膠體金免疫層析法與酶抑制率法快速檢測(cè)果蔬中農(nóng)藥殘留比較研究

鄧家軍 楊琳芬 張富生 王兆芹 廖健 魏敏芝 葉琴 王茜 張志芳 陳玲

摘要 運(yùn)用膠體金免疫層析法與酶抑制率法快速檢測(cè)蔬菜、水果中高風(fēng)險(xiǎn)農(nóng)藥殘留，以腈菌唑、三唑磷、水胺硫磷、氟蟲(chóng)腈、百菌清5種農(nóng)藥為例。結(jié)果顯示，膠體金免疫層析法重復(fù)性好，有較高的特異性和靈敏度，檢出限可滿(mǎn)足GB 2763—2019中規(guī)定的最大殘留限量要求，無(wú)假陽(yáng)性、假陰性現(xiàn)象，相對(duì)準(zhǔn)確度較高。與現(xiàn)行有效的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 5009.199—2003中酶抑制率法相比，膠體金試紙條具有操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)速度快、受檢測(cè)環(huán)境溫度影響較小等特點(diǎn)，適用于對(duì)蔬菜、水果中農(nóng)藥殘留的現(xiàn)場(chǎng)篩查和檢測(cè)。

關(guān)鍵詞 膠體金免疫層析法;酶抑制率法;快速檢測(cè);果蔬;農(nóng)藥殘留

中圖分類(lèi)號(hào) TS207.5+3? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A? 文章編號(hào) 0517-6611（2021）04-0191-07

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.04.052

Study on Comparation of Colloidal Gold Immunochromatography Assay and Enzyme Inhibition Method on the Rapid Detection of Pesticide Residues in Vegetables and Fruits

DENG Jia-jun1，2， YANG Lin-fen1，2， ZHANG Fu-sheng1，2 et al

（1. Testing Center of Agro-product Quality and Safety of Jiangxi Province， Nanchang，Jiangxi 330046;2. Laboratory of Quality and Safety Risk Assessment for Agro-products of Ministry of Agriculture and Rural Affairs（Nanchang）， Nanchang，Jiangxi 330046）

Abstract Colloidal gold immunochromatography assay and enzyme inhibition methods were used to rapidly detect high risk pesticide residues in vegetables and fruits. Five pesticides including myclobutanil， triazophos， isocarbophos， fipronil and chlorothalonil were taken as examples.The results showed that the colloidal gold immunochromatography assay had better repeatability， higher specificity and higher sensitivity， and the detection limit could meet the maximum residue limit specified in GB 2763 - 2019. Furthermore， neither false-positive and false-negative test results were obtained using this assay， also relative accuracy was higher. Compared with enzyme inhibition method according to the current national standard GB/T 5009.199 - 2003，the colloidal gold immunochromatography assay had the characteristics of simple operation， fast detection， and was less affected by ambient temperature， and was suitable for on-site screening and detection of pesticide residues in vegetables and fruits.

Key words Colloidal gold immunochromatography assay;Enzyme inhibition method;Rapid detection;Vegetables and fruits;Pesticide residues

基金項(xiàng)目 江西省蔬菜質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估項(xiàng)目（30204003）。

作者簡(jiǎn)介 鄧家軍（1974—），男，江西南昌人，農(nóng)藝師，博士，從事農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)、污染生態(tài)修復(fù)等方面的研究。

通信作者，推廣研究員，從事農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全方面的研究。

收稿日期 2020-08-27

農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全事關(guān)人民群眾身體健康和生命安全，事關(guān)政府形象和社會(huì)穩(wěn)定，事關(guān)農(nóng)民增收和經(jīng)濟(jì)持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展[1-2]。由農(nóng)藥殘留引起的食品安全問(wèn)題越來(lái)越受到關(guān)注[3-7]?！吨泄仓醒雵?guó)務(wù)院關(guān)于深化改革加強(qiáng)食品安全工作的意見(jiàn)》（中發(fā)〔2019〕17號(hào)）及國(guó)務(wù)院食品安全委員會(huì)貫徹落實(shí)《中共中央 國(guó)務(wù)院關(guān)于深化改革加強(qiáng)食品安全工作的意見(jiàn)》有關(guān)政策措施的分工方案中明確指出，到2020年，農(nóng)產(chǎn)品和食品抽檢量達(dá)到4批次/千人。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部決定在全國(guó)試行食用農(nóng)產(chǎn)品合格證制度，也勢(shì)必會(huì)讓食用農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)者銷(xiāo)售食用農(nóng)產(chǎn)品時(shí)進(jìn)行自檢。目前食用農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留分析檢測(cè)技術(shù)常采用氣相色譜、液相色譜、色譜質(zhì)譜聯(lián)用等儀器設(shè)備，按照GB 23200.8、GB 23200.34、GB 23200.113、GB/T 5009.20、GB/T 5009.105、GB/T 20769、NY/T 761、NY/T 1379、NY/T 1455、SN/T 1982、SN/T 2320等標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)。這些方法雖然靈敏度和準(zhǔn)確度較高，但樣品前處理復(fù)雜，需要昂貴的儀器設(shè)備及專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員，不能滿(mǎn)足農(nóng)產(chǎn)品尤其是生鮮農(nóng)產(chǎn)品在政府監(jiān)管、生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)者自查等方面的龐大需求[8-10]，亟需一種易操作、快速和低成本的農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)。

