不同類(lèi)型HPV 與宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌的關(guān)系探討

蔡方萍

（海門(mén)市第二人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，江蘇 南通 226100）

宮頸癌是一種可預(yù)防及可治愈的惡性腫瘤。近年來(lái)，隨著宮頸癌篩查力度的加大，提高了臨床早期病變的檢出率，也有助于盡早采取干預(yù)措施，提高患者生存率。宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）是宮頸癌的癌前病變，如不及時(shí)處理，易發(fā)展成宮頸癌，影響患者預(yù)后[1]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，人乳頭狀瘤病毒（HPV）感染可引起子宮組織病變，導(dǎo)致CIN 及宮頸癌的發(fā)生[2]。臨床將HPV 類(lèi)型分為高危型與低危型，高危型有20 多種，其中16 和18 型是發(fā)生宮頸病變的主要類(lèi)型，而低危型以6 型、11 型為主，可引發(fā)良性病變，從HPV 感染發(fā)展到CIN，再發(fā)展到宮頸癌要經(jīng)歷10 年左右的演變期，因此，了解不同類(lèi)型HPV 感染情況，便于臨床早期對(duì)宮頸病變做出準(zhǔn)確判斷，對(duì)早期預(yù)防CIN 及宮頸癌的發(fā)生起到積極作用[3]。本文回顧性研究2017 年2 月至2019 年10 月海門(mén)市第二人民醫(yī)院婦科門(mén)診就診的300 例已確診的CIN和宮頸癌患者，均采用實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)進(jìn)行HPV 分型檢測(cè)，探討不同類(lèi)型HPV 病毒感染情況，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取海門(mén)市第二人民醫(yī)院2017 年2 月至2019 年10 月就診的300 例已確診的CIN 和宮頸癌患者，對(duì)其資料進(jìn)行回顧性分析，納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《臨床腫瘤內(nèi)科手冊(cè)》[4]中CIN 和宮頸癌相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)者；通過(guò)細(xì)胞學(xué)及病理學(xué)確診為CIN 及宮頸癌。②患者臨床資料完整。③無(wú)精神疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：①癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移。②生存時(shí)間不足6個(gè)月。③合并嚴(yán)重器質(zhì)性疾病。患者年齡19～74歲，平均（41.25±4.21）歲；其中CIN Ⅰ級(jí)患者75例（25.00%），CIN Ⅱ～Ⅲ級(jí)患者148 例（49.33%），宮頸癌患者77 例（25.67%）。院內(nèi)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核并批準(zhǔn)此研究，患者或家屬對(duì)研究知情同意。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集與處理采集的檢測(cè)樣本為受檢者的宮頸上皮細(xì)胞，使用無(wú)菌棉拭子進(jìn)行采集，并放入離心管中，加入適量無(wú)菌生理鹽水，靜置10 min，取出采集樣本的棉拭子，并對(duì)樣本進(jìn)行離心處理，離心時(shí)間為5 min，轉(zhuǎn)速14 000 r/min。完成上述操作后，留取沉淀，并將其置于-70 ℃冰箱內(nèi)保存。

1.2.2 PCR 技術(shù)進(jìn)行HPV 分型檢測(cè)主要針對(duì)于HPV亞型中的低危型HPV6、HPV11 及高危型HPV16 和HPV18 4 種類(lèi)型進(jìn)行檢測(cè)，使用的試劑來(lái)自華美生物工程公司。首先將樣本從冰箱內(nèi)取出，然后加入50 μL 裂解液進(jìn)行裂解處理，將裂解液與處理后的樣本溶液充分搖勻混合后，先進(jìn)行加熱處理，100 ℃加熱1 min，然后再次進(jìn)行離心處理，14 000 r/min，離心5 min，將適量（2 μL 左右）上層清液取出后，放置于反應(yīng)管中，將此作為反應(yīng)模板。然后進(jìn)行PCR 檢測(cè)，將溫度調(diào)整為94 ℃，在5 min 內(nèi)進(jìn)行變性循環(huán)，共35 個(gè)循環(huán)，循環(huán)完成后，再將溫度調(diào)整為72 ℃，進(jìn)行5 min 的延伸處理。整個(gè)處理期間，注意要建立好陽(yáng)性、陰性以及對(duì)照分析。最后，對(duì)PCR 產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳處理，置于2%瓊脂糖凝膠進(jìn)行30 min 的電泳，設(shè)置參數(shù)為8～100 V，然后使用凝膠成像儀在302 nm紫外線處進(jìn)行觀察，在紫外線下會(huì)發(fā)生溴化反應(yīng)，DNA呈現(xiàn)紅橙色的現(xiàn)象。根據(jù)對(duì)照分析，觀察是否有紅橙色光帶，有紅橙色光帶者判定為陽(yáng)性。

