引起寧都黃雞支氣管栓塞病原菌的分離鑒定

鐘敏， 胡艷，邱光忠，蘇州，鐘如意，孔智偉 ，劉瑞平

(贛州市畜牧研究所，江西贛州341401)

支氣管栓塞是近年來肉雞群中流行的常見呼吸道疾病，以10～30 日齡肉仔雞為主要發(fā)病對(duì)象，病雞出現(xiàn)體溫升高、食欲減退、咳嗽、流涕、喘息、高度呼吸困難等癥狀，常急性死亡，秋末、冬春季節(jié)常發(fā)。該病主要通過呼吸道進(jìn)行傳播，空氣中帶有病原體的塵埃和飛沫隨呼吸過程進(jìn)入呼吸道引起雞只發(fā)病，常造成肉仔雞生長緩慢，料肉比升高，如不及時(shí)治療死淘率達(dá)到35%以上[1]。

2020 年贛州市某寧都黃雞養(yǎng)殖場發(fā)生了支氣管栓塞病，病雞表現(xiàn)精神沉郁、食欲廢絕，排黃白色、綠色稀薄糞便，剖檢可見病雞支氣管內(nèi)有干酪樣纖維素性滲出物堵塞，肺臟水腫出血，肺泡內(nèi)有泡沫樣或干酪樣物質(zhì)，氣囊混濁、增厚，病死雞可見纖維素性肝周炎、纖維素性心包炎、腹膜炎。筆者采集病料進(jìn)行了病原菌的分離鑒定，并對(duì)分離到的病原菌進(jìn)行了耐藥性分析，為臨床防治提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

培養(yǎng)基：營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基等，購自北京中海生物科技有限公司；微量生化管、藥敏試紙等購自杭州天和微生物試劑有限公司；鑒定血清與標(biāo)準(zhǔn)菌株：大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)抗O 血清購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

2 診斷方法

2.1 病原菌鏡檢與分離純化

2.1.1 病料中的病原菌鏡檢。無菌采集9 只發(fā)病雞的肺、肝、心臟等實(shí)質(zhì)器官，進(jìn)行病料的觸片革蘭氏染色、鏡檢[2]。

2.1.2 分離培養(yǎng)及純化。將觀察到大量明顯細(xì)菌的病料樣品，分區(qū)劃線接種于營養(yǎng)瓊脂平板、伊紅美藍(lán)瓊脂平板和麥康凱瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)18～24h，挑取在麥康凱瓊脂平板上生長的單個(gè)紅色的典型菌落，在普通營養(yǎng)瓊脂斜面上進(jìn)行純培養(yǎng)，37℃培養(yǎng) 18～24h。如此反復(fù)純化 3～4 代，直到獲得單菌落為止，挑取單個(gè)灰白色菌落進(jìn)行涂片、干燥、固定后進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢，觀察細(xì)菌的形態(tài)和染色特性[3]。

2.2 生化鑒定

取分離純化的單個(gè)菌落，分別接種各種細(xì)菌微量生化管進(jìn)行生化鑒定，37℃培養(yǎng)24h。

2.3 血清型鑒定

將營養(yǎng)瓊脂平板上的純培養(yǎng)物用少量0.5%石炭酸生理鹽水洗下，制成菌懸液，121℃滅菌處理2h，破壞K 抗原，抗原和大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)抗O 血清各取一白金耳，在載玻片上作凝集試驗(yàn)，同時(shí)抗原與生理鹽水進(jìn)行反應(yīng)作為對(duì)照，以排除自身凝集反應(yīng)。通過對(duì)分離菌株作血清型的檢測，鑒定 O 血清型[4]。

2.4 耐藥性分析

無菌操作條件下分別將每個(gè)分離到的菌株挑取適量的純培養(yǎng)物接種于普通營養(yǎng)瓊脂斜面，37℃培養(yǎng)18～24h，再用滅菌生理鹽水將細(xì)菌洗下制成0.5 麥?zhǔn)蠁挝坏木鷳乙?。用滅菌的涂布器將待檢病原菌均勻涂布在營養(yǎng)瓊脂平板上，采用紙片擴(kuò)散法，進(jìn)行藥敏試驗(yàn)[5]。

3 結(jié)果

3.1 鏡檢與分離純化

3.1.1 鏡檢結(jié)果。對(duì)采集的支氣管栓塞發(fā)病雞病料直接觸片，用革蘭氏染色，鏡檢發(fā)現(xiàn)，9 份病例中有7 份觀察到大量散在的兩端鈍圓、無莢膜的革蘭氏陰性小桿菌，疑似大腸桿菌。