農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)主要包括生物傳感器（酶?jìng)鞲衅鳌⒚庖邆鞲衅?、適配體傳感器、細(xì)胞傳感器）、光譜技術(shù)（近紅外光譜、太赫茲時(shí)域光譜、拉曼光譜等）與微流控技術(shù)[11]，各種快速檢測(cè)技術(shù)水平及產(chǎn)品性能參差不齊。現(xiàn)行有效地廣泛應(yīng)用于我國(guó)果蔬中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留的酶抑制率法快速檢測(cè)技術(shù)（GB/T 5009.199—2003）[12]，只能進(jìn)行大類(lèi)（有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)）檢測(cè)，且該方法的檢出限不能滿(mǎn)足《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量GB 2763—2019》[13]中規(guī)定的果蔬中農(nóng)藥最大殘留限量要求。該研究擬應(yīng)用酶抑制率快速檢測(cè)技術(shù)與膠體金免疫層析快速檢測(cè)技術(shù)，檢測(cè)果蔬（以圓白菜、蘋(píng)果為例）中5種高風(fēng)險(xiǎn)農(nóng)藥（腈菌唑、三唑磷、水胺硫磷、氟蟲(chóng)腈、百菌清）殘留（依據(jù)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部及省級(jí)例行監(jiān)測(cè)和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估等結(jié)果），從而篩選出靈敏度、特異性及相對(duì)準(zhǔn)確度等較高的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法。

1 材料與方法

1.1 試材 圓白菜、蘋(píng)果（南昌市超市）。腈菌唑、三唑磷、水胺硫磷、氟蟲(chóng)腈、百菌清5種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液（廣州化學(xué)試劑廠）。

1.2 儀器設(shè)備和產(chǎn)品

2000SBL 電子天平（美國(guó) Setra 公司）;722型分光光度計(jì)（上海高致精密儀器有限公司）;恒溫水浴箱（常州金壇恒豐儀器制造有限公司）。手持式食品安全分析儀及腈菌唑、三唑磷、水胺硫磷、氟蟲(chóng)腈、百菌清5種農(nóng)藥膠體金快速檢測(cè)試紙條（北京勤邦生物技術(shù)有限公司）;4種常見(jiàn)的酶抑制率法快速檢測(cè)試劑盒（產(chǎn)品1、產(chǎn)品2、產(chǎn)品3、產(chǎn)品4，市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)）。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 酶抑制率法。

1.3.1.1 檢測(cè)原理。

有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶的抑制率與農(nóng)藥濃度呈正相關(guān)。正常情況下，乙酰膽堿水解產(chǎn)物與顯示劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計(jì)在412 nm 處測(cè)定吸光度隨時(shí)間的變化值，計(jì)算出抑制率，根據(jù)抑制率可以判斷出樣品中有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥是否超標(biāo)。

1.3.1.2 檢測(cè)步驟。

運(yùn)用酶抑制率法快速檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品1、產(chǎn)品2、產(chǎn)品3、產(chǎn)品4對(duì)加標(biāo)有機(jī)蔬果樣品進(jìn)行快速檢測(cè)，具體操作步驟按GB/T5009.199—2003[12] 中的酶抑制率法進(jìn)行如下：

（1）樣品處理。

選取有機(jī)圓白菜（蘋(píng)果）（不使用農(nóng)藥）樣品500 g，擦去表面泥土，剪成1 cm左右碎片。取樣品1 g，放入提取瓶中，按照表1所示的濃度梯度在樣品提取瓶中添加農(nóng)藥三唑磷、水胺硫磷的標(biāo)準(zhǔn)溶液（酶抑制率法只能檢測(cè)有機(jī)磷和氨基甲酸酯），加入5 mL緩沖液，振蕩1～2 min，倒出提取液，靜置3～5 min，待用。每個(gè)梯度設(shè)3個(gè)平行。

