xì)胞MPC5中miR-29a-3p和HDAC4基因表達(dá)的影響 qRT-PCR法與Western印跡法分別檢測(cè)NG組與HG組腎臟足細(xì)胞MPC5中miR-29a-3p和HDAC4基因表達(dá)，結(jié)果顯示HG組腎臟足細(xì)胞MPC5中miR-29a-3p表達(dá)水平顯著低于NG組(P<0.01)，而HDAC4 mRNA及蛋白表達(dá)均顯著高于NG組(P<0.01)，見(jiàn)圖1、表1。

圖1 HDAC4蛋白表達(dá)

表1 高糖刺激對(duì)各組腎臟足細(xì)胞MPC5中miR-29a-3p和HDAC4基因表達(dá)的影響

2.2miR-29a-3p過(guò)表達(dá)對(duì)高糖刺激各組腎臟足細(xì)胞MPC5中synaptopodin和desmin表達(dá)的影響 將miR-29a-3p mimic、miR-NC分別轉(zhuǎn)染至高糖誘導(dǎo)的MPC5細(xì)胞中，qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示HG+miR-29a-3p組MPC5細(xì)胞中miR-29a-3p表達(dá)水平顯著高于HG+miR-NC組(P<0.05)，提示轉(zhuǎn)染成功。Western印跡法檢測(cè)MPC5細(xì)胞中synaptopodin、desmin蛋白表達(dá)，結(jié)果顯示HG組MPC5細(xì)胞中synaptopodin蛋白表達(dá)明顯降低(P<0.05)，miR-29a-3p mimic轉(zhuǎn)染入HG組MPC5細(xì)胞中，發(fā)現(xiàn)HG+miR-29a-3p MPC5細(xì)胞中synaptopodin蛋白表達(dá)明顯增加(P<0.05)；HG組MPC5細(xì)胞中desmin蛋白表達(dá)明顯升高(P<0.05)，轉(zhuǎn)染miR-29a-3p mimic后MPC5細(xì)胞中desmin蛋白表達(dá)明顯降低(P<0.05)，見(jiàn)圖2、表2。表明miR-29a-3p過(guò)表達(dá)可減緩高糖刺激腎臟足細(xì)胞損傷。

1～4：NG組、HG組、HG+miR-NC組、HG+miR-29a-3p組，下圖同圖2 synaptopodin和desmin蛋白表達(dá)

表2 miR-29a-3p過(guò)表達(dá)對(duì)高糖刺激各組腎臟足細(xì)胞MPC5中synaptopodin和desmin表達(dá)的影響

2.3miR-29a-3p過(guò)表達(dá)對(duì)高糖刺激腎臟足細(xì)胞MPC5凋亡的影響 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)miR-29a-3p過(guò)表達(dá)后MPC5細(xì)胞凋亡情況，結(jié)果顯示HG組MPC5細(xì)胞凋亡率顯著高于NG組(P<0.05)，miR-29a-3p過(guò)表達(dá)后HG+miR-29a-3p組MPC5細(xì)胞凋亡率顯著降低(P<0.05)，進(jìn)一步采用Western印跡法檢測(cè)細(xì)胞凋亡蛋白表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)相較于NG組，HG組MPC5細(xì)胞中抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表達(dá)明顯降低(P<0.05)，促凋亡蛋白Bax、酶切caspase-3蛋白表達(dá)均顯著升高(均P<0.05)；與HG+miR-NC組相比，HG+miR-29a-3p組MPC5細(xì)胞中Bcl-2蛋白表達(dá)顯著升高(P<0.05)，而B(niǎo)ax、酶切caspase-3蛋白表達(dá)均顯著降低(均P<0.05)，見(jiàn)圖3、表3。表明miR-29a-3p過(guò)表達(dá)可抑制小鼠腎臟足細(xì)胞MPC5凋亡。

圖3 miR-29a-3p過(guò)表達(dá)對(duì)高糖刺激各組腎臟足細(xì)胞MPC5凋亡蛋白的影響

表3 miR-29a-3p過(guò)表達(dá)對(duì)高糖刺激各組腎臟足細(xì)胞MPC5凋亡蛋白及凋亡率的影響

2.4抑制HDAC4表達(dá)對(duì)高糖刺激腎臟足細(xì)胞MPC5損傷的影響 為了驗(yàn)證HDAC4對(duì)高糖刺激腎臟足細(xì)胞MPC5損傷的影響，采用基因干擾技術(shù)抑制HDAC4表達(dá)，Western印跡法驗(yàn)證轉(zhuǎn)染結(jié)果，HG+si-HDAC4組MPC5細(xì)胞中HDAC4蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.05)，提示基因干擾技術(shù)成功抑制HDAC4表達(dá)。通過(guò)Western印跡法檢測(cè)抑制HDAC4表達(dá)后MPC5細(xì)胞中足細(xì)胞損傷及細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)，以此驗(yàn)證HDAC4表達(dá)變化對(duì)足細(xì)胞MPC5損傷的影響，結(jié)果顯示與HG+si-NC組比較，HG+si-HDAC4組MPC5細(xì)胞中synaptopodin與Bcl-2蛋白表達(dá)均明顯升高(P<0.05)，而desmin、Bax、酶切caspase-3蛋白表達(dá)均明顯降低(P<0.05)，見(jiàn)圖4、表4。說(shuō)明抑制HDAC4表達(dá)可減輕高糖刺激腎臟足細(xì)胞MPC5細(xì)胞損傷，抑制MPC5細(xì)胞凋亡。

