芽胞桿菌BvR001對大麗輪枝菌抑制效果研究

紀曉彬 王丹 劉政 李冉 宋健 張丹丹 陳捷胤 戴小楓 林克劍

摘要 ：為研發(fā)綠色、安全、高效的作物黃萎病生物防治產(chǎn)品，本研究以生防菌株BvR001為研究對象，通過對黃萎病菌的抑菌效果測定、可濕性粉劑研制、在寄主根際的定殖能力與防效測定，明確該菌株對黃萎病具有防控效果。gyrB序列檢測和系統(tǒng)發(fā)育樹構建分析表明，該菌株屬于芽胞桿菌屬，并且與貝萊斯芽胞桿菌Bacillus velezensis進化關系最近，推測其可能是貝萊斯芽胞桿菌;平板對峙試驗表明，該菌對2種基因型（落葉型和非落葉型）大麗輪枝菌Vd991和D08047菌落擴展的抑制率分別為78.6%和85%;研發(fā)了該菌的可濕性粉劑配方（WPBvR001）：吸附量為1.2 L/kg的發(fā)酵液硅藻土母粉87%、十二烷基磺酸鈉5%、木質(zhì)素磺酸鈉5%、羧甲基纖維素鈉2%、維生素C 1%，該配方得到的制劑活芽胞量為7.65×108 cfu/g、潤濕時間38 s、懸浮率為62.16%、雜菌率為0、pH 6.89±0.02、細度通過率（≤45 μm）99.99%、干燥減量0.67%;利用煙草和棉花測試發(fā)現(xiàn)，該菌劑對寄主植物安全無毒，且能有效定殖于寄主根際，顯著降低了黃萎病菌繁殖擴展，對黃萎病具有良好的防效。

關鍵詞 ：芽胞桿菌; 可濕性粉劑; 黃萎病; 生物防治

中圖分類號：

S 476. 19文獻標識碼： A

DOI： 10.16688/j.zwbh.2019568

Inhibitory efficacy of BvR001 against Verticillium dahliae

JI Xiaobin1，3， WANG Dan2， LIU Zheng3， LI Ran2， SONG Jian2，

ZHANG Dandan2， CHEN Jieyin2， DAI Xiaofeng2， LIN Kejian1，2，3*

（1. College of Agriculture，Key Laboratory of Oasis Agricultural Pest Management and Plant Protection

Resources Utilization， Xinjiang Uygur Autonomous Region， Shihezi University， Shihezi 832003， China;

2. Institute of Plant Protection， Chinese Academy of Agricultural Sciences， Beijing 100193， China;

3. Institute of Plant Protection， Xinjiang Academy of Agricultural and Reclamation Sciences， Shihezi 832000， China）

Abstract ：To develop safe and effective biological control measures for Verticillium wilt， a series of studies on strain BvR001 were conducted， including its taxonomic characterization， colonization of tobacco rhizosphere， its efficacy for controlling Verticillium wilt and development of a wettable powder （WPBvR001） formulation to facilitate field application of the product. These studies confirmed that BvR001 could control Verticillium wilt on host plants such as cotton and tobacco. Gyrase B subunit gene gyrB sequence and the phylogenetic analyses showed that this strain was most closely related to Bacillus velezensis. Coinoculation of BvR001 and two strains of Verticillium dahliae （defoliating strain Vd991 and nondefoliating strain D08047） on media separately showed 78.6% and 85% inhibition of V.dahliae， respectively. The product WPBvR001 displayed no phytotoxicity， colonized the plant rhizosphere efficiently， and resulted in significant reduction in the wilt incidence and severity on tobacco and cotton. Optimization of the biocontrol formulation of strain BvR001 was accomplished by mixing diatomaceousearth 87%， sodium dodecyl sulfate （SDS） 5%， sodium lignosulfonate 5%，

carboxymethyl cellulose sodium 2%， and vitamin C 1%. The product WPBvR001 contained dehydrated 7.65×108 cfu/g of BvR001 with 99.9% viability and 0 other microorganisms， fineness pass （≤45 μm）， wetting time of 38 s， suspension rate of 62.16%， dry decrement of 0.67%， and a pH of 6.89±0.02. Our study demonstrated that the biocontrol strain BvR001 is a valuable new product for the Verticillium wilt management in crops.