（2）對(duì)照溶液測(cè)試。

先于試管中加入2.5 mL緩沖液，再加入0.1 mL酶液、0.1 mL顯色劑。搖勻后于37 ℃放置15 min以上（每批樣品的控制時(shí)間應(yīng)一致）。加入0.1 mL底物搖勻，檢液開(kāi)始顯色反應(yīng)時(shí)，立即放入儀器比色池中，記錄反應(yīng)3 min的吸光度的變化值ΔA0。

（3）樣品溶液測(cè)定。

先于試管中加入2.5 mL樣品提取液，其他操作與對(duì)照測(cè)定相同，記錄反應(yīng)3 min的吸光度的變化值ΔAt。

（4）結(jié)果計(jì)算。

抑制率=[（ΔA0-ΔAt）/ΔA0]×100%，

式中，ΔA0為對(duì)照液反應(yīng)3 min的吸光度的變化值;ΔAt為樣品溶液反應(yīng)3 min的吸光度的變化值。

（5）試驗(yàn)結(jié)果判斷。

當(dāng)果蔬樣品提取液對(duì)酶的抑制率大于50% 時(shí)，表示樣品中有高劑量的有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留，可判定樣品為陽(yáng)性結(jié)果。

1.3.2 膠體金免疫層析法。

1.3.2.1 檢測(cè)原理。

在膠體金競(jìng)爭(zhēng)法免疫層析中可以根據(jù)膠體金標(biāo)記對(duì)象的不同分成抗體金標(biāo)型和抗原金標(biāo)型。樣品液滴加到樣品墊上后，受毛細(xì)作用力向金標(biāo)墊層析，隨后膠體金標(biāo)記物復(fù)溶于溶液中并隨溶液一起向T線移動(dòng)。若樣品液中沒(méi)有被分析物，則膠體金標(biāo)記物與T 線上蛋白特異性結(jié)合形成線條，即陰性。若樣品中有被分析物，在抗體金標(biāo)型中，小分子物質(zhì)與T 線上的抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合膠體金上的抗體;在抗原金標(biāo)中，小分子物質(zhì)與膠體金上的抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合T 線上的抗體，2種情況都使得金標(biāo)記物不能與T 線上物質(zhì)結(jié)合，從而不能產(chǎn)生線條，即陽(yáng)性。試紙條由PVC 底板、樣品墊、金標(biāo)墊、NC 膜和吸水墊組成（圖1）。

1.3.2.2 檢測(cè)步驟。

選取有機(jī)圓白菜或蘋(píng)果（不使用農(nóng)藥）樣品500 g，將樣品擦去泥土（不可水洗），剪碎成小于1 cm見(jiàn)方的碎片或細(xì)碎小丁，裝入潔凈容器內(nèi)，密封并標(biāo)識(shí)。稱(chēng)取制備好的試樣于離心管中，按表2所示濃度梯度添加5種農(nóng)藥（腈菌唑、三唑磷、水胺硫磷、氟蟲(chóng)腈、百菌清）的標(biāo)準(zhǔn)溶液。加入適量0.02 mol/L磷酸緩沖液，手動(dòng)振蕩30 s，靜置1 min，上清液供測(cè)定用（稱(chēng)樣量和加入提取液的量根據(jù)檢測(cè)藥物不同會(huì)有所差異）。每個(gè)梯度設(shè)3個(gè)平行進(jìn)行試驗(yàn)。所有操作應(yīng)在室溫（20～25 ℃）進(jìn)行，殘留檢測(cè)試紙條應(yīng)回升至室溫（20～25 ℃）后方可使用。取殘留檢測(cè)試紙條（即開(kāi)即用）置于平整的臺(tái)面上，向樣品墊中加入100 μL待測(cè)樣品液，液體流動(dòng)后10 min觀察結(jié)果。同時(shí)進(jìn)行平行試驗(yàn)、空白試驗(yàn)、質(zhì)控試驗(yàn)。