1.3 觀察指標(biāo)①分析不同宮頸病變患者年齡分布情況。②分析不同年齡患者HPV 分型結(jié)果。③分析不同宮頸病變患者HPV 分型結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料用[例(%)]表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同宮頸病變患者年齡分布情況CIN I 及CIN II～I(xiàn)II患者中，發(fā)病年齡集中在20～35 歲，分別占比為49.33%及41.89%；宮頸癌患者中，發(fā)病年齡集中在36～50 歲，占比為38.96%，見(jiàn)表1。

2.2 不同年齡患者HPV 分型結(jié)果檢測(cè)結(jié)果顯示，300 例患者中，HPV 感染213 例，陽(yáng)性率為71.00%，其中20～35 歲共感染94 例，占HPV 總感染例數(shù)的44.13%（94/213）,為感染高發(fā)年齡段。低危型HPV 6/11 感染的高峰年齡為＜20 歲、20～35 歲，占這兩個(gè)年齡段陽(yáng)性總例數(shù)的53.13%（51/96）；高危型HPV16 感染高峰年齡段為51～65 歲，占該年齡段陽(yáng)性總例數(shù)的15.79%（6/38）；HPV18 感染高峰年齡段為＞65 歲，占該年齡段陽(yáng)性總例數(shù)的40.00%（14/35）；混合感染以20～35歲年齡段占比較高，占該年齡段陽(yáng)性總例數(shù)的24.47%（23/94），見(jiàn)表2。

2.3 不同宮頸病變患者HPV 分型結(jié)果在CINI 組患者中，低危型HPV6/11 占比最高，為84.48%，顯著高于CIN II～I(xiàn)II 及宮頸癌患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）；在CINII～I(xiàn)II 患者中，以低危型HPV6/11 占比最高，為43.00%，其次為混合感染，為25.00%；宮頸癌患者中，以高危型HPV18 占比最高，為34.55%，其次為混合感染，為30.91%，見(jiàn)表3。

3 討論

臨床認(rèn)為宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展是一個(gè)漸變的過(guò)程，最終有兩種結(jié)局，好的結(jié)局是自然消退，壞的結(jié)局是發(fā)生癌變，漸變過(guò)程為CIN 發(fā)展到原位癌，再發(fā)展到早期浸潤(rùn)癌，最終發(fā)展為宮頸癌。由于宮頸癌的發(fā)病過(guò)程較為緩慢，因此早期采取干預(yù)措施，可逆轉(zhuǎn)其結(jié)局[5]。可見(jiàn)，早期對(duì)宮頸癌進(jìn)行篩查對(duì)疾病預(yù)后有利。

表1 不同宮頸病變患者年齡分布情況[例(%)]

表2 不同年齡患者HPV 分型結(jié)果[例(%)]

表3 不同宮頸病變患者HPV 分型結(jié)果[例(%)]

