木醋液與殺菌劑復(fù)配對番茄枯萎病和灰霉病的防治效果

肖輝　程文娟　張鵬　張慧　焦汝民　王立艷　趙杰　潘潔

摘要：為明確木醋液對番茄枯萎病和灰霉病的防治效果及其在殺菌劑減量施用方面的作用，通過抑菌圈法和室內(nèi)盆栽試驗，研究木醋液及其與苯甲·多菌靈、腐霉利等殺菌劑配施對番茄枯萎病和灰霉病的防治效果。結(jié)果表明，木醋液小于500倍的稀釋液對番茄枯萎病病菌、灰霉病病菌菌絲生長均具有顯著的抑制作用，100倍稀釋液抑菌率分別達(dá)85.82%、90.97%;木醋液對番茄枯萎病菌的EC50、EC90分別為4.07、12.22μg/mL，對番茄灰霉病病菌的EC50、EC90分別為3.87、10.62μg/mL，木醋液對番茄灰霉病菌抑制效果好于對枯萎病菌的抑制效果;木醋液小于300倍的稀釋液對盆栽番茄枯萎病、灰霉病均具有顯著的預(yù)防和治療作用，預(yù)防效果好于治療效果。木醋液與農(nóng)藥配施可提高殺菌劑對番茄枯萎病、灰霉病的防治效果;所選殺菌劑減量20%與木醋液300倍液配合使用，對番茄枯萎病菌、灰霉病菌抑菌率分別達(dá)91.43%、70.65%，對番茄枯萎病、灰霉病的預(yù)防性防治效果分別為69.62%、74.38%，治療效果分別為64.67%、69.33%，均與農(nóng)藥不減量處理差異不顯著。結(jié)果表明，木醋液對番茄枯萎病、灰霉病具有很好的防治作用，并且與農(nóng)藥配施可降低農(nóng)藥使用量。

關(guān)鍵詞：木醋液;番茄枯萎病;番茄灰霉病;農(nóng)藥減量;防治效果

中圖分類號：S436.412文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1002-1302（2021）01-0082-06

作者簡介：肖輝（1981—），男，山東泰安人，碩士，副研究員，主要從事農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境研究。E-mail：xiaohui-81@163.com。

設(shè)施蔬菜生產(chǎn)屬于高投入高產(chǎn)出的集約化種植模式，農(nóng)藥使用量大，是大田作物的十幾倍甚至幾十倍[1]，農(nóng)藥在保障蔬菜豐產(chǎn)的同時，也存在很多風(fēng)險，如導(dǎo)致農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留、致病菌抗藥性增加、生態(tài)環(huán)境污染等，嚴(yán)重威脅人類食品安全和健康[2]。因此，開發(fā)農(nóng)藥替代品，減少化學(xué)農(nóng)藥使用量，是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展的必然選擇。

木醋液是農(nóng)林廢棄物（秸稈、樹枝、木屑等）高溫裂解產(chǎn)生的煙氣經(jīng)冷凝形成的一種液體物質(zhì)，該物質(zhì)含有酸、醇、酚、酯等有機成分[3]，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上具有促進(jìn)植物生長、改善農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)，改良土壤、抑菌殺蟲等功效。日本在20世紀(jì)60年代就開始木醋液的應(yīng)用研究，現(xiàn)已開發(fā)出多種木醋液專用產(chǎn)品[4]。而該類研究在我國起步于20世紀(jì)80年代，主要集中于木醋液的精制[5]、成分分析[6-7]、農(nóng)業(yè)增產(chǎn)提質(zhì)[8-9]、抑菌抗病[10]等方面。王海英等的研究表明，木醋液具有廣譜抑菌作用，且對細(xì)菌抑制作用要好于對真菌抑制作用[11]。徐巖巖等的研究表明，5%的精制山杏殼木醋液浸種既能有效降低甜瓜細(xì)菌性果腐病的發(fā)生率，又能促進(jìn)甜瓜幼苗的生長[12]。李燕等的研究表明，當(dāng)木醋液濃度為0.1%時對腐霉菌菌絲生長的抑制率可達(dá)84.28%[13]。前人已在木醋液抑菌抗病方面做了大量研究，但對于木醋液及其與殺菌劑配施對植物病原菌抑制效果的報道較少。

枯萎病和灰霉病是番茄常見病害，番茄枯萎病是由尖孢鐮刀菌（Fusariumoxysporumf.sp.lycopersiciSnyderetHansen）引起的一種重要的土傳病害[14]，該病原菌從根部侵入，侵染性極強[15];番茄灰霉病是由灰葡萄孢菌（BotrytiscinereaPers.）引發(fā)的一種真菌病害，可危害番茄的莖、葉、花和果實[16]，2種病害都會嚴(yán)重降低番茄的產(chǎn)量和品質(zhì)。當(dāng)前主要依靠化學(xué)藥劑進(jìn)行防治，但長期高頻率地大量用藥會導(dǎo)致田間病原菌抗藥性增強，藥劑防效下降，農(nóng)田生態(tài)系統(tǒng)環(huán)境污染風(fēng)險增加。