Key words ：Bacillus spp.; wettable powder; Verticillium wilt; biological control

黃萎病是由大麗輪枝菌Verticillium dahliae Kleb.引起的典型土傳維管束真菌病害，嚴重威脅農(nóng)作物生產(chǎn)安全。大麗輪枝菌寄主范圍十分廣泛，在我國自然病圃和人工病圃中大麗輪枝菌可感染38科600多種植物，除棉花外，茄科、豆科、葫蘆科、菊科、唇形科和莧科等科的多種植物亦可受害[12]，每年給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來巨大損失。黃萎病對棉花生產(chǎn)造成的危害尤為嚴重，是棉花生產(chǎn)上的頭號病害，受害棉株葉片變黃枯萎，蕾鈴脫落，棉鈴變少，一般減產(chǎn)20%左右，重者達60%以上[3]。化學農(nóng)藥是防控黃萎病的有效方法之一，但化學藥劑防治存在環(huán)境污染、殘留、病原抗藥性等問題，因此開發(fā)人畜無害、對環(huán)境友好的微生物制劑對黃萎病防控具有重要意義。

目前，已發(fā)現(xiàn)多種生防菌對大麗輪枝菌具有良好的抑制作用，如特基拉芽胞桿菌Bacillus tequilensis XT14對馬鈴薯黃萎病的防效可達到60%以上[4];室內(nèi)防效試驗顯示，多黏類芽胞桿菌Paenibacillus polymyxa SX3能夠延遲病害的發(fā)生，同時對棉花具有一定的促生作用[5];解淀粉芽胞桿菌B.amyloliquefaciens PHODB35對作物黃萎病具有良好的防效[6]。還有一些內(nèi)生真菌對大麗輪枝菌具有拮抗作用，研究較多的是木霉屬，如哈茨木霉Trichoderma harzianum、綠色木霉T.viride、棘孢木霉T.asperellum等均能夠有效防治黃萎病菌對番茄、橄欖等的危害，并伴有促生作用[78]。此外，有研究發(fā)現(xiàn)，一些非致病性鐮刀菌對大麗輪枝菌有一定的抑制作用，比如尖鐮孢Fusarium oxysporum F2能夠在茄子根莖有效定殖，并能減少大麗輪枝菌在根部的定殖，從而減輕黃萎病的發(fā)生[9]。目前也有一些生防菌制備成可濕性粉劑被應用于生產(chǎn)實踐，如芽胞桿菌Paenibacillus alvei K165的生防制劑拌土后能有效降低茄子黃萎病的發(fā)病癥狀[10];枯草芽胞桿菌Bacillus subtilis在棉花、向日葵等作物黃萎病的防控上也取得了顯著的效果[1112]。此外，有研究表明，由于自然環(huán)境的多樣性及復雜性，多種生防菌按一定比例混合使用，能夠起到比單獨使用一種生防菌更好的效果[1314]，如特基拉芽胞桿菌C9和鞘氨醇桿菌Sphingobacterium A1復配使用不僅能夠高效抑制黃萎病菌的生長，還能激活寄主植物的防御反應，從而顯著提高寄主棉花對大麗輪枝菌的抗性[15]。

我國黃萎病危害尤為嚴重，特別是近年農(nóng)業(yè)種植結構調(diào)整加劇了黃萎病病原的變異，亟須篩選新的對黃萎病具有防控效果的生防菌株并進行防控效果評價，為最終在生產(chǎn)上防控黃萎病提供理論和數(shù)據(jù)支撐。為此，本研究以分離自棉花、可顯著抑制大麗輪枝菌生長的生防菌株BvR001為研究對象，通過對不同基因型（落葉型和非落葉型）大麗輪枝菌的抑菌效果測定、可濕性粉劑的制備以及制劑對煙草和棉花黃萎病的抑制效果測定等試驗，評價該菌株制劑對黃萎病的防效，為該菌劑后期配方優(yōu)化及在黃萎病防治中的推廣應用提供科學依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

供試菌株：供試的大麗輪枝菌包括兩種基因型，分別為強致病力落葉型Vd991（本實驗室保存）和中等致病力非落葉型D08047（來自中國農(nóng)業(yè)科學院棉花研究所）。芽胞桿菌BvR001分離自新疆黃萎病棉田生長正常的棉株。

供試培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）、LB（LuriaBertani）培養(yǎng)基。

試劑：硅藻土（中位粒徑22.2 μm）、十二烷基磺酸鈉、木質(zhì)素磺酸鈉、羧甲基纖維素鈉、維生素C、植物DNA快速提取試劑盒EASYspin（原平皓，北京）、TransStart Top Green qPCR SuperMix（全式金，北京）。

主要儀器：鼓風式干燥機、氣流粉碎機。

供試寄主植物：煙草Nicotiana benthamiana，棉花Gossypium hirsutum 品種為‘軍棉1號，均選取長勢一致、狀態(tài)良好、生長3周的幼苗作為測試對象。