HPV 存在于自然界，目前有多個(gè)亞型，是一種與皮膚或黏膜增生性病變有關(guān)的DNA 病毒，其中HPV6、11 及42 等均為低危型，不會(huì)產(chǎn)生癌變，常見(jiàn)于生殖道良性疾病中；HPV16、18 及31 等均為高危型，會(huì)產(chǎn)生癌蛋白，使得細(xì)胞周期失控進(jìn)而發(fā)生癌變。宮頸癌發(fā)病與高危型HPV 感染有關(guān)，其以隱性感染為主，引發(fā)不典型增生，其他協(xié)同因子參與其中即可發(fā)生癌變[6-7]。但顯性感染在臨床易發(fā)現(xiàn)，因此不能忽視隱性感染者追蹤，需加大篩查力度。本次研究結(jié)果顯示，CIN I 及CIN II～I(xiàn)II 患者中，發(fā)病人群集中在20～35 歲，而宮頸癌患者，發(fā)病人群集中在36～50 歲?？梢?jiàn)宮頸病變程度隨著年齡增長(zhǎng)而不斷加重，宮頸癌發(fā)展為一個(gè)連續(xù)發(fā)展的過(guò)程，從正常宮頸過(guò)度到宮頸上皮內(nèi)瘤變，最后發(fā)展為宮頸癌需要5～10 年的漸變過(guò)程。本次研究結(jié)果顯示，HPV 感染高峰年齡為35 歲以下，而與宮頸癌的高峰年齡相比，有10 歲以上的差異，但兩類(lèi)患者的發(fā)展時(shí)間相似。應(yīng)當(dāng)將36～50 歲的群體作為高危人群，給予重點(diǎn)防治宣教。同時(shí)從研究中可知，HPV 陽(yáng)性率逐漸低齡化，低危型HPV 6/11 感染的年齡較低，峰值＜35 歲，可見(jiàn)應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)對(duì)年輕女性的健康指導(dǎo)，讓年輕女性要注意生殖系統(tǒng)健康，并定期接受HPV 病毒篩查、宮頸細(xì)胞檢查等。

本次研究結(jié)果顯示，300例患者中，HPV總感染213例，陽(yáng)性率71.00%，且低危型HPV6/11 所占陽(yáng)性例數(shù)比例為46.01%，而高危型所占陽(yáng)性例數(shù)比例為53.99%，表明HPV 感染隨著宮頸病變的加重而持續(xù)升高。在不同宮頸病變中，高危型18 陽(yáng)性率以宮頸癌最高，為34.55%，低危型6/11 陽(yáng)性率以CIN I 最高，為84.48%，提示隨著CIN 級(jí)別的增高，患者的宮頸病變?cè)絿?yán)重，高危型HPV 的陽(yáng)性率也越高，此結(jié)果與楊惠霞等[8]的文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果相符。有學(xué)者認(rèn)為，宮頸的輕度病變主要由HPV感染細(xì)胞形態(tài)及結(jié)構(gòu)變異導(dǎo)致，而增加機(jī)體抵抗力，HPV感染會(huì)消失，且細(xì)胞形態(tài)會(huì)逐漸恢復(fù)，反之，病情則會(huì)進(jìn)展，而多數(shù)HPV 感染是短暫性的，是有持續(xù)HPV 感染才可引發(fā)宮頸癌[9]。有研究證實(shí)，年輕女性感染高危型16/18 更易引發(fā)宮頸癌，且年齡較大的女性，其發(fā)生宮頸癌與多種因素有關(guān)，如早婚及多產(chǎn)導(dǎo)致宮頸裂傷等，因此，對(duì)年輕女性的預(yù)防應(yīng)在預(yù)防及治療HPV 感染方面，尤其是高危型16 與18，檢出后需要及時(shí)采取有效的治療措施[10]。PCR 檢測(cè)技術(shù)是檢測(cè)HPV 的良好技術(shù)，其靈敏度高且操作簡(jiǎn)單，具有較好的陰性預(yù)測(cè)值，便于臨床采用。但目前HPV 檢測(cè)的成本較高，尚不能大面積用于宮頸癌的篩查中，臨床應(yīng)重視HPV 陽(yáng)性患者的隨訪，加強(qiáng)關(guān)注力度。

綜上，女性生殖道HPV 感染率隨宮頸病變程度的加重呈現(xiàn)升高趨勢(shì)，HPV 感染與年齡、不同程度宮頸病變均存在相關(guān)性。臨床對(duì)重點(diǎn)人群進(jìn)行PCR 檢測(cè)，再根據(jù)篩查結(jié)果，對(duì)高危型人群進(jìn)行密切追蹤，了解HPV 感染患者的轉(zhuǎn)歸情況，以預(yù)防宮頸癌的發(fā)生。