急性心肌梗死患者血漿MEG3及UCA1表達(dá)水平與冠狀動(dòng)脈病變的相關(guān)性*

王琴， 江希， 王引利

(成都市第三人民醫(yī)院 心內(nèi)科， 四川 成都 610000)

急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)是臨床常見(jiàn)急危重癥，好發(fā)于中老年人群，預(yù)后較差，我國(guó)AMI的死亡率為0.8%～1.4%[1]。準(zhǔn)確評(píng)估冠狀動(dòng)脈(簡(jiǎn)稱冠脈)病變，對(duì)AMI的診療非常重要，冠狀動(dòng)脈造影(coronary angiography,CAG)是診斷冠脈病變的金標(biāo)準(zhǔn)，但也是一種有創(chuàng)性的檢查，其應(yīng)用受到一定的限制。利用血漿學(xué)指標(biāo)輔助評(píng)估冠脈病變情況已經(jīng)成為近年學(xué)術(shù)界的研究熱點(diǎn)，血漿學(xué)檢測(cè)具有簡(jiǎn)單易行等優(yōu)點(diǎn)，但目前常用的C-反應(yīng)蛋白、同型半胱氨酸等血漿標(biāo)記物易受炎癥反應(yīng)、脂代謝障礙等因素影響，在AMI診療中應(yīng)用價(jià)值并不理想[2]。長(zhǎng)鏈非編碼核糖核酸(long-chain non-coding ribonucleic acid, lncRNA)是一種無(wú)編碼蛋白質(zhì)功能的長(zhǎng)度>200 nt的RNA，可介導(dǎo)心血管疾病的發(fā)生發(fā)展，人類母系表達(dá)基因3(maternally expressed gene 3,MEG3)、尿路上皮癌抗原1(urothelial carcinoma antigen 1,UCA1)為目前研究較多的lncRNA，也被部分學(xué)者認(rèn)為是AMI診斷的新型標(biāo)記物[3-4]。目前，臨床主要研究集中于lncRNA表達(dá)水平與AMI冠脈病變嚴(yán)重程度的關(guān)系，常常忽略AMI住院期間心血管事件發(fā)生情況與lncRNA表達(dá)水平的關(guān)系研究。本研究以208例AMI患者作為研究對(duì)象，并于入院2 h時(shí)檢測(cè)血漿MEG3、UCA1表達(dá)水平及肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌鈣蛋白I(cTnI)的含量，采用Spearman秩相關(guān)及Pearson相關(guān)分析冠脈病變與AMI患者血漿MEG3、UCA1基因及CK-MB、cTnI表達(dá)水平的相關(guān)性，AMI患者住院期間心血管事件與血漿MEG3、UCA1的相關(guān)性，為AMI的診療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1一般臨床資料 選取2019年1—12月收治的208例AMI患者作為研究對(duì)象，男性131例、女性77例，年齡44～76歲、平均(59.87±9.31)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì)制定的AMI診斷標(biāo)準(zhǔn)[5](缺血性胸痛病史、心電圖動(dòng)態(tài)演變、心肌壞死血漿心肌標(biāo)記物肌紅蛋白、肌鈣蛋白等的動(dòng)態(tài)改變，3條中2條具備即可確診)；(2)發(fā)病至入院時(shí)間≤12 h；(3)年齡>18歲；(4)簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)既往心肌梗死病史；(2)合并痛風(fēng)、急性腦血管疾病、自身免疫性疾病；(3)伴嚴(yán)重肝腎疾?。?4)入院前6個(gè)月內(nèi)肝炎病史；(5)入院前1周內(nèi)使用他汀類藥物治療。本研究符合赫爾辛基宣言。

1.1.2分組 AMI患者在入院后，以右側(cè)橈動(dòng)脈或股動(dòng)脈Judkins法行CAG，選擇不同投照體位，記錄冠狀動(dòng)脈狹窄情況，以冠脈管腔直徑狹窄≥50%判斷為狹窄；并利用Gensini評(píng)分[6]評(píng)估冠脈病變程度，Gensini評(píng)分根據(jù)病變血管部位及狹窄程度加權(quán)評(píng)分，<30分49例、納入低分組，30～60分83例、納入中分組，>60分76例、納入高分組。

1.2 觀察指標(biāo)