陽(yáng)性：C線顯色，T線不顯色或T線顯色比C線顯色淺（圖2）;陰性：C線顯色，T線顯色與C線顯色相當(dāng)或比C線顯色深（圖3）;無(wú)效：C線不顯色（圖4）。如果觀察結(jié)果不能確定被檢測(cè)樣品是陽(yáng)性還是陰性時(shí)，可以把膠體金快速檢測(cè)試紙條放進(jìn)手持式食品安全分析儀中進(jìn)行確認(rèn)。

1.3.3 重復(fù)性。

測(cè)試基質(zhì)為圓白菜、蘋(píng)果，采用空白樣本、三唑磷、水胺硫磷添加濃度為 3 mg/kg 的加標(biāo)陽(yáng)性樣本進(jìn)行驗(yàn)證，分別用產(chǎn)品1、產(chǎn)品2、產(chǎn)品3、產(chǎn)品4及膠體金試紙條進(jìn)行檢測(cè)，每一水平3平行，計(jì)算 POD 值（檢出陽(yáng)性結(jié)果次數(shù)占所有檢測(cè)結(jié)果的比率）。

1.3.4 快速檢測(cè)方法評(píng)價(jià)指標(biāo)的計(jì)算。

根據(jù)《食品快速檢測(cè)方法評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》[14]計(jì)算靈敏度、特異性、假陰性、假陽(yáng)性及相對(duì)準(zhǔn)確度等指標(biāo)。

2 結(jié)果與分析

國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)、農(nóng)業(yè)農(nóng)村部和國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局聯(lián)合發(fā)布了《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763—2019）[13]，GB 2763—2019規(guī)定了腈菌唑、三唑磷、水胺硫磷、氟蟲(chóng)腈、百菌清5種農(nóng)藥在不同蔬菜、水果樣本中的殘留限量要求（表3）。由此可判斷酶抑制率法與膠體金免疫層析法檢測(cè)果蔬中農(nóng)藥殘留的檢出限差異。

2.1 酶抑制率法檢測(cè)果蔬中農(nóng)藥殘留

選擇在市場(chǎng)上應(yīng)用較為廣泛的4種基于酶抑制率法的快速檢測(cè)產(chǎn)品（產(chǎn)品1、產(chǎn)品2、產(chǎn)品3、產(chǎn)品4），用于檢測(cè)圓白菜、蘋(píng)果中三唑磷、水胺硫磷2種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留，產(chǎn)品1、產(chǎn)品2、產(chǎn)品3、產(chǎn)品4只能檢測(cè)5種農(nóng)藥中的三唑磷、水胺硫磷（表4～5）。

由表4可知，在圓白菜樣品中添加濃度0～5 mg/kg的三唑磷，產(chǎn)品3檢出限最低，為2 mg/kg，其次是產(chǎn)品1、產(chǎn)品2，均為3 mg/kg，檢出限最高的是產(chǎn)品4，高于5 mg/kg;在檢測(cè)27個(gè)圓白菜樣品中，靈敏度最高的是產(chǎn)品3，為91.7%，其次是產(chǎn)品1、產(chǎn)品2，分別為55.6%、22.2%，產(chǎn)品4在三唑磷添加濃度范圍內(nèi)沒(méi)有檢測(cè)出陽(yáng)性樣品，靈敏度最低;除了產(chǎn)品4沒(méi)有特異性之外，其他3種快速檢測(cè)產(chǎn)品都有100%的特異性;假陰性率最低的是產(chǎn)品3，為8.3%，其次是產(chǎn)品1、產(chǎn)品2，分別為44.4%、77.8%，產(chǎn)品1、產(chǎn)品2、產(chǎn)品3假陽(yáng)性率均為0，產(chǎn)品4在三唑磷添加濃度范圍內(nèi)沒(méi)有檢測(cè)出假陽(yáng)性及假陰性樣品;相對(duì)準(zhǔn)確度最高的為產(chǎn)品3，為96.3%，其次是產(chǎn)品1、產(chǎn)品2，分別為85.2%、74.1%，產(chǎn)品4在三唑磷添加濃度范圍內(nèi)沒(méi)有檢測(cè)出陽(yáng)性樣品，相對(duì)準(zhǔn)確度最低。