1.2 微生物培養(yǎng)

將-80℃保存的BvR001劃線于LB固體培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)活化，挑取單菌落接種于LB液體培養(yǎng)基，37℃、180 r/min過夜培養(yǎng)作為種子液，再以1%的接種量轉接于新鮮的LB液體培養(yǎng)基中，37℃、180 r/min條件下培養(yǎng)48 h得到發(fā)酵液。

分別取3 μL保存于-80℃的大麗輪枝菌Vd991和D08047，接種于PDA固體培養(yǎng)基上，25℃恒溫培養(yǎng)3～7 d，挑取菌落接種于完全液體培養(yǎng)基（complete medium， 酵母提取物6 g/L，酸水解酪蛋白6 g/L，蔗糖10 g/L）中，25℃、150 r/min培養(yǎng)5～7 d，過濾收集孢子，并將孢子濃度調(diào)至107個/mL備用。

1.3 菌株BvR001分子鑒定

通過PCR擴增gyrB（DNA gyrase subunit B gene）基因序列[16]。擴增引物序列如下：

UP1：5′GAAGTCATCATGACCGTTCTGCA（C/T）GC（A/G/C/T）GG（A/G/C/T）AA（A/G）TT（C/T）GA3′;UP2R：5′AGCAGGGTACGGATGTGCGAGCC（A/G）TC（A/G/C/T）AC（A/G）TC（A/G/C/T）GC（A/G）TC（A/G/C/T）GTCAT3′。

擴增體系為30 μL：DNA模板1 μL，gyrB基因序列通用簡并引物各1 μL，2×PCR Mix 15 μL，ddH2O 12 μL。擴增條件：95℃預變性5 min;94℃變性1 min，60℃退火1 min，72℃延伸2 min，共30次循環(huán);最后72℃延伸10 min。

1.4 菌株BvR001抑菌活性測定

采用5 mm打孔器打取大麗輪枝菌Vd991和D08047菌餅，置于90 mm的PDA平板中心，28℃恒溫培養(yǎng)5 d。在距離菌落邊緣15 mm處接種芽胞桿菌BvR001，于28℃恒溫繼續(xù)培養(yǎng)7 d，觀察菌落生長情況，測量大麗輪枝菌菌落直徑以及生防菌菌落邊緣與大麗輪枝菌菌落邊緣的垂直距離，即抑菌帶距離，計算生防菌BvR001對Vd991和D08047菌落擴展的抑制率。計算公式如下：

抑菌率=抑菌帶距離/（12 d對照菌落半徑-5 d對照菌落半徑）×100%。

1.5 生防菌BvR001可濕性粉劑制備

將種子液以1%的量加入新鮮LB液體培養(yǎng)基中，37℃、180 r/min條件下培養(yǎng)48 h得到發(fā)酵液。向1 kg載體硅藻土中添加BvR001發(fā)酵液，直至硅藻土完全濕潤不再吸附，將得到的混合物鼓風干燥后經(jīng)氣流粉碎，得到吸附量為1.2 L/kg的母粉。向母粉中添加不同比例的潤濕劑（十二烷基磺酸鈉、木質(zhì)素磺酸鈉）、分散劑（羧甲基纖維素鈉）等助劑混勻后經(jīng)氣流粉碎機粉碎，得到可濕性粉劑（wettable powder）WPBvR001。

1.6 可濕性粉劑質(zhì)量檢測

制劑中活芽胞含量參照NY/T 2293.12012[17]中描述的方法，潤濕時間參照國標GB/T 54512001[18]中的方法測定，懸浮率參照國標GB/T 148252006[19]中的方法測定，雜菌率參照NY/T2293.12012[17]中的方法測定，pH值按國標GB/T16011993[20]中的方法測定，細度按國標GB/T 161501995[21]中的方法測定，干燥減量參照NY/T2293.12012[17]中的方法測定。

1.7 可濕性粉劑活性測定

稱取1 g BvR001可濕性粉劑WPBvR001溶于100 mL無菌水中，混勻配制成粉劑懸液備用，同時以商業(yè)化芽胞桿菌可濕性粉劑WPBS1作為對照。選取長勢一致的健康煙草幼苗以及棉花幼苗若干，均分成6組，每組200 mL懸液，處理1接種濃度為107個/mL的Vd991孢子懸浮液;處理2先澆灌商業(yè)化可濕性粉劑WPBS1懸液，7 d后再次接種107個/mL的Vd991孢子懸浮液;處理3只澆灌商業(yè)化可濕性粉劑WPBS1懸液，作為處理2的對照;處理4為先澆灌可濕性粉劑WPBvR001，7 d后再次接種107個/mL的Vd991孢子懸浮液;處理5只澆灌可濕性粉劑WPBvR001懸液，作為處理4的對照;剩余一組作為空白對照（Mock），只定期澆水。接種15 d后進行病情觀察。使用苗期 5 級分級法進行調(diào)查，0級：植株未表現(xiàn)出黃萎病癥狀;1級：1～2片子葉出現(xiàn)輕微黃萎病癥狀;2級：1片真葉出現(xiàn)輕微黃萎病病癥;3級：2片及以上真葉出現(xiàn)明顯病癥;4級整株出現(xiàn)嚴重黃萎病病癥或枯死。