3.1.2 分離純化結(jié)果。將在顯微鏡下觀察到大量細(xì)菌的7 份病料樣品進(jìn)行細(xì)菌分離，可分別在麥康凱培養(yǎng)基上培養(yǎng)出表面光滑、邊緣整齊、圓形、隆起的紅色菌落，在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上培養(yǎng)出深紫黑色、光滑、濕潤、帶有金屬光澤的菌落，經(jīng)培養(yǎng)純化后獲得單菌落，共分離到7 株細(xì)菌，經(jīng)涂片，革蘭氏染色，鏡檢，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，分離株均為革蘭氏陰性的中等大小的桿菌，初步判定這些細(xì)菌為大腸桿菌。

3.2 生化試驗(yàn)結(jié)果

分離到的7 個(gè)菌株均符合大腸桿菌的特征，發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、乳糖、甘露醇、果糖，產(chǎn)氣產(chǎn)酸，不發(fā)酵蔗糖，VP 試驗(yàn)陰性，MR 試驗(yàn)陽性，三糖鐵底層產(chǎn)酸，產(chǎn)生靛基質(zhì)，尿素酶試驗(yàn)陰性，結(jié)果見表1。

3.3 血清型鑒定

經(jīng)細(xì)菌分離培養(yǎng)及生化鑒定，所分離到的病原菌確定為大腸桿菌。應(yīng)用微量平板凝集試驗(yàn)鑒定分離株的O 抗原血清型，結(jié)果顯示均屬于O78血清型。

表1 分離株生化鑒定結(jié)果

3.4 耐藥性分析

耐藥試驗(yàn)結(jié)果顯示，7 個(gè)分離株對(duì)頭孢西丁、頭孢吡肟高度敏感，對(duì)大多數(shù)抗生素耐藥，其中對(duì)強(qiáng)力霉素的耐藥性最強(qiáng)。結(jié)果見表2。

表2 7 株分離菌耐藥性試驗(yàn)結(jié)果

4 討論

寧都黃雞是江西省優(yōu)良地方雞種，支氣管栓塞是近年來該雞種常發(fā)的疫病之一，主要流行于季節(jié)交替時(shí)期。一般情況下，雛雞患病后死亡率較高，給養(yǎng)殖戶帶來一定的經(jīng)濟(jì)損失。由于肉雞沒有明顯而完整的膈，其肺臟小巧，又與氣囊相通，病原微生物很容易沿著呼吸道進(jìn)入肺和氣囊，導(dǎo)致氣囊發(fā)炎，而氣囊壁很薄，血管少，很多藥物在氣囊內(nèi)難以有效停留發(fā)揮藥效，造成病程持久引發(fā)支氣管栓塞。另外，許多養(yǎng)殖場因?yàn)橐獮殡u群保溫，經(jīng)常緊閉門窗忽視通風(fēng)，密閉的環(huán)境令雞舍內(nèi)氨氣濃度越來越高，造成病原菌入侵呼吸道引發(fā)支氣管栓塞[6]。在生產(chǎn)實(shí)踐中養(yǎng)殖戶要加強(qiáng)對(duì)本病的防治，以減少損失，提高養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益，可采用以下綜合防治措施：

一是處理好通風(fēng)與保溫的關(guān)系。一般1～2 周齡以保溫為主，3～4 周齡時(shí)適當(dāng)通風(fēng)，4 周齡后以通風(fēng)為主。另外，在進(jìn)風(fēng)口外側(cè)加一個(gè)可加溫的緩沖間是防止冷應(yīng)激的好辦法。

二是加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，搞好環(huán)境衛(wèi)生、及時(shí)清糞，定期消毒，保持適宜的濕度，減少室內(nèi)氨氣等有害氣體濃度；降低飼養(yǎng)密度，平衡營養(yǎng)，減少應(yīng)激，提高抵抗力，盡量減少發(fā)病誘因。

三是科學(xué)免疫接種，飲水中添加電解多維，提高機(jī)體抵抗力，減少應(yīng)激反應(yīng)和混合感染，控制繼發(fā)感染。

四是藥物防治。許多研究報(bào)道表明，肉雞支氣管栓塞往往是多種疾病混合感染的結(jié)果，對(duì)發(fā)病病例進(jìn)行病原的分離及鑒定發(fā)現(xiàn)，分離率較高的是H9 亞型禽流感病毒和不同血清型的禽致病性大腸桿菌[7]。疾病前期主要表現(xiàn)在呼吸道上，癥狀為支氣管栓塞，后幾天才會(huì)出現(xiàn)流感和大腸桿菌的癥狀。因此，治療上需采用聯(lián)合用藥，采取有效的抗病毒藥和敏感抗生素聯(lián)合用藥，可以起到較好的治療效果，大腸桿菌極易產(chǎn)生耐藥性，所以臨床治療最好使用經(jīng)藥敏試驗(yàn)篩選的敏感性藥物以合理的治療劑量作治療性用藥。本試驗(yàn)通過對(duì)分離株進(jìn)行耐藥性分析，篩選敏感藥物，同時(shí)結(jié)合抗病毒藥物使用，加強(qiáng)對(duì)癥治療，祛痰、平喘、降低體溫，使發(fā)病雞場疫情得到及時(shí)控制。