在蘋(píng)果樣品中添加濃度為0～5 mg/kg的三唑磷，產(chǎn)品3檢出限最低，為1 mg/kg，其次是產(chǎn)品1，為2 mg/kg，產(chǎn)品2和產(chǎn)品4的檢出限均高于5 mg/kg;在檢測(cè)27個(gè)蘋(píng)果樣品中，靈敏度最高的是產(chǎn)品3，為100%，其次是產(chǎn)品1，為91.7%，產(chǎn)品2和產(chǎn)品4在三唑磷添加濃度范圍內(nèi)均沒(méi)有檢測(cè)出陽(yáng)性樣品，靈敏度均低;除了產(chǎn)品2、產(chǎn)品4沒(méi)有特異性之外，其他2種快速檢測(cè)產(chǎn)品都有100%的特異性;產(chǎn)品3假陰性率為0，產(chǎn)品1的假陰性率為8.3%，產(chǎn)品2和產(chǎn)品4在三唑磷添加濃度范圍內(nèi)均沒(méi)有檢測(cè)出假陰性的結(jié)果;產(chǎn)品1和產(chǎn)品3的假陽(yáng)性率為0，產(chǎn)品2和產(chǎn)品4在三唑磷添加濃度范圍內(nèi)均沒(méi)有檢測(cè)出假陽(yáng)性的結(jié)果;產(chǎn)品3和產(chǎn)品1的相對(duì)準(zhǔn)確度分別為100%和96.3%，產(chǎn)品2和產(chǎn)品4無(wú)法確定相對(duì)準(zhǔn)確度。

由表5可知，在圓白菜樣品中添加濃度為0～5 mg/kg的水胺硫磷，產(chǎn)品3檢出限最低，為1 mg/kg，其次是產(chǎn)品1、產(chǎn)品2，均為3 mg/kg，檢出限最高的是產(chǎn)品4，高于5 mg/kg;在27個(gè)圓白菜樣品中，靈敏度最高的是產(chǎn)品3，為73.3%，其次是產(chǎn)品1、產(chǎn)品2，均為11.1%，產(chǎn)品4在水胺硫磷添加濃度范圍內(nèi)沒(méi)有檢測(cè)出陽(yáng)性樣品，靈敏度最低;除了產(chǎn)品4沒(méi)有特異性之外，其他3種快速檢測(cè)產(chǎn)品都有100%的特異性;假陰性率最低的是產(chǎn)品3，為26.7%，其次是產(chǎn)品1、產(chǎn)品2，均為88.9%;產(chǎn)品1、產(chǎn)品2、產(chǎn)品3的假陽(yáng)性率均為0，產(chǎn)品4在水胺硫磷添加濃度范圍內(nèi)沒(méi)有檢測(cè)出假陰性樣品和假陽(yáng)性樣品;相對(duì)準(zhǔn)確度最高的為產(chǎn)品3，為85.2%，其次是產(chǎn)品1、產(chǎn)品2，均為70.4%，產(chǎn)品4在水胺硫磷添加濃度范圍內(nèi)沒(méi)有檢測(cè)出陽(yáng)性樣品，相對(duì)準(zhǔn)確度最低。在蘋(píng)果樣品中添加濃度為0～5 mg/kg的水胺硫磷，產(chǎn)品3檢出限最低，為1 mg/kg，產(chǎn)品1、產(chǎn)品2和產(chǎn)品4檢出限均高于5 mg/kg;在27個(gè)蘋(píng)果樣品中，產(chǎn)品3靈敏度為46.7%，特異性為100%，假陰性率為53.3%，假陽(yáng)性率為0，相對(duì)準(zhǔn)確度為70.4%;產(chǎn)品1、產(chǎn)品2和產(chǎn)品4在水胺硫磷添加濃度范圍內(nèi)均沒(méi)有檢測(cè)出陽(yáng)性樣品，靈敏度均低，無(wú)檢測(cè)特異性，無(wú)法判斷假陰性、假陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果，也無(wú)法計(jì)算相對(duì)準(zhǔn)確度。

由表3～5可知，4種基于酶抑制率法的快速檢測(cè)產(chǎn)品（產(chǎn)品1、產(chǎn)品2、產(chǎn)品3、產(chǎn)品4）均不能滿(mǎn)足GB 2763—2019中規(guī)定的果蔬中三唑磷（最大殘留限量0.1～0.2 mg/kg）、水胺硫磷（最大殘留限量0.02～0.05 mg/kg）最大殘留限量的要求。

2.2 膠體金免疫層析法檢測(cè)果蔬中農(nóng)藥殘留

膠體金免疫層析法檢測(cè)果蔬中的腈菌唑、三唑磷、水胺硫磷、氟蟲(chóng)腈、百菌清5種農(nóng)藥殘留，檢測(cè)結(jié)果如表6所示，在圓白菜和蘋(píng)果中腈菌唑、三唑磷、水胺硫磷、氟蟲(chóng)腈、百菌清5種農(nóng)藥殘留檢出限分別為0.10、0.10、0.05、0.02、0.20 mg/kg。在樣品總數(shù)均為27個(gè)的圓白菜、蘋(píng)果樣品中，在5種農(nóng)藥添加濃度范圍內(nèi)，靈敏度、特異性均為100%，沒(méi)有假陰性、假陽(yáng)性現(xiàn)象，相對(duì)準(zhǔn)確度均為100%。