病情指數(shù)=∑（各級病株數(shù)×該病級值）/（調(diào)查總株數(shù)×最高級值）×100。

1.8 煙草和棉花莖基部大麗輪枝菌定殖檢測

分別取各處理煙草、棉花的莖基部（根莖結合部位），表面清洗干凈后剪碎混勻，液氮速凍后保存于-80℃?zhèn)溆?。各處理?00 mg的根莖結合部組織并提取基因組DNA，將各樣品DNA濃度調(diào)至100 ng/μL，分別以煙草NbEF1α、棉花管家基因18S為內(nèi)參基因，大麗輪枝菌的延伸因子VdEF1α作為靶標基因，通過定量PCR（qPCR）檢測大麗輪枝菌靶標基因VdEF1α的相對值，即大麗輪枝菌的相對含量。定量引物序列見表1。

反應體系20 μL：DNA模板1 μL，引物各0.6 μL，2×qPCR SuperMix 10 μL，ddH2O 7.8 μL。

1.9 煙草根部生防菌BvR001的測定

以煙草根際生防菌定殖檢測為例，分別取各處理煙草的根部，表面消毒后剪碎混勻，分別稱取1 g各處理的根部組織，加10 mL無菌水研磨，濾掉植物碎渣，取上清液進行梯度稀釋涂板，次日統(tǒng)計BvR001菌落數(shù)。

1.10 數(shù)據(jù)處理

應用MEGA 6構建系統(tǒng)發(fā)育樹[22]，采用SPSS 23軟件對試驗數(shù)據(jù)進行方差分析，采用Microsoft Excel 2016及Adobe Photoshop CC作圖。

2 結果與分析

2.1 菌株BvR001的gyrB序列分析

通過PCR擴增獲得BvR001的gyrB基因序列長度為1 139 bp，將該序列在NCBI進行BLAST比對，結果顯示其與貝萊斯芽胞桿菌B.velezensis BH21（GenBank： KT889364）的gyrB序列一致性達99%。選取大腸桿菌Escherichia coli ATCC11775的gyrB基因序列（GenBank：AB083821）為外群，利用MEGA 6軟件，采用鄰接法（neighborjoining）構建系統(tǒng)發(fā)育樹。結果表明，菌株BvR001與貝萊斯芽胞桿菌聚在一個分支（圖1），以上結果表明，該生防菌株屬于芽胞桿菌屬，并且與貝萊斯芽胞桿菌進化關系最近，推測其可能是貝萊斯芽胞桿菌。

2.2 菌株BvR001抑菌活性測定

平板抑菌結果表明，BvR001對2種基因型大麗輪枝菌（強致病力落葉型Vd991和中等致病力非落葉型D08047）的菌落擴展均有顯著的抑制作用（圖2a）。進一步通過測量抑菌帶距離，統(tǒng)計結果發(fā)現(xiàn)，BvR001對大麗輪枝菌有顯著的抑制作用（P<0.01）（圖2b），計算得到生防菌BvR001對Vd991和D08047菌落擴展的抑制率分別可達78.6%和85%。

2.3 可濕性粉劑制備及質(zhì)量檢測

對添加不同比例的十二烷基磺酸鈉、木質(zhì)素磺酸鈉、羧甲基纖維素鈉及維生素C的母粉的潤濕性及懸浮率進行測定，結果表明，芽胞桿菌BvR001可濕性粉劑（WPBvR001）優(yōu)化制備方法為：向載體硅藻土中添加搖瓶發(fā)酵液直至硅藻土完全濕潤不再吸附，將得到的混合物鼓風干燥后經(jīng)氣流粉碎得到母粉，再加入助劑十二烷基磺酸鈉5%、木質(zhì)素磺酸鈉5%、羧甲基纖維素鈉2%以及紫外保護劑維生素C 1%，經(jīng)氣流粉碎機混合均勻。該配方得到的制劑活芽胞量為7.65×108 cfu/g，潤濕時間38 s，懸浮率為62.16%，雜菌率為0，pH值為6.89±0.02，細度通過率（≤45 μm）99.99%，干燥減量0.67%（表2）。

