一起保育豬豬瘟和圓環(huán) 2 型病毒混合感染的診斷

朱再良

（雙峰縣石牛鄉(xiāng)動物防疫站，湖南婁底417709）

2020 年7 月某豬場出現(xiàn)了保育豬死亡疫情，針對病豬的臨床癥狀、剖檢病變及結(jié)合目前豬場的常見傳染病流行情況，采集3 份患病仔豬病料樣品，進行了豬瘟病毒、藍耳病病毒、偽狂犬病毒和圓環(huán)病毒核酸檢測；采集22 份血液樣品檢測了豬瘟病毒抗體、偽狂犬gB 抗體和gE 抗體、藍耳病毒抗體檢測[1～2]。

病毒核酸檢測結(jié)果豬瘟病毒和圓環(huán)病毒呈陽性，藍耳病毒和偽狂犬病毒陰性；抗體水平檢測結(jié)果豬瘟病毒抗體水平較差，偽狂抗體水平較好，沒有野毒感染，藍耳病毒抗體水平較高。初步判斷本次疫情為豬瘟和圓環(huán)2 型病毒感染，針對性采取防治措施，并調(diào)整豬場免疫程序，本次疫情得到較好控制。

1 發(fā)病情況

據(jù)豬場飼養(yǎng)員介紹，豬群發(fā)病后部分豬出現(xiàn)高熱、咳嗽和呼吸困難；耳部可看到出血點，精神沉郁，喜臥，食欲減退直至廢絕。生長發(fā)育受阻，進行性消瘦，并陸續(xù)出現(xiàn)死亡；極少數(shù)出現(xiàn)站立不穩(wěn)等神經(jīng)癥狀。

2 病理變化

解剖3 頭病豬，發(fā)現(xiàn)心外膜有出血點，腎、肺都有多處出血小點，肺門淋巴結(jié)與腸系膜淋巴結(jié)腫大都有出血，呈黑白相間的大理石樣病變，腹股溝淋巴結(jié)明顯腫大并出血，切開皮膚見多處出血點，脾臟無明顯腫大但邊緣有米粒大黑色梗死。采集肝臟、脾臟、淋巴結(jié)、肺臟等病料和22 份小豬血樣，以便進行血清學(xué)檢測，均送檢江西農(nóng)業(yè)大學(xué)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)實驗室檢測。

3 實驗室檢測

3.1 設(shè)備

恒溫生化培養(yǎng)箱、生物安全柜為蘇凈集團產(chǎn)品；PCR 擴增儀、電泳系統(tǒng)、紫外分析系統(tǒng)等為杭州晶格公司產(chǎn)品。

3.2 主要材料

脫纖綿羊血瓊脂培養(yǎng)基，為實驗室自行配制；抗體檢測ELISA 試劑盒為美國IDEXX 公司產(chǎn)品；M-MLV 反轉(zhuǎn)錄酶為普羅麥格公司產(chǎn)品；總RNA 提取試劑盒為日本TaKaRa（寶生物）公司產(chǎn)品；PCR擴增試劑盒為北京全式金生物公司產(chǎn)品；豬瘟病毒、藍耳病毒、偽狂犬病毒和豬圓環(huán)2 型病毒PCR引物，實驗室根據(jù)相關(guān)病毒基因設(shè)計，由華大基因公司合成。

3.3 方法

3.3.1 細菌分離。在生物安全柜中，用接種環(huán)鉤取病死豬肝臟、脾臟及肺等組織病料，劃線接種于脫纖綿羊血瓊脂培養(yǎng)基，置37℃恒溫生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48 h，然后觀察結(jié)果[4～5]。

3.3.2 病毒核酸檢測。采集病豬肺臟、淋巴結(jié)、脾臟等病料，用總RNA 提取試劑盒提取總RNA，通過RT-PCR 方法，擴增豬瘟、藍耳病毒特異性基因片段；采集病豬肺臟、淋巴結(jié)、脾臟等病料，用組織裂解液處理后，提取DNA，通過PCR 方法，擴增豬偽狂犬病毒的特異性基因片段，與豬瘟、藍耳病毒擴增產(chǎn)物一同進行凝膠電泳，最后在紫外分析系統(tǒng)中觀察結(jié)果。

