卵巢癌中IGF-1/IGF-1R軸與臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性

朱冰 白杰 牛愛琴

卵巢癌是臨床常見的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，發(fā)病率不斷升高，但因為早期缺乏典型的臨床癥狀及體征，疾病的早期診斷率較低［1］。在臨床實踐中，多數(shù)卵巢癌患者確診時已為中晚期，錯過了根治性手術(shù)的時機(jī)。卵巢癌的治療主要采用細(xì)胞減滅術(shù)聯(lián)合輔助化療，但復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率高，整體預(yù)后較差。近些年，越來越多的學(xué)者開始關(guān)注卵巢癌的發(fā)病機(jī)制，發(fā)現(xiàn)在卵巢癌發(fā)病中其關(guān)鍵作用的分子有助于發(fā)現(xiàn)新的治療靶點。胰島素樣生長因子（insulin like growth factor-1，IGF-1）是具有廣泛促生長作用的細(xì)胞因子，與受體IGF-1R 結(jié)合后促進(jìn)細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲。卵巢癌相關(guān)的基礎(chǔ)研究證實，IGF-1 對卵巢癌的增殖、遷移及侵襲具有顯著促進(jìn)作用［2］；IGF-1R 抑制劑對卵巢癌細(xì)胞的增殖具有抑制作用，對細(xì)胞凋亡有促進(jìn)作用［3］。為了闡明IGF-1 及IGF-1R 在卵巢癌發(fā)病中的作用，本研究將探究IGF-及IGF-1R 與臨床病理特征、手術(shù)預(yù)后的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇2015年3月至2017年12月期間本院婦產(chǎn)科手術(shù)切除的卵巢癌組織（70例）、卵巢良性腫瘤組織35例，包括漿液性囊腺瘤22例、粘液性囊腺瘤13例，均經(jīng)術(shù)后病理明確診斷、正常卵巢組織（55例）作為本研究的臨床樣本取自接受全子宮+卵巢切除術(shù)的子宮肌瘤患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)均經(jīng)術(shù)后病理明確診斷；②臨床病理資料完整；③組織樣本充足。排除標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)前接受過放化療；②既往有其他惡性腫瘤病史。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，取得患者知情同意。

1.2 試劑

SP 二步法免疫組化試劑盒（SP-9001）為北京中杉金橋公司，IGF-1、IGF-1R 及β-actin 一抗為Abcam 公司，石蠟包埋組織RNA 提取試劑盒（AB209）為北京艾比根公司，cDNA 第一鏈合成試劑盒、熒光定量檢測試劑盒為北京天根公司，IGF-1、IGF-1R 及β-actin 特異性引物為上海生工公司。

1.3 IGF-1、IGF-1R 表達(dá)的免疫組化檢測

取石蠟包埋的卵巢癌組織、卵巢良性腫瘤組織、正常卵巢組織，制作病理切片，采用試劑盒進(jìn)行免疫組化染色，分別使用IGF-1、IGF-1R 的一抗，染色完成后在顯微鏡隨機(jī)觀察5 個視野，參照文獻(xiàn)［4］對染色強(qiáng)度進(jìn)行評估、對陽性染色細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)。無染色、淡黃色、棕黃色、棕褐色依次記為0分、1 分、2 分、3 分；陽性染色細(xì)胞比例0%～10%、10%～25%、25%～50%、50%～75%、＞75%依次記為0、1、2、3、4 分。染色強(qiáng)度評分與陽性染色細(xì)胞比例評分相加，0～3 分為陰性表達(dá)、4～7 分為陽性表達(dá)。

1.4 IGF-1、IGF-1R 表達(dá)水平檢測

取石蠟包埋的卵巢癌組織、卵巢良性腫瘤組織、正常卵巢組織，采用試劑盒提取組織中的RNA，采用cDNA 第一鏈合成試劑盒將RNA 反轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用熒光定量檢測試劑盒進(jìn)行熒光定量PCR 反應(yīng)，分別使用IGF-1、IGF-1R 及β-actin 特異性引物，得到相應(yīng)的反應(yīng)曲線及循環(huán)閾值（Ct），以β-actin 為內(nèi)參、代入公式2-ΔΔCt計算IGF-1 及IGF-1R的mRNA 表達(dá)水平。