比較低分組、中分組及高分組AMI患者入院2 h時(shí)的血漿MEG3、UCA1基因表達(dá)水平及CK-MB、cTnI含量，采用Pearson法分析血漿MEG3、UCA1基因表達(dá)與Gensini評(píng)分、CK-MB及cTnI水平的相關(guān)性，比較住院期間發(fā)生心血管事件(心律失常、心力衰竭、心絞痛及心血管事件)患者與未發(fā)生心血管事件患者的血漿MEG3及UCA1基因表達(dá)水平，采用Spearman秩相關(guān)分析AMI患者住院期間心血管事件與血漿MEG3、UCA1基因表達(dá)的相關(guān)性。3組患者入院2 h內(nèi)抽取外周靜脈血，分離血漿后加入Trizol試劑混勻，靜置5 min，加入氯仿混勻，靜置10 min；離心留取上清液，加入等體積異丙醇勻混，靜置3 min，離心后倒出管內(nèi)液體，加入乙醇，離心后倒出乙醇，吸走剩余液體，晾干；管中加入RNase-free ddH2O，溶解RNA，用分光光度計(jì)測(cè)定總RNA濃度及純度。提取總RNA后，利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction, PCR)技術(shù)行逆轉(zhuǎn)錄，取適量cDNA為模板，引物濃度0.4 μmol/L，15 μL體系擴(kuò)增，根據(jù)目標(biāo)基因設(shè)計(jì)合成相應(yīng)上下游引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，以熒光定量PCR熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定閾值時(shí)的Ct值為樣本表達(dá)量，各樣本均重復(fù)循環(huán)3次，MEG3、UCA1相對(duì)表達(dá)量以2-ΔΔCt表示；采用免疫化學(xué)發(fā)光法(試劑盒由德國(guó)羅氏公司生產(chǎn))檢測(cè)血漿肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme, CK-MB)及肌鈣蛋白I(troponin I, cTnI)水平。采用生化分析儀測(cè)定血漿CK-MB及cTnI水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 一般資料

3組AMI患者性別、年齡、左心室射血分?jǐn)?shù)、脂代謝紊亂情況及高血壓史、糖尿病史、吸煙史等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 各組AMI患者一般資料Tab.1 Comparison of baseline data among AMI patients with different Gensini scores

2.2 血漿MEG3、UCA1基因表達(dá)水平及CK-MB、cTnI含量

結(jié)果顯示，3組AMI患者血漿MEG3基因表達(dá)水平及CK-MB、 cTnI含量比較，低分組<中分組<高分組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)；3組血漿UCA1基因表達(dá)水平比較，低分組>中分組>高分組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。見(jiàn)表2。

表2 各組AMI患者血漿MEG3、UCA1基因表達(dá)水平及CK-MB、cTnI含量Tab.2 Comparison of levels of serum MEG3, UCA1,and CK-MB, cTnI in each group

2.3 血漿MEG3、UCA1基因表達(dá)與Gensini評(píng)分、CK-MB及cTnI含量的相關(guān)性

Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，AMI患者血漿MEG3與Gensini評(píng)分、CK-MB及cTnI表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.411、0.329、0.342，P<0.05)，血漿UCA1表達(dá)水平則與Gensini評(píng)分、CK-MB、cTnI表達(dá)水平均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.389、0.307、0.318，P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 AMI患者血漿MEG3、UCA1基因表達(dá)與Gensini評(píng)分、CK-MB及cTnI含量的相關(guān)性Tab.3 Correlation between serum MEG3, UCA1, and Gensini scores, CK-MB, and cTnI among AMI patients

2.4 住院期間發(fā)生心血管事件與未發(fā)生患者血漿MEG3及UCA1基因表達(dá)水平

結(jié)果顯示，AMI患者中發(fā)生心血管事件患者血漿MEG3基因表達(dá)水平高于未發(fā)生患者、血漿UCA1基因表達(dá)水平低于未發(fā)生患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 住院期間發(fā)生心血管事件與未發(fā)生患者血漿MEG3及UCA1基因表達(dá)水平Tab.4 Comparison of serum MEG3 and UCA1 between AMI patients with and without cardiovascular events during hospitalization

2.5 住院期間心血管事件與血漿MEG3、UCA1基因表達(dá)的相關(guān)性

Spearman秩相關(guān)結(jié)果顯示，AMI患者心律失常、心力衰竭、心絞痛心血管事件的發(fā)生與血漿MEG3基因表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.315、0.339、0.378、0.422，P<0.05)，與血漿UCA1基因表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.419、0.428、-0.405、-0.483，P<0.05)。見(jiàn)表5。

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)，患者入院2 h時(shí)檢測(cè)血漿MEG3、UCA1基因表達(dá)水平對(duì)AMI診斷均具有較高的價(jià)值。也初步證實(shí)了MEG3、UCA1基因可能參與AMI的發(fā)生發(fā)展，其血漿含量能輔助診斷AMI。為更深入探討MEG3、UCA1表達(dá)基因與AMI的關(guān)系，本研究亦就血漿MEG3、UCA1表達(dá)基因與AMI冠脈病變的相關(guān)性展開(kāi)研究，以評(píng)估lncRNA在AMI診療中的應(yīng)用價(jià)值。

