采用免疫透射比濁法對(duì)疑似肝腎疾病患者進(jìn)行血清視黃醇結(jié)合蛋白檢測(cè)的意義

劉志偉，陳書(shū)恩★，吳小花

（1.深圳市羅湖醫(yī)院集團(tuán)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心，廣東 深圳 518021;2. 深圳市羅湖區(qū)婦幼保健院檢驗(yàn)科，廣東 深圳 518021）

臨床上常見(jiàn)的肝腎疾病有肝炎、肝硬化、肝癌、腎小球腎炎、糖尿病腎病、腎功能衰竭等。有研究資料顯示，采用免疫透射比濁法對(duì)疑似肝腎疾病患者進(jìn)行血清RBP 檢測(cè)診斷其病情的準(zhǔn)確率較高[1]。在本次研究中，筆者主要探討采用免疫透射比濁法對(duì)疑似肝腎疾病患者進(jìn)行RBP 檢測(cè)的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究對(duì)象是2019 年7 月至11 月期間某醫(yī)院收治的50 例肝病患者、50 例腎病患者及在該院進(jìn)行體檢的50例健康人。將50 例肝病患者設(shè)為A 組。將50 例腎病患者設(shè)為B 組。將50 例健康人設(shè)為C 組。在A 組研究對(duì)象中，男女的比例為30:20 ；其年齡為27 ～81 歲，平均年齡為（54.15±6.23）歲；其中有25 例急性肝炎患者，有17 例肝硬化患者，有8 例肝癌患者。在B 組研究對(duì)象中，男女的比例是27:23 ；其年齡為27 ～80 歲，平均年齡為（53.84±6.20）歲；其中有24 例腎小球腎炎患者，有16 例糖尿病腎病患者，有10 例腎功能衰竭患者。在C 組研究對(duì)象中，男女的比例為28:22 ；其年齡為25 ～81 歲，平均年齡為（53.58±6.19）歲。三組研究對(duì)象的一般資料相比，P ＞0.05，具有可比性。

1.2 方法

1）采用免疫透射比濁法對(duì)三組研究對(duì)象進(jìn)行血清RBP檢測(cè)，方法為：檢測(cè)使用的儀器為全自動(dòng)生化檢測(cè)儀。在清晨采集研究對(duì)象的空腹靜脈血4 ml 作為樣本。將研究對(duì)象的靜脈血進(jìn)行離心后獲取4 μl 的血清。在血清樣本中添加240 μl 的試劑A1（由廠家提供），然后放置在37℃的環(huán)境下進(jìn)行孵育，連續(xù)孵育16 個(gè)循環(huán)，并讀出第一點(diǎn)吸光值B1。然后，在血清樣本中添加50 μl 的試劑A2（由廠家提供），在37℃的環(huán)境下進(jìn)行孵育，連續(xù)孵育16 個(gè)循環(huán)，并讀出第二點(diǎn)吸光值B2。待測(cè)血清的吸光值B=B2-B1。血清RBP 的水平= 〔（B2-B1）/ 校準(zhǔn)品吸光值〕 ×RBP 校準(zhǔn)濃度。2）進(jìn)行空白試驗(yàn)的方法為：將濃度為0.9% 的生理鹽水作為樣本，按照上述檢測(cè)方法連續(xù)檢測(cè)三次，并計(jì)算樣本的吸光值。3）進(jìn)行精密度試驗(yàn)的方法為：根據(jù)美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）規(guī)定，分別取低、中、高三個(gè)濃度的血清樣本，按照上述檢測(cè)方法重復(fù)檢測(cè)20 次，連續(xù)檢測(cè)20 d。4）進(jìn)行回收試驗(yàn)的方法為：獲取新鮮血清一份，分別添加三個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品（由廠家提供），然后按照上述測(cè)定方法對(duì)標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行測(cè)定。5）進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)的方法為：在第0 d、第5 d、第10 d、第20 d、第30 d，對(duì)各項(xiàng)參數(shù)均相同的樣本進(jìn)行RBP 測(cè)定。檢測(cè)時(shí)，分別在2 ～8℃開(kāi)瓶放置樣本，在2 ～8℃閉瓶放置樣本，在37℃熱破壞樣本的穩(wěn)定性（在第一次校準(zhǔn)儀器后對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)時(shí)不再進(jìn)行儀器校準(zhǔn)，直至檢測(cè)失控）。每天檢測(cè)結(jié)束后，及時(shí)為樣本擰緊瓶蓋，將樣本密封保存。6）進(jìn)行干擾性試驗(yàn)的方法為：選取濃度已知的樣本，加入三種不同濃度的膽紅素、三酰甘油、血紅蛋白，然后對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè)，觀察檢測(cè)的結(jié)果是否受到干擾。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