1～4：NG組、HG組、HG+si-NC組、HG+si-HDAC4組圖4 HDAC4、synaptopodin、desmin及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)

表4 抑制HDAC4表達(dá)對(duì)高糖刺激腎臟足細(xì)胞MPC5損傷的影響

2.5miR-29a-3p靶向調(diào)控HDAC4的表達(dá) 用生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)HDAC4為miR-29a-3p潛在靶基因，見(jiàn)圖5A。采用熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)miR-29a-3p過(guò)表達(dá)可降低WT-HDAC4的熒光素酶活性(P<0.05)，而MUT-HDAC4與miR-29a-3p mimic共轉(zhuǎn)染MPC5細(xì)胞其熒光素酶活性無(wú)明顯變化(P>0.05)，見(jiàn)表5。Western印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示miR-29a-3p過(guò)表達(dá)后MPC5細(xì)胞中HDAC4蛋白表達(dá)水平明顯下降(P<0.05)，抑制miR-29a-3p表達(dá)后MPC5細(xì)胞中HDAC4蛋白表達(dá)水平明顯升高(P<0.05)，見(jiàn)圖5B、表6。

A：HDAC4的3′UTR中含有與miR-29a-3p互補(bǔ)的核苷酸序列；B：HDAC4蛋白表達(dá)，1～4：miR-NC組、miR-29a-3p組、anti-miR-NC組、anti-miR-29a-3p組圖5 miR-29a-3p靶向調(diào)控HDAC4的表達(dá)

表5 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)

表6 miR-29a-3p調(diào)控HDAC4蛋白的表達(dá)

2.6HDAC4過(guò)表達(dá)逆轉(zhuǎn)了miR-29a-3p過(guò)表達(dá)對(duì)高糖刺激腎臟足細(xì)胞MPC5損傷的作用 構(gòu)建HDAC4過(guò)表達(dá)質(zhì)粒與miR-29a-3p mimic共轉(zhuǎn)染入MPC5細(xì)胞，相對(duì)于HG+miR-29a-3p+pcDNA組，HDAC4過(guò)表達(dá)后，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示MPC5細(xì)胞凋亡率增加(P<0.05)，Western印跡檢測(cè)結(jié)果顯示synaptopodin與Bcl-2蛋白表達(dá)均明顯降低，而desmin、Bax、酶切caspase-3蛋白表達(dá)均顯著升高(P<0.05)，見(jiàn)表7、圖6。

表7 HDAC4過(guò)表達(dá)逆轉(zhuǎn)了miR-29a-3p過(guò)表達(dá)對(duì)高糖刺激腎臟足細(xì)胞MPC5損傷的作用

1～4：miR-NC組、miR-29a-3p組、miR-29a-3p+PCDNA組、miR-29a-3p+PCDNA-HDAC4組圖6 HDAC4、synaptopodin、desmin蛋白及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)

3 討 論

DN患者主要臨床表現(xiàn)為微量尿蛋白，隨著疾病進(jìn)展會(huì)出現(xiàn)腎小球?yàn)V過(guò)率降低及蛋白尿惡化等，最終導(dǎo)致腎功能喪失，蛋白濾過(guò)最后屏障是足細(xì)胞，足細(xì)胞損傷是導(dǎo)致蛋白尿產(chǎn)生的主要原因〔9〕。研究表明DN發(fā)展為腎小球硬化及纖維化的主要原因在于足細(xì)胞凋亡，成熟足細(xì)胞持續(xù)凋亡可促使其功能發(fā)生紊亂進(jìn)而產(chǎn)生蛋白尿〔10，11〕。Zhou等〔12〕研究顯示miRNA在DN發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用并可成為治療DN新靶點(diǎn)。因此，本研究探討DN高糖誘導(dǎo)足細(xì)胞損傷的機(jī)制有助于尋找防治DN的新靶點(diǎn)，對(duì)改善DN治療方案及降低死亡率均具有重要意義。

