酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)T-SPOT.TB在艾滋病合并結(jié)核感染中應(yīng)用的診斷價(jià)值分析

黃麗靜，李錫芳，張麗丹，吳波霖，鄧世富，韋永孜

（1欽州市第一人民醫(yī)院 感染科，廣西 欽州 535000；2廣西醫(yī)科大學(xué)附屬武鳴醫(yī)院 感染科，廣西 南寧 530199）

0 引言

艾滋病為嚴(yán)重傳染病之一，受艾滋病影響，近年來(lái)我國(guó)肺結(jié)核患者日漸增多，因?yàn)榘滩】蓪?dǎo)致患者免疫功能大幅降低，增加患者感染率，引發(fā)肺結(jié)核[1]。艾滋病患者合并肺結(jié)核可進(jìn)一步降低患者免疫功能，致使HIV病毒復(fù)制能力增強(qiáng)而導(dǎo)致肺結(jié)核病灶加速擴(kuò)散，提高患者死亡率[2]。因此，有效給予肺結(jié)核患者快速診斷與治療是控制艾滋病合并肺結(jié)核患者病情進(jìn)展、提高患者生存質(zhì)量的關(guān)鍵。但目前尚無(wú)準(zhǔn)確、快速、可靠檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌感染的有效方法。近年來(lái)，酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)T-SPOT.TB成了診斷肺結(jié)核的重要方法，具有高特異性高、靈敏度及準(zhǔn)確率[3]。為進(jìn)一步探究T-SPOT.TB診斷效果，筆者進(jìn)行了如下研究，現(xiàn)總結(jié)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料。選取我院2018年1月至2019年12月收治的70例艾滋病合并肺結(jié)核（合并組）患者及50例單純肺結(jié)核患者（單純組）。其中，合并組男40例，女30例；年齡22～70歲，平均（40.11±8.76）歲。單純組男27例，女23例；年齡24～68歲，平均（40.24±8.83）歲。兩組數(shù)據(jù)顯示，P＞0.05，可予以對(duì)比。

1.2 方法

1.2.1 T-SPOT.TB試驗(yàn)采用上海復(fù)星科技有限公司提供的試劑盒，取5 mL枸櫞酸鈉抗凝靜脈血，分離PBMC放在包被INF-γ抗體的微孔板，加入結(jié)核特異性抗原早期分泌靶向抗原（ESAT-6）和培養(yǎng)濾過(guò)蛋白（CFP-10）作為刺激原，溫箱培養(yǎng)24 h后，洗去抗原致敏效應(yīng)T淋巴細(xì)胞，加入生物素標(biāo)記二抗，酶聯(lián)顯色，在細(xì)胞因子分泌的地方形成斑點(diǎn)，通過(guò)記錄斑點(diǎn)數(shù)檢測(cè)結(jié)核特異抗原致敏的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞數(shù)量。結(jié)果判斷：當(dāng)空白對(duì)照孔內(nèi)斑點(diǎn)數(shù)＜6時(shí)，任一實(shí)驗(yàn)孔斑點(diǎn)數(shù)減去空白孔斑點(diǎn)數(shù)≥6，為陽(yáng)性；若空白對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)＞6時(shí)，任一實(shí)驗(yàn)孔斑點(diǎn)數(shù)大于空白孔斑點(diǎn)數(shù)的兩倍，為陽(yáng)性。

1.2.2 結(jié)核抗體試驗(yàn)（TB-Ab）：采用艾博生物醫(yī)藥（杭州）有限公司生產(chǎn)的結(jié)核分枝桿菌IgG抗體檢測(cè)試劑盒，經(jīng)金標(biāo)法檢測(cè)：采集被檢者血清，在反應(yīng)板反應(yīng)孔中間依次加入2滴封閉液、40μL血清標(biāo)本、6滴洗滌液、2滴金標(biāo)液、6滴洗滌液，等待薄膜吸入。結(jié)果讀取，薄膜中間有紅圓點(diǎn)為陽(yáng)性，否則為陰性。

1.2.3 結(jié)核分枝桿菌核酸（TB-DNA）檢測(cè)：采用中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司生產(chǎn)的試劑盒，遵照說(shuō)明書(shū)經(jīng)PCR-熒光法檢測(cè)TB-DNA：預(yù)處理血液標(biāo)本及質(zhì)控品，取50μl的TB-DNA提取液加入備用沉淀物混合后煮沸10 min，10000 r/min速度離心5 min，將上層清液放入pcr擴(kuò)增體系以6000 r/min速度離心，放于93℃環(huán)境2 min，接著依次置于93℃及55℃環(huán)境中45s、120s循環(huán)30次。擴(kuò)增結(jié)果由熒光檢測(cè)儀自動(dòng)記錄，根據(jù)循環(huán)閾值（ct）判定：如果Ct值＜30，則實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性。