由表3和表6可知，膠體金免疫層析法檢測(cè)果蔬中的腈菌唑、三唑磷、水胺硫磷、氟蟲(chóng)腈、百菌清5種農(nóng)藥殘留均能夠滿(mǎn)足GB 2763—2019中規(guī)定的這5種農(nóng)藥在果蔬中最大殘留限量的要求。

2.3 2種方法快速檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥殘留重復(fù)性

分別用產(chǎn)品1、產(chǎn)品2、產(chǎn)品3、產(chǎn)品4及膠體金試紙條測(cè)試圓白菜、蘋(píng)果的空白樣本、三唑磷和水胺硫磷添加濃度為 3 mg/kg 的加標(biāo)陽(yáng)性樣本，每一水平3平行，POD 值如表7所示。結(jié)果顯示，酶抑制率法的4種產(chǎn)品檢測(cè)空白樣品的重復(fù)性均無(wú)異常。產(chǎn)品1檢測(cè)圓白菜中的三唑磷、水胺硫磷時(shí)重復(fù)性不好，檢測(cè)蘋(píng)果樣品中水胺硫磷時(shí)靈敏度不夠，沒(méi)檢出陽(yáng)性樣品。產(chǎn)品2檢測(cè)圓白菜中的三唑磷、水胺硫磷時(shí)重復(fù)性不好，檢測(cè)蘋(píng)果中的三唑磷、水胺硫磷時(shí)靈敏度不夠，沒(méi)檢出陽(yáng)性樣品。產(chǎn)品3檢測(cè)圓白菜中的三唑磷、水胺硫磷時(shí)重復(fù)性較好，但檢測(cè)蘋(píng)果樣品中水胺硫磷時(shí)重復(fù)性不好。產(chǎn)品4的靈敏度不夠，沒(méi)檢出陽(yáng)性樣品。膠體金試紙條檢測(cè)圓白菜、蘋(píng)果的空白樣本、三唑磷、水胺硫磷加標(biāo)樣本時(shí)重復(fù)性均無(wú)異常。

2.4 2種方法快速檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥殘留檢出限

酶抑制率法與膠體金免疫層析法快速檢測(cè)水胺硫磷、三唑磷2種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留檢出限見(jiàn)表8。結(jié)果顯示，膠體金免疫層析法檢測(cè)圓白菜和蘋(píng)果中水胺硫磷的檢出限均為0.05 mg/kg，是酶抑制率法檢測(cè)圓白菜和蘋(píng)果中水胺硫磷的最低檢出限1 mg/kg（最高檢出限5 mg/kg）的20倍（100倍以上），膠體金免疫層析法檢測(cè)圓白菜和蘋(píng)果中三唑磷的檢出限均為0.10 mg/kg，是酶抑制率法檢測(cè)圓白菜（蘋(píng)果）中三唑磷的最低檢出限2 mg/kg（1 mg/kg）的20倍（10倍），是酶抑制率法檢測(cè)圓白菜（蘋(píng)果）中三唑磷的最高檢出限（>5 mg/kg）的50倍。

2.5 2種方法快速檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥殘留靈敏度

運(yùn)用膠體金免疫層析法（膠體金試紙條）與酶抑制率法（產(chǎn)品1、產(chǎn)品2、產(chǎn)品3、產(chǎn)品4）的快速檢測(cè)產(chǎn)品檢測(cè)圓白菜、蘋(píng)果中2種有機(jī)磷農(nóng)藥（水胺硫磷、三唑磷）殘留，在添加濃度范圍內(nèi)方法靈敏度如表9所示。膠體金免疫層析法檢測(cè)圓白菜、蘋(píng)果樣品中水胺硫磷、三唑磷的靈敏度均為100%，其次是產(chǎn)品3、產(chǎn)品1、產(chǎn)品2，產(chǎn)品4的檢測(cè)限高于添加濃度5 mg/kg，沒(méi)有陽(yáng)性結(jié)果的樣品，靈敏度最低。