對(duì)本次研究中的數(shù)據(jù)均采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（± s ）表示，采用t 檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用百分比（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P ＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組研究對(duì)象血清RBP 的水平

B 組研究對(duì)象血清RBP 的水平高于C 組研究對(duì)象，C組研究對(duì)象血清RBP 的水平高于A 組研究對(duì)象，P ＜0.05。詳見(jiàn)表1。

表1 三組研究對(duì)象血清RBP 的水平（mg/L，± s ）

表1 三組研究對(duì)象血清RBP 的水平（mg/L，± s ）

C 組 50 50.11±12.79 A 組 50 21.91±9.72急性肝炎患者 25 25.76±9.21肝硬化患者 17 20.17±9.08肝癌患者 8 19.81±10.87 B 組 50 90.58±19.44腎小球腎炎患者 24 88.67±19.54糖尿病腎病患者 16 94.78±20.13腎功能衰竭患者 10 88.28±18.65

2.2 進(jìn)行精密度試驗(yàn)的結(jié)果

進(jìn)行精密度試驗(yàn)的結(jié)果顯示，不同濃度血清樣本的精密度相比，P ＜0.05。詳見(jiàn)表2。

表2 進(jìn)行精密度試驗(yàn)的結(jié)果

2.3 進(jìn)行回收試驗(yàn)的結(jié)果

進(jìn)行回收試驗(yàn)的結(jié)果顯示，三個(gè)不同濃度樣本的回收濃度及回收率相比，P ＜0.05。詳見(jiàn)表3。

表3 進(jìn)行回收試驗(yàn)的結(jié)果

2.4 進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)的結(jié)果

進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)的結(jié)果顯示，本次研究使用的試劑具有較好的穩(wěn)定性。詳見(jiàn)表4。

表4 進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)的結(jié)果

2.5 進(jìn)行干擾試驗(yàn)的結(jié)果

進(jìn)行干擾試驗(yàn)的結(jié)果顯示，對(duì)樣本進(jìn)行血清RBP 檢測(cè)時(shí)，樣本中的血紅蛋白≤4 g/L、三酰甘油≤10 mmol/L 及膽紅素≤420 μmol/L 對(duì)檢測(cè)結(jié)果無(wú)干擾。

3 討論

血清RBP 是維生素A 的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。血清RBP 可與甲狀腺素結(jié)合前白蛋白形成復(fù)合物[2-3]。健康人體內(nèi)多余的RBP 可被腎臟代謝。但腎病患者體內(nèi)多余的RBP 則不能被腎臟代謝完全。因此，血清RBP 的水平是評(píng)估腎病患者病情的重要指標(biāo)之一[4]。有研究資料顯示，肝病患者血清RBP 的水平可出現(xiàn)下降。因此，血清RBP 的水平可作為評(píng)估肝病患者病情的指標(biāo)之一。目前，臨床檢測(cè)血清RBP的方法包括免疫透射比濁法、放射免疫分析法、酶聯(lián)免疫法、免疫電泳等[5]。其中免疫透射比濁法是臨床上檢測(cè)血清RBP 的主要方法。采用免疫透射比濁法測(cè)定樣本時(shí)通過(guò)測(cè)定樣本的濁度與一系列標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行對(duì)照，即可計(jì)算出樣本中抗原的含量[6]。有研究資料顯示，采用免疫透射比濁法測(cè)定血清RBP 具有操作簡(jiǎn)單、安全性高、對(duì)檢測(cè)設(shè)備的要求比較低、環(huán)保、檢測(cè)結(jié)果比較準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)[7]。但有研究指出，采用免疫透射比濁法檢測(cè)血清RBP 時(shí)對(duì)抗體的純度及特異性有較高的要求[8]。

本次研究的結(jié)果證實(shí)，采用免疫透射比濁法對(duì)肝腎疾病患者進(jìn)行血清RBP 檢測(cè)可準(zhǔn)確診斷其病情。