1.2.4 CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)測(cè)定 經(jīng)美國(guó)BD公司生產(chǎn)的流式細(xì)胞儀測(cè)量患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)。

1.3 觀察指標(biāo)。比較兩組T-SPOT.TB、結(jié)核抗體、TBDNA結(jié)果，并比較不同CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)T-SPOT.TB檢測(cè)的敏感性、特異性及準(zhǔn)確率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。選用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理分析，計(jì)數(shù)資料實(shí)施t檢驗(yàn)，計(jì)量資料實(shí)施χ2檢驗(yàn)，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)比三組檢測(cè)結(jié)果。T-SPOT.TB診斷準(zhǔn)確率高于TB-Ab、TB-DNA（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 對(duì)比三組檢測(cè)結(jié)果[n（%）]

2.2 對(duì)比不同CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)方法敏感度、診斷率、特異性。CD4+T淋巴細(xì)胞≥200個(gè)/ul組敏感度、準(zhǔn)確率高于CD4+T淋巴細(xì)胞＜200個(gè)/ul組（P＜0.05），但兩組特異性無(wú)顯著差異（P＞0.05），見(jiàn)表2。

表2 對(duì)比不同CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)方法敏感度、診斷率、特異性[n（%）]

3 討論

艾滋病以人體免疫功能缺陷為主要特征，相比健康人群，艾滋病患者更易伴發(fā)其他疾病、感染等，因此死亡率較高[4]。目前，我國(guó)是艾滋病合并肺結(jié)核高感染率、高發(fā)病率、高潛伏感染、高新發(fā)率、高死亡率的高負(fù)擔(dān)國(guó)家。因艾滋病、肺結(jié)核可相互作用，即艾滋病合并肺結(jié)核后生存期顯著縮短，而艾滋病也可增加肺結(jié)核傳播，促使病情持續(xù)進(jìn)展[5]。因此，如何提高肺結(jié)核檢測(cè)準(zhǔn)確率，使患者能夠早診斷、早干預(yù)成了抑制艾滋病合并肺結(jié)核感染的關(guān)鍵。

臨床診斷以往多實(shí)施痰標(biāo)本涂片法、結(jié)核抗體檢測(cè)法等，有檢出率偏低、敏感性較差等不足。痰涂片檢查結(jié)核分枝桿菌（MTB）陽(yáng)性率偏低，原因?yàn)椋壕奘杉?xì)胞內(nèi)MTB極易喪失抗酸性，并且多為播散型結(jié)核及肺外結(jié)核。雖然相關(guān)學(xué)者提出了BD-960結(jié)核菌快速培養(yǎng)法，明顯縮短檢測(cè)時(shí)間，但陽(yáng)性檢出率仍相對(duì)較低。近年來(lái)，T-SPOT.TB成了臨床診斷肺結(jié)核的重要方法，靈敏度、特異性、準(zhǔn)確率均較高，且可于送檢24 h即可獲取檢測(cè)結(jié)果。本文研究結(jié)果顯示，T-SPOT.TB診斷準(zhǔn)確率高于TB-Ab、TB-DNA（P＜0.05），CD4+T淋巴細(xì)胞≥200個(gè)/ul組敏感度和準(zhǔn)確率高于CD4+T淋巴細(xì)胞＜200個(gè)/ul組（P＜0.05），但兩組特異性無(wú)顯著差異（P＞0.05）。這是因?yàn)镃D4+T淋巴細(xì)胞可傳遞抗原信息，使機(jī)體細(xì)胞免疫功能得以正常維持。研究發(fā)現(xiàn)，艾滋病所致CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)降低與結(jié)核傳播、死亡相關(guān)，而抗病毒治療雖可升高CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)，卻無(wú)法降低艾滋病患者感染結(jié)核風(fēng)險(xiǎn)。由本文研究可見(jiàn)，一旦CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)降低至200個(gè)/ul以下，即便行T-SPOT.TB診斷，敏感度也不高，因此須臨床予以患者早診斷、早治療，以免病情加重。

綜上所述，T-SPOT.TB檢測(cè)在診斷艾滋病合并結(jié)核感染上具有較高敏感性、特異性及準(zhǔn)確率，且當(dāng)CD4+T淋巴細(xì)胞≥200個(gè)/ul時(shí)其敏感性更高。