3.3.3 常見傳染病抗體檢測。將送檢血樣通過離心處理，提取血清，再按試劑盒說明書進行操作，分別檢測豬瘟抗體、豬偽狂犬抗體和偽狂犬野毒抗體、藍耳病毒抗體。

豬瘟抗體檢測采用阻斷ELISA、豬偽狂犬（gB抗體）總抗體和（gE 抗體）野毒抗體檢測采用競爭ELISA 法、藍耳病毒抗體檢測采用間接ELISA 法[3]，試劑盒均來自美國IDEXX 公司產(chǎn)品。

3.4 檢測結(jié)果

3.4.1 細菌分離結(jié)果。如圖1、圖2，可見2 塊培養(yǎng)基上均只有少量菌落，菌落呈中等大小、圓形、光滑、濕潤無溶血環(huán)。菌落經(jīng)革蘭氏染色，鏡檢結(jié)果如圖3和圖4，為革蘭氏陰性、中等大小、兩端鈍圓桿菌。分離細菌與豬鏈球菌、豬丹毒等病原菌菌落及形態(tài)均不符，初步判斷分離所得細菌為污染的腸桿菌，病原細菌分離陰性。

圖1 樣品1 細菌分離結(jié)果

圖2 樣品2 細菌分離結(jié)果

圖3 樣品1 分離細菌鏡檢結(jié)果

圖4 樣品2 分離細菌鏡檢結(jié)果

3.4.2 病毒核酸檢測結(jié)果，見表1 及圖5。

表1 樣品病毒基因檢測結(jié)果

圖5 病毒基因擴增結(jié)果

3.4.3 常見傳染病抗體檢測結(jié)果。本次對22 個血樣分別檢測了豬瘟病毒抗體、偽狂犬gB 抗體和偽狂犬gE 抗體、藍耳病毒抗體（見表2）,結(jié)果顯示豬瘟病毒抗體合格率36.36%、平均阻斷率37.14%、離散度42.9%；偽狂犬總抗體陽性率90.91%，野毒抗體陽性率為0；藍耳病毒抗體陽性率100%、離散度34.6%。說明豬群豬瘟抗體水平較差，整齊度一般；偽狂犬病毒抗體水平較好，沒有野毒感染；藍耳病毒抗體水平高、整齊度一般。

4 討論

本次對某豬仔豬群出現(xiàn)疫情，進行了病原學(xué)檢測和血清學(xué)檢測，結(jié)果2 份病料中未分離到病原細菌；3 份病料中檢測到2 份豬瘟病毒陽性、3 份圓環(huán)2 型病毒陽性，藍耳病毒和偽狂犬病毒陰性。血清檢測結(jié)果豬瘟抗體水平較差，藍耳病毒和偽狂犬病毒抗體水平均較好。初步判斷本次疫情為豬瘟病毒與圓環(huán)2 型病毒混合感染導(dǎo)致。

豬瘟是一種接觸性烈性傳染病，因豬瘟疫苗免疫的普及使用，目前豬瘟的發(fā)生較少，即使出現(xiàn)也以溫和型豬瘟形式多見[7]。我國在2018 年出現(xiàn)非洲豬瘟疫情后，大家普遍對非洲豬瘟的防疫高度重視，往往容易忽略其它疫病的防控。本次豬群疫情的出現(xiàn)，就與經(jīng)典豬瘟感染有關(guān)。雖然只出現(xiàn)在保育豬群，其它豬群沒有出現(xiàn)大的疫情，但也提示在非洲豬瘟疫情的防控壓力下，對傳統(tǒng)重要傳染病仍然要注意，需引起大家的重視。

表2 抗體檢測結(jié)果

豬圓環(huán)病毒病是由豬圓環(huán)病毒2 型所引起的，包括豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征、豬皮炎- 腎病綜合征等疾病，該病的發(fā)生往往與應(yīng)激因素導(dǎo)致豬群免疫力下降相關(guān)[6,8]。本次疫情中圓環(huán)2 型病毒陽性，很可能與豬群感染經(jīng)典豬瘟后，免疫力下降再導(dǎo)致圓環(huán)2 型病毒感染加重。事實上，在調(diào)整免疫程序、加強母、仔豬瘟及圓環(huán)疫苗免疫后，該場疫情迅速得到控制。