木醋液具有殺菌抗病作用，如能部分替代農(nóng)藥進(jìn)行番茄枯萎病和灰霉病的防治，將對降低農(nóng)藥使用量、保障食品安全起到積極的支撐作用。本研究以番茄根部的枯萎病和地上部的灰霉病為對象，采用抑菌圈法和盆栽試驗研究木醋液及木醋液與農(nóng)藥配施對2種病害的防治效果，以期為木醋液植物病害防治及殺菌劑減量應(yīng)用提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗材料

供試番茄枯萎病菌（Fusariumoxysporumf.sp.lycopersiciSnyderetHansen）、灰霉病菌（BotrytiscinereaPers.），由天津市農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所提供;培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基（馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，蒸餾水1000mL）。

供試木醋液由松樹鋸末450℃干餾，裂解氣體冷凝、純化得到棕黃色液體，pH值為2.7，乙酸含量為20.7%。

供試農(nóng)藥：20%苯甲·多菌靈懸浮劑，陜西湯普森生物科技有限公司生產(chǎn);50%腐霉利可濕性粉劑，日本住友化學(xué)株式會社生產(chǎn)。

供試番茄品種為金冠5號。

試驗時間：2018年11—12月;試驗地點：天津市農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境研究所微生物實驗室。

1.2試驗方法

1.2.1室內(nèi)抑菌試驗

采用菌絲生長速率法。木醋液抑菌試驗設(shè)5個處理，分別為CK（清水），木醋液100、300、500、1000倍稀釋液。每個處理重復(fù)4次。木醋液與農(nóng)藥配施抑菌試驗設(shè)6個處理，分別為CK;T1：農(nóng)藥（枯萎病為苯甲·多菌靈2000倍液;灰霉病為腐霉利300倍液）;T2：木醋液300倍液+農(nóng)藥;T3：木醋液300倍液+農(nóng)藥減量20%（在T1的基礎(chǔ)上減量，即2400倍液，下同）;T4：木醋液300倍液+農(nóng)藥減量40%;T5：木醋液300倍液+農(nóng)藥減量60%。每個處理重復(fù)4次。

含藥PDA平板的制作：加熱PDA培養(yǎng)基至熔化后按試驗設(shè)計比例添加藥液，培養(yǎng)基與藥液比例為9∶[KG-*3]1，倒入直徑9cm的培養(yǎng)皿中，凝固后用直徑5mm打孔器在菌落邊緣打取菌餅，每個平皿中接種2塊菌餅，帶菌面朝下，蓋上皿蓋，置于培養(yǎng)箱中25℃恒溫培養(yǎng)。當(dāng)對照菌斑直徑達(dá)到皿2/3時，用游標(biāo)卡尺測量各處理菌落直徑，計算抑菌率，并將抑菌率轉(zhuǎn)化為機率值，將劑量取對數(shù)，求出毒力回歸方程，并計算EC50、EC90。

番茄灰霉病菌于2018年11月10日接種，11月13日測定;番茄枯萎病菌2018年11月10日接種，11月15日測定。

抑菌率=（對照菌落生長直徑-處理菌落生長直徑）/（對照菌落生長直徑-菌餅直徑）×100%。

1.2.2盆栽試驗

木醋液對番茄枯萎病、番茄灰霉病的預(yù)防和治療試驗設(shè)5個處理，分別為CK：對照（清水）;T1：木醋液100倍稀釋液;T2：木醋液300倍稀釋液;T3：木醋液500倍稀釋液;T4：木醋液1000倍稀釋液。每個處理重復(fù)4次。

木醋液與20%苯甲·多菌靈懸浮劑配施預(yù)防和治療番茄枯萎病設(shè)6個處理，分別為CK：對照（清水）;T1：苯甲·多菌靈2000倍稀釋液;T2：木醋液300倍稀釋液+苯甲·多菌靈2000倍稀釋液;T3：木醋液300倍稀釋液+苯甲·多菌靈減量20%（在T1的基礎(chǔ)上減量，下同）;T4：木醋液300倍稀釋液+苯甲·多菌靈減量40%;T5：木醋液300倍稀釋液+苯甲·多菌靈減量60%。每個處理重復(fù)4次。

木醋液與50%腐霉利可濕性粉劑配施預(yù)防和治療番茄灰霉病試驗設(shè)計同上，腐霉利為300倍稀釋液。

1.2.2.1枯萎病預(yù)防試驗盆栽番茄苗期5～6張葉時按試驗設(shè)計，每株5mL藥液，灌根處理番茄苗，24h后灌根接種5mL番茄枯萎病菌孢子懸浮液（5×106CFU/mL）。每處理重復(fù)4次。在溫度為28℃、相對濕度80%條件下培養(yǎng)14d。調(diào)查發(fā)病情況。

1.2.2.2枯萎病治療試驗每株番茄苗灌根接種5mL番茄枯萎病菌孢子懸浮液（5×106CFU/mL），24h后，用灌根方式每株苗施入5mL藥液。每處理重復(fù)4次。在溫度28℃、相對濕度80%條件下培養(yǎng)14d。調(diào)查發(fā)病情況。