2.6 2種方法快速檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥殘留特異性

酶抑制率法與膠體金免疫層析法快速檢測(cè)水胺硫磷、三唑磷2種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留特異性見(jiàn)表10。結(jié)果顯示，酶抑制率法的產(chǎn)品3檢測(cè)圓白菜、蘋(píng)果中2種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留特異性均為100%;產(chǎn)品1在檢測(cè)圓白菜中2種有機(jī)磷農(nóng)藥時(shí)特異性均為100%，檢測(cè)蘋(píng)果中水胺硫磷時(shí)，特異性無(wú)法確定;產(chǎn)品2在檢測(cè)圓白菜中2種有機(jī)磷農(nóng)藥時(shí)特異性均為100%，檢測(cè)蘋(píng)果中2種有機(jī)磷農(nóng)藥時(shí)特異性無(wú)法確定;產(chǎn)品4在檢測(cè)圓白菜、蘋(píng)果中2種有機(jī)磷農(nóng)藥時(shí)特異性均為無(wú)法確定。膠體金免疫層析法檢測(cè)圓白菜、蘋(píng)果中2種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留特異性均為100%。

2.7 2種方法快速檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥殘留假陰性

酶抑制率法與膠體金免疫層析法快速檢測(cè)水胺硫磷、三唑磷2種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留假陰性見(jiàn)表11。結(jié)果顯示，酶抑制率法的產(chǎn)品1、產(chǎn)品2、產(chǎn)品3在檢測(cè)圓白菜、蘋(píng)果中2種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留時(shí)均有不同程度的假陰性現(xiàn)象，產(chǎn)品4不能確定陽(yáng)性樣品數(shù)，因此不能確定假陰性。膠體金免疫層析法檢測(cè)圓白菜、蘋(píng)果中2種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留時(shí)均無(wú)假陰性現(xiàn)象。

2.8 2種方法快速檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥殘留假陽(yáng)性

酶抑制率法與膠體金免疫層析法快速檢測(cè)水胺硫磷、三唑磷2種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留假陰性見(jiàn)表12。結(jié)果顯示，酶抑制率法的產(chǎn)品3在檢測(cè)圓白菜、蘋(píng)果中2種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留時(shí)均無(wú)假陽(yáng)性現(xiàn)象，產(chǎn)品1、產(chǎn)品2均有不同程度的假陽(yáng)性現(xiàn)象，產(chǎn)品4不能確定假陽(yáng)性。膠體金免疫層析法檢測(cè)圓白菜、蘋(píng)果中2種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留時(shí)均無(wú)假陽(yáng)性現(xiàn)象。

2.9 2種方法快速檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥殘留相對(duì)準(zhǔn)確度

酶抑制率法與膠體金免疫層析法快速檢測(cè)水胺硫磷、三唑磷2種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留相對(duì)準(zhǔn)確度見(jiàn)表13。結(jié)果顯示，酶抑制率法的產(chǎn)品3在檢測(cè)圓白菜、蘋(píng)果中2種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留時(shí)相對(duì)準(zhǔn)確度在70.4%～100%，產(chǎn)品1、產(chǎn)品2次之，產(chǎn)品4無(wú)法確定相對(duì)準(zhǔn)確度。膠體金免疫層析法檢測(cè)圓白菜、蘋(píng)果中2種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留時(shí)相對(duì)準(zhǔn)確度均為100%。

2.10 酶抑制率法與膠體金免疫層析法比較

基于酶抑制率法農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)的GB/T 5009.199—2003標(biāo)準(zhǔn)自2004年1月1日實(shí)施以來(lái)，廣泛應(yīng)用于我國(guó)蔬菜中農(nóng)藥殘留現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)上。但酶抑制率法測(cè)定樣品僅限于蔬菜（實(shí)際也用于水果檢測(cè)），只能進(jìn)行大類(lèi)檢測(cè)（有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)），針對(duì)性不強(qiáng)，不易暴露風(fēng)險(xiǎn);檢測(cè)結(jié)果易受檢測(cè)環(huán)境溫度影響;操作較復(fù)雜;不同產(chǎn)品的重復(fù)性存在較大差異;檢出限不能滿(mǎn)足GB 2763—2019中規(guī)定的最大殘留限量要求[15-17];不同產(chǎn)品的靈敏度、特異性存在較大差異，存在假陽(yáng)性、假陰性現(xiàn)象，相對(duì)準(zhǔn)確度總體不高（表14）。膠體金免疫層析法能進(jìn)行單項(xiàng)檢測(cè)，針對(duì)性強(qiáng)，易暴露風(fēng)險(xiǎn);檢測(cè)時(shí)間僅需12 min，比酶抑制率法（25 min）快1倍;能在室溫下檢測(cè)，受檢測(cè)環(huán)境溫度影響較小;操作簡(jiǎn)單;產(chǎn)品重復(fù)性好，能滿(mǎn)足GB 2763—2019中規(guī)定的最大殘留限量要求;可作為半定量檢測(cè)方法應(yīng)用于篩查檢測(cè)[18];產(chǎn)品靈敏度高、特異性好，無(wú)假陰性、假陽(yáng)性現(xiàn)象，相對(duì)準(zhǔn)確度為100%（表14）。