1.5 卵巢癌患者手術(shù)預(yù)后的隨訪

采用門診復(fù)診、電話回訪等方式進(jìn)行術(shù)后隨訪，隨訪截止日期2020年6月30日，病理確診日期至死亡日期或隨訪截止日期為總生存期。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 21.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析；計數(shù)資料以n（%）表示、組間比較采用χ2檢驗；計量資料經(jīng)正態(tài)性檢驗、符合正態(tài)分布后以（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用方差分析、兩兩比較采用LSD-t 檢驗；總生存期采用Kalpan-Meier 生存曲線描述并進(jìn)行Log rank 檢驗。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤組織、卵巢癌組織中IGF-1 和IGF-1R 表達(dá)水平的比較

卵巢癌組織中IGF-1、IGF-1R 的陽性表達(dá)率及mRNA 表達(dá)水平均明顯高于卵巢良性腫瘤組織、正常卵巢組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；卵巢良性腫瘤組織與正常卵巢組織中IGF-1、IGF-1R 陽性表達(dá)率及mRNA 表達(dá)水平的比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見圖1、圖2、表1。

2.3 不同臨床病理特征卵巢癌組織中IGF-1、IGF-1R 表達(dá)水平的比較

不同年齡、月經(jīng)狀態(tài)、病理類型卵巢癌組織中IGF-1、IGF-1R陽性率的比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；FIGO Ⅲ～Ⅳ期卵巢癌組織中IGF-1、IGF-1R的陽性率高于Ⅰ～Ⅱ期卵巢癌組織，組織學(xué)分級G2-G3卵巢癌組織中IGF-1、IGF-1R 的陽性率高于G1 卵巢癌組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

圖1 各組組織IGF-1 的免疫組化染色（SP，×400）Figure 1 Immunohistochemical staining of IGF-1between of different groups（SP，×400）

圖2 兩組組織中IGF-1R 的免疫組化染色（SP，×400）Figure 2 Immunohistochemical staining of IGF-1Rbetween of 2 groups（SP，×400）

2.4 IGF-1 陽性表達(dá)與陰性表達(dá)卵巢癌患者手術(shù)預(yù)后的比較

與卵巢癌中IGF-1、IGF-1R 陰性表達(dá)的患者比較，IGF-1、IGF-1R 陽性表達(dá)患者的總生存期明顯縮短，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見圖3。

圖3 不同IGF-1、IGF-1R表達(dá)的卵巢癌患者手術(shù)預(yù)后的比較Figure 3 Comparison of surgical prognosis of ovarian cancer patients with different IGF-1，IGF-1R expression

表1 各組織中IGF-1、IGF-1R 表達(dá)水平的比較［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of IGF-1 and IGF-1R expression levels between of different groupss［n（%），（±s）］

表1 各組織中IGF-1、IGF-1R 表達(dá)水平的比較［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of IGF-1 and IGF-1R expression levels between of different groupss［n（%），（±s）］

注：與正常卵巢組織比較，aP＜0.05；與良性卵巢腫瘤組織比較，bP＜0.05

組織來源卵巢癌良性卵巢腫瘤正常卵巢χ2/F 值P 值n 70 35 55 IGF-1 陽性率55（78.57）14（40.00）19（34.55）15.408 0.000 IGF-1R 陽性率52（74.29）12（34.29）17（30.91）24.209 0.000 IGF-1 mRNA 表達(dá)水平2.01±0.32ab 1.09±0.19 1.00±0.23 29.598 0.000 IGF-1R mRNA 表達(dá)水平2.32±0.46ab 1.10±0.28 1.00±0.29 34.572 0.000

表2 不同臨床病理特征卵巢癌組織中IGF-1、IGF-1R 表達(dá)水平的比較［n（%）］Table 2 Comparison of IGF-1 and IGF-1R expression levels in ovarian cancer tissues with different clinicopathological characteristics［n（%）］