1.2.2.3灰霉病預(yù)防試驗盆栽番茄苗期5～6張葉時按試驗設(shè)計，葉面噴施藥液，葉面無殘留后24h，接種病菌（1×105～1×106CFU/mL分生孢子懸浮液，葉面噴霧）。每處理重復(fù)4次。在溫度為28℃、相對濕度90%條件下培養(yǎng)14d。調(diào)查發(fā)病情況。

1.2.2.4灰霉病治療試驗盆栽番茄苗期5～6張葉時，葉面噴霧接種病菌（1×105～1×106個/mL分生孢子懸浮液），24h后，按試驗設(shè)計，葉面噴施藥液，每處理重復(fù)4次。在溫度28℃、相對濕度90%條件下，培養(yǎng)14d。調(diào)查發(fā)病情況。

2018年11月19日，枯萎病、灰霉病預(yù)防試驗灌溉或噴施藥液，治療試驗接種病原菌;11月20日，枯萎病、灰霉病預(yù)防試驗接種病原菌，治療試驗灌溉或噴施藥液;2018年12月4日，調(diào)查發(fā)病情況。

枯萎病分級標(biāo)準(zhǔn)[17]如下，0級：無癥狀;1級：1或2張葉子明顯變黃以致脫落;2級：3或4張真葉變黃，葉片萎蔫下垂;3級：5或6張真葉變黃，或真葉萎蔫下垂;4級：全株嚴(yán)重萎蔫以致枯死。計算病情指數(shù)和防治效果。

灰霉病分級標(biāo)準(zhǔn)參照GB/T17980.28—2000《農(nóng)藥田間藥效試驗準(zhǔn)則》，0級：無病斑;1級：單葉片有病斑1～3個;3級：單葉片有病斑4～6個;5級：單葉片有病斑7～10個;7級：單葉片有病斑11～20個，部分密集成片;9級：單葉片有病斑密集占葉面積1/4以上。計算病情指數(shù)和防治效果。

病情指數(shù)=∑（各級病葉數(shù)（株數(shù)）×相對病級值）/（調(diào)查總?cè)~數(shù)（總株數(shù)）×最高代表極值）×100。

防治效果=（空白對照的病情指數(shù)-藥劑處理后的病情指數(shù)）/空白對照病情指數(shù)×100%。

1.2.3數(shù)據(jù)處理

采用SPSS20.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析處理，LSD法進(jìn)行顯著性檢驗（P<0.05）。

2結(jié)果與分析

2.1木醋液對番茄枯萎病、灰霉病的防治效果

2.1.1不同濃度木醋液對番茄枯萎病菌和灰霉病菌的抑制作用

木醋液對番茄枯萎病和灰霉病病菌菌絲生長均有很好的抑制作用（表1），枯萎病菌菌落直徑木醋液100倍稀釋液<300倍稀釋液<500倍稀釋液<1000倍稀釋液≈對照，表明木醋液稀釋倍數(shù)越小抑菌效果越明顯，稀釋倍數(shù)小于500倍時，對枯萎病菌具有顯著的抑制效果，其中木醋液100倍液（T1處理）的抑菌率可達(dá)85.82%。通過毒力回歸方程計算得出，EC50為4.07μg/mL，EC90為12.22μg/mL。木醋液稀釋倍數(shù)小于500倍時對番茄灰霉病菌具有顯著的抑制效果，且稀釋倍數(shù)為100倍時，對番茄灰霉病菌抑菌率達(dá)到90.96%，EC50為3.87μg/mL，EC90為10.62μg/mL。木醋液對番茄灰霉病菌和枯萎病菌抑菌效果也存在差異，木醋液稀釋100倍時對灰霉病菌的抑制率要比枯萎病菌抑制率高5.14百分點，且EC50、EC90分別低4.94%和13.07%，表明木醋液對番茄灰霉病菌抑制效果要好于對枯萎病菌的抑制效果。

2.1.2木醋液對番茄枯萎病及灰霉病的防治作用

盆栽試驗結(jié)果顯示，木醋液對番茄枯萎病和灰霉病具有很好的預(yù)防和治療作用（表2），且木醋液100倍和300倍稀釋液的防治效果均顯著高于500倍、1000倍稀釋液和CK的防治效果，表明木醋液稀釋倍數(shù)小于300倍時，對番茄枯萎病和灰霉病均具有預(yù)防和治療作用。而且，木醋液100倍和300倍稀釋液對枯萎病的預(yù)防效果分別比治療效果高12.77、4.54百分點，表明木醋液對枯萎病的預(yù)防作用要高于治療作用，對灰霉病的防治作用也表現(xiàn)出同樣趨勢。木醋液100、300、500、1000倍稀釋液對灰霉病的預(yù)防效果分別比對枯萎病的預(yù)防效果高8.40、14.91、2.72、1.34百分點，比治療效果上也分別高出了10.62、11.86、3.39、4.24百分點，表明木醋液對灰霉病和枯萎病的預(yù)防作用要好于其治療作用，且對灰霉病的防治效果高于對枯萎病的防治效果。

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