miR-29a在腎臟疾病發(fā)生及發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要調(diào)控作用，研究顯示下調(diào)miR-29a表達(dá)可通過(guò)促進(jìn)MMP-2表達(dá)進(jìn)而促使腎小管間質(zhì)及腎臟纖維化發(fā)生〔13～15〕。相關(guān)研究表明DN患者與1型糖尿病患者血清中miR-29a-3p表達(dá)水平降低，并可參與疾病發(fā)生及發(fā)展過(guò)程〔16，17〕。本研究結(jié)果顯示高糖誘導(dǎo)腎臟足細(xì)胞MPC5中miR-29a-3p表達(dá)水平明顯降低，說(shuō)明miR-29a-3p表達(dá)水平降低可能促進(jìn)MPC5損傷。通過(guò)將miR-29a-3p mimic及其陰性對(duì)照質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入高糖誘導(dǎo)的MPC5細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)高糖誘導(dǎo)的MPC5細(xì)胞中synaptopodin蛋白表達(dá)降低，上調(diào)miR-29a-3p表達(dá)后其表達(dá)水平明顯上升；而desmin蛋白表達(dá)明顯高于正常組，上調(diào)miR-29a-3p表達(dá)后其表達(dá)水平明顯降低，其中desmin蛋白是足細(xì)胞損傷特異性和敏感指標(biāo)，在足細(xì)胞損傷時(shí)表達(dá)增加；synaptopodin是成熟足細(xì)胞表型的一個(gè)重要標(biāo)志蛋白，在足細(xì)胞損傷時(shí)表達(dá)減少〔18〕。提示高糖環(huán)境下miR-29a-3p表達(dá)水平降低并可造成腎臟足細(xì)胞MPC5損傷，上調(diào)miR-29a-3p表達(dá)可緩解高糖所致足細(xì)胞損傷。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)高糖誘導(dǎo)的MPC5細(xì)胞凋亡率顯著升高，抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表達(dá)水平降低，促細(xì)胞凋亡蛋白Bax、酶切caspase-3蛋白表達(dá)均明顯升高，上調(diào)miR-29a-3p表達(dá)后高糖誘導(dǎo)的MPC5細(xì)胞凋亡率明顯降低，Bcl-2蛋白表達(dá)明顯升高，而明Bax、酶切caspase-3蛋白表達(dá)均顯降低，研究報(bào)道指出Bcl-2蛋白表達(dá)降低與Bax、酶切caspase-3蛋白表達(dá)升高可促進(jìn)DN蛋白尿形成過(guò)程〔19〕。提示上調(diào)miR-29a-3p表達(dá)可通過(guò)減少足細(xì)胞凋亡進(jìn)而降低蛋白尿生成。

HDAC4作為HDACs家族的一員可通過(guò)去除乙?；偈菇M蛋白染色質(zhì)凝集進(jìn)而抑制基因轉(zhuǎn)錄激活，研究顯示HDAC4可在基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控及細(xì)胞凋亡等多種生物進(jìn)程中發(fā)揮調(diào)控作用，并可促進(jìn)心血管疾病、骨關(guān)節(jié)炎等多種疾病發(fā)生及發(fā)展〔20〕。HDAC4在高脂血癥小鼠大腦皮質(zhì)呈高表達(dá)并可促進(jìn)高脂血癥誘發(fā)的腦神經(jīng)退行性疾病〔21〕。楊雪琛等〔22〕研究表明HDACs與糖尿病發(fā)生發(fā)展過(guò)程密切相關(guān)并可能作為治療糖尿病的藥物靶點(diǎn)。本研究結(jié)果說(shuō)明HDAC4 表達(dá)水平升高可能促進(jìn)高糖誘導(dǎo)足細(xì)胞損傷。采用基因干擾技術(shù)抑制HDAC4表達(dá)后MPC5細(xì)胞中synaptopodin、Bcl-2蛋白表達(dá)明顯升高，而desmin、Bax、酶切caspase-3蛋白表達(dá)均顯著降低，提示抑制HDAC4表達(dá)可抑制腎臟足細(xì)胞MPC5凋亡，延緩高糖誘導(dǎo)的足細(xì)胞損傷。Li等〔23〕研究表明HDAC4是miR-29a-3p的靶基因并可參與胃癌發(fā)生及發(fā)展進(jìn)程。本研究采用熒光素酶實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)miR-29a-3p可靶向結(jié)合HDAC4并負(fù)向調(diào)控其表達(dá)水平，為了進(jìn)一步驗(yàn)證HDAC4在高糖誘導(dǎo)足細(xì)胞損傷中的作用，本研究結(jié)果提示miR-29a-3p通過(guò)抑制HDAC4表達(dá)進(jìn)而抑制高糖誘導(dǎo)MPC5細(xì)胞凋亡并減緩足細(xì)胞損傷。

綜上，高糖誘導(dǎo)小鼠足細(xì)胞MPC5中miR-29a-3p表達(dá)下調(diào)，HDAC4表達(dá)上調(diào)，miR-29a-3p可通過(guò)抑制HDAC4表達(dá)并減少M(fèi)PC5細(xì)胞凋亡進(jìn)而防止足細(xì)胞損傷最終延緩DN發(fā)生及發(fā)展，可為早期防治DN足細(xì)胞損傷提供理論依據(jù)。但關(guān)于miR-29a-3p如何調(diào)控DN足細(xì)胞損傷相關(guān)通路仍需深入研究。