3 討論

IGF-1 是具有廣泛生物學(xué)作用的細(xì)胞因子，與其受體IGF-1R 結(jié)合后促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)PI3K/AKT、MAPK 等信號通路激活，進(jìn)而在多種惡性腫瘤的發(fā)病中起促癌作用。已有研究發(fā)現(xiàn)，肝癌、胰腺癌、鼻咽癌中IGF-1 及IGF-1R 的表達(dá)均明顯增加［5-7］。國內(nèi)薛景戈的研究采用免疫組化檢測了卵巢癌中IGF-1 的表達(dá)并發(fā)現(xiàn)IGF-1 的陽性率明顯升高［4］；國外Puvanenthiran S 的研究采用免疫組化檢測了卵巢癌中IGF-1R 的表達(dá)并發(fā)現(xiàn)IGF-1R 的陽性率明顯升高［8］。本研究采用免疫組化及熒光定量PCR 兩種實驗方法檢測了卵巢癌組織中IGF-1 及IGF-1R 表達(dá)的變化，與卵巢良性組織及正常卵巢組織比較，卵巢癌中IGF-1 及IGF-1R 的陽性率及mRNA 表達(dá)水平均明顯增加，與國內(nèi)外已經(jīng)報道卵巢癌中IGF-1 及IGF-1R 表達(dá)增加的結(jié)果一致，表明IGF-1/IGF-1R 軸的高表達(dá)參與卵巢癌的發(fā)病。

多項惡性腫瘤中IGF-1 及IGF-1R 相關(guān)的基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)，IGF-1 對卵巢癌［7］、口腔癌［9］、胰腺癌［10］等腫瘤細(xì)胞的增殖具有促進(jìn)作用、對細(xì)胞凋亡有抑制作用，IGF-1R 抑制劑或敲低IGF-1R 對卵巢癌［3］、乳腺癌［11］、結(jié)腸癌［12］等腫瘤細(xì)胞的增殖及遷移具有抑制作用。癌細(xì)胞異常的增殖、遷移、侵襲在卵巢癌的病理進(jìn)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。本研究在發(fā)現(xiàn)卵巢癌中IGF-1、IGF-1R 表達(dá)增加后，進(jìn)一步分析了IGF-1/IGF-1R 與卵巢癌病理特征的關(guān)系，結(jié)果顯示：隨著FIGO 分期及組織學(xué)分級增加，卵巢癌中IGF-1、IGF-1R 的陽性率均呈升高趨勢，表明IGF-1、IGF-1R 的高表達(dá)與卵巢癌分期及組織學(xué)分級的增加有關(guān)，與之相關(guān)的分子機(jī)制可能是高表達(dá)的IGF-1/IGF-1R 促進(jìn)了卵巢癌細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲，進(jìn)而促進(jìn)了卵巢癌的病理進(jìn)程。

目前，卵巢癌患者的整體預(yù)后并不理想，復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是影響卵巢癌預(yù)后的重要原因。國內(nèi)多項關(guān)于卵巢癌預(yù)后因素的臨床研究認(rèn)為，F(xiàn)IGO 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移兩項病理特征是預(yù)后的影響因素［13-16］。本研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)卵巢癌中IGF-1、IGF-1R表達(dá)增加且與FIGO 分期、組織學(xué)分級兩項病理特征相關(guān)，在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步分析IGF-1、IGF-1R 與預(yù)后的關(guān)系。Ben Elhadj M［6］和Zhang Z［4］的研究分別在喉癌和肝癌中觀察到IGF-1、IGF-1R 高表達(dá)與患者預(yù)后不良有關(guān)。本研究在手術(shù)后對卵巢癌患者的總生存期進(jìn)行隨訪及分析，結(jié)果表明IGF-1及IGF-1R 表達(dá)增加會造成卵巢癌患者的總生存期縮短。這一結(jié)果與IGF-1、IGF-1R 陽性表達(dá)與病理特征惡化的結(jié)果吻合，也與IGF-1、IGF-1R 在其他惡性腫瘤中影響預(yù)后的結(jié)果一致。

綜上所述，卵巢癌中IGF-1 及IGF-1R 高表達(dá)與病理特征惡化、手術(shù)后總生存期縮短有關(guān)，今后IGF-1/IGF-1R 軸有望成為研究卵巢癌發(fā)病機(jī)制、發(fā)現(xiàn)卵巢癌新治療手段的靶點，但I(xiàn)GF-1/IGF-1R 在卵巢癌發(fā)病中的作用及機(jī)制仍有待更多的臨床和基礎(chǔ)研究來證實。