心電圖、心肌酶譜檢查均為臨床輔助診斷AMI的常用手段，傳統(tǒng)心肌酶譜包括CK-MB、cTnI等[7]。但在AMI發(fā)病早期(發(fā)病3 h內(nèi))患者血漿含量無(wú)明顯變化，在AMI發(fā)病3 h后逐漸升高，于發(fā)病6～8 h時(shí)呈明顯升高，12h時(shí)達(dá)峰值。故心電圖、心肌酶對(duì)早期AMI診斷價(jià)值不高[8]。因此，探尋早期AMI的敏感性血漿標(biāo)記物十分必要。近年來(lái)，lncRNA已經(jīng)成為學(xué)術(shù)的研究熱點(diǎn)，在機(jī)體外周血中存在豐富且穩(wěn)定表達(dá)的lncRNA，lncRNA在表觀遺傳調(diào)控、轉(zhuǎn)錄調(diào)控及轉(zhuǎn)錄后調(diào)控等過(guò)程中均能發(fā)揮重要作用，是一種理想的基于血液的疾病監(jiān)測(cè)指標(biāo)及治療新靶點(diǎn)[9-10]。

MEG3為人正常組織中的腫瘤抑制因子，不僅能參與內(nèi)皮細(xì)胞增殖、血管形成過(guò)程，還能刺激心肌細(xì)胞損傷、促進(jìn)心臟纖維化，介導(dǎo)心臟重構(gòu)及細(xì)胞凋亡過(guò)程[11-12]。3組血漿MEG3基因表達(dá)水平比較，低分組<中分組<高分組(P<0.05)。提示冠脈狹窄病變嚴(yán)重的患者，血漿MEG3表達(dá)水平越高，這可能與MEG3具有刺激心肌細(xì)胞損傷及促進(jìn)心臟纖維化作用，在冠脈狹窄嚴(yán)重時(shí)，參與心臟重構(gòu)過(guò)程而大量表達(dá)有關(guān)[13-14]。本研究發(fā)現(xiàn)，血漿MEG3基因表達(dá)水平不僅與CK-MB、cTnI水平呈正相關(guān)，也與Gensini評(píng)分呈正相關(guān)(P<0.05)。究其原因可能與MEG3能參與心肌損傷過(guò)程，在AMI發(fā)病早期即可大量表達(dá)，并隨狹窄、缺血缺氧的嚴(yán)重程度的升高表達(dá)增加有關(guān)[15-16]。因此，MEG3在評(píng)估早期AMI冠脈狹窄情況中，具有重要作用。有文獻(xiàn)報(bào)道，UCA1是最初在膀胱移行細(xì)胞癌中發(fā)現(xiàn)的lncRNA，也是膀胱癌潛在的生物標(biāo)記物，具有心臟供能及心功能保護(hù)作用，可作為AMI新型標(biāo)記物[17-18]。本研究也發(fā)現(xiàn)，血漿UCA1基因表達(dá)水平與CK-MB、cTnI水平呈負(fù)相關(guān)，且與Gensini評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。該結(jié)果與隨著冠脈狹窄嚴(yán)重程度的增加，參與心臟供能過(guò)程的UCA1增多，使UCA1大量消耗，導(dǎo)致血漿表達(dá)量下降有關(guān)[19-20]。

此外，AMI發(fā)病后，心肌血供急劇減少，甚至中斷，可導(dǎo)致大面積心肌壞死，而易引起心力衰竭、猝死等心血管事件，嚴(yán)重影響預(yù)后。因此，患者住院期間的心血管事件也是臨床關(guān)注的重點(diǎn)之一[21-22]。本研究發(fā)現(xiàn)，AMI患者心律失常、心力衰竭、心絞痛等心血管事件的發(fā)生與血漿MEG3基因表達(dá)呈正相關(guān)，與血漿UCA1基因表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。提示，血漿MEG3、UCA1基因表達(dá)水平與AMI患者住院期間心血管事件的發(fā)生存在一定聯(lián)系，對(duì)評(píng)估患者預(yù)后有積極意義[23-24]。還有學(xué)者提出，血漿MEG3基因等標(biāo)記物與AMI患者短期預(yù)后也有一定相關(guān)性[25]。然而，本研究缺乏對(duì)AMI患者的隨訪觀察，未對(duì)血漿MEG3、UCA1基因表達(dá)水平與患者近遠(yuǎn)期預(yù)后情況作進(jìn)一步分析，也是本研究存在的缺陷。因此，為探析血漿MEG3、UCA1基因表達(dá)與AMI預(yù)后的關(guān)系，還需后續(xù)延長(zhǎng)隨訪時(shí)間的深入研究。

綜上所述，血漿MEG3、UCA1基因表達(dá)水平與AMI患者冠脈病變嚴(yán)重程度及住院期間心血管事件發(fā)生情況具有相關(guān)性，有望成為評(píng)估AMI病情進(jìn)展的新指標(biāo)。