3 結(jié)論與討論

3.1 酶抑制率法

該方法只能進(jìn)行有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)檢測(cè)，不易暴露風(fēng)險(xiǎn)。不同產(chǎn)品的靈敏度、特異性存在較大差異，存在假陽(yáng)性、假陰性現(xiàn)象，相對(duì)準(zhǔn)確度總體不高。此外，穩(wěn)定性、重復(fù)性較差，而且檢出限遠(yuǎn)高于GB 2763—2019中規(guī)定的食品中農(nóng)藥最大殘留限量的要求，作為快速篩查農(nóng)藥殘留方法沒(méi)有實(shí)在意義。

3.2 膠體金免疫層析法

作為一種快速篩查手段，與酶抑制率法（GB/T 5009.199—2003標(biāo)準(zhǔn)）相比，該方法能進(jìn)行單項(xiàng)檢測(cè)，針對(duì)性強(qiáng)，易暴露風(fēng)險(xiǎn)。該方法穩(wěn)定性好、靈敏度高，無(wú)假陽(yáng)性和假陰性現(xiàn)象，相對(duì)準(zhǔn)確度高。此外，該方法檢出限能滿(mǎn)足GB 2763—2019中規(guī)定的食品中農(nóng)藥最大殘留限量等特點(diǎn)，可配合“食用農(nóng)產(chǎn)品合格證制度”實(shí)施，廣泛用于果蔬生產(chǎn)者自檢以及農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)、餐飲單位、超市等對(duì)果蔬的進(jìn)貨把關(guān)，為基層監(jiān)管部門(mén)現(xiàn)場(chǎng)抽檢篩查提供快速檢測(cè)服務(wù)，能夠很好地解決當(dāng)前實(shí)驗(yàn)室定量檢測(cè)力量達(dá)不到農(nóng)產(chǎn)品和食品抽檢量（4批次/千人）監(jiān)測(cè)需求的問(wèn)題。

酶抑制率法Enzyme inhibition rate method大類(lèi)檢測(cè)（有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)），不易暴露風(fēng)險(xiǎn)2537 ℃，易受檢測(cè)環(huán)境溫度影響不能滿(mǎn)足GB 2763—2019中規(guī)定的最大殘留限量要求操作較復(fù)雜，需要專(zhuān)業(yè)水平不同產(chǎn)品檢測(cè)不同樣品陽(yáng)性結(jié)果的重復(fù)性存在較大差異不同產(chǎn)品的靈敏度、特異性存在較大差異，存在假陽(yáng)性假陰性現(xiàn)象，相對(duì)準(zhǔn)確度總體不高

膠體金免疫層析法Colloidal gold immunochromatography method單項(xiàng)檢測(cè)，針對(duì)性強(qiáng)，易暴露風(fēng)險(xiǎn)1220～25 ℃，受檢測(cè)環(huán)境溫度影響較小可滿(mǎn)足GB 2763—2019中規(guī)定的最大殘留限量要求易操作，技術(shù)要求低 重復(fù)性100% 靈敏度高、特異性好，無(wú)假陰性、假陽(yáng)性現(xiàn)象，相對(duì)準(zhǔn)確度為100%

農(nóng)藥快速檢測(cè)技術(shù)與其他新技術(shù)結(jié)合，實(shí)現(xiàn)高靈敏度、選擇性和穩(wěn)定性，快速化、集成化和微型化，是農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)的未來(lái)發(fā)展方向。膠體金快速檢測(cè)試紙條已經(jīng)向同一試紙條能檢測(cè)多種農(nóng)藥殘留方面發(fā)展，目前已有這方面報(bào)道[19-22]。此外，酶抑制法國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 5009.199—2003作為目前農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)的主流技術(shù)，應(yīng)當(dāng)盡快修改，為農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全提供可靠保障。

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