2.4 可濕性粉劑活性測定

以煙草和棉花為測試對象對可濕性粉劑WPBvR001對黃萎病的防效進行測定。結果顯示，單獨接種Vd991的處理組煙草植株弱小，株高增長緩慢或停滯，葉片發(fā)黃枯萎至死亡，莖基部剖面圖顯示莖基部維管束褐化，呈現(xiàn)出典型的黃萎病癥狀;生防菌劑WPBvR001+Vd991及商業(yè)化生防菌劑WPBS1+Vd991兩組處理下煙草的長勢良好，和空白對照組基本一致，表現(xiàn)出良好的黃萎病防控效果;單獨接種生防菌劑WPBvR001的煙草長勢正常，莖基部維管束未見褐化（圖3a和3b）。對棉花黃萎病的防效也得到類似結果，與商業(yè)化生防菌劑WPBS1相似，可濕性粉劑WPBvR001預處理的棉花幼苗對大麗輪枝菌表現(xiàn)出良好抗性，葉片黃化脫落明顯減輕，維管束褐化得到緩解（圖3c和3d），說明WPBvR001對黃萎病的防效與商業(yè)化菌劑WPBS1相當。

對不同處理條件下煙草和棉花的發(fā)病情況進行統(tǒng)計，結果顯示，生防菌劑WPBvR001+Vd991及商業(yè)化生防菌劑WPBS1+Vd991兩組處理下煙草和棉花的病情指數(shù)與單獨接種Vd991相比，具有顯著性差異（P<0.05），進一步說明生防菌劑WPBvR001對黃萎病具有良好的防效（表3）。

2.5 煙草和棉花莖基部大麗輪枝菌定殖檢測

采用qPCR檢測大麗輪枝菌Vd991靶基因Verticillium elongation factor 1α（EF1α）在煙草和棉花莖基部的相對拷貝數(shù)，并以此表示大麗輪枝菌在寄主根部的生物量[24]，進一步明確可濕性粉劑WPBvR001對黃萎病的防效。結果表明，單獨接種大麗輪枝菌Vd991的煙草莖基部中Vd991的生物量顯著高于同時接種生防菌劑（WPBS1和WPBvR001）和大麗輪枝菌的試驗組（α=0.01），其中單獨接種Vd991的煙草莖基部菌體生物量分別是經(jīng)商業(yè)化生防菌劑WPBS1和本試驗可濕性粉劑WPBvR001處理后的14倍和25倍（圖4）。對棉花的測試結果類似，單獨接種Vd991的棉花莖基部的生物量顯著高于WPBS1+Vd991以及WPBvR001+Vd991處理的棉花（α=0.01），分別為7倍和4倍（圖4）。上述結果說明可濕性粉劑WPBvR001能夠有效防止大麗輪枝菌在煙草和棉花莖基部的定殖，進而達到防控黃萎病的作用。同時，上述結果也顯示可濕性粉劑WPBvR001對煙草和棉花黃萎病具有和商業(yè)化生防菌劑WPBS1相當?shù)姆佬А?/p>

2.6 煙草與棉花根部組織生防菌BvR001定殖檢測

以煙草與棉花為例對生防菌BvR001在根部定殖情況進行檢測，通過稀釋涂板法，統(tǒng)計不同處理煙草和棉花根部組織內(nèi)生防菌BvR001定殖情況。結果顯示，與商業(yè)化生防菌劑WPBS1類似，單獨接種可濕性粉劑WPBvR001和既接種可濕性粉劑WPBvR001又接種病原菌的處理，煙草和棉花根部內(nèi)生的生防菌菌落數(shù)沒有明顯差異，菌落數(shù)均在105 cfu/g左右，隨機挑選平板中菌落進行測序分析，結果顯示測序菌落均為生防菌BvR001，這一結果表明可濕性粉劑WPBvR001能夠有效定殖于煙草和棉花根系，并且病原菌對生防菌的定殖也沒有顯著影響（圖5）。

3 討論

芽胞桿菌屬的不同種之間親緣關系極為相近，16S rDNA序列很難區(qū)分，比如蘇云金桿菌Bacillus thuringiensis和蠟樣芽胞桿菌B.cereus的16S rDNA序列僅有幾個堿基的差異[23]，而gyrB基因進化速率快且不發(fā)生水平轉移，有較好的分辨率[25]。本試驗利用該基因序列對芽胞桿菌BvR001進行分類鑒定，可初步將其與其他芽胞桿菌區(qū)分開，通過系統(tǒng)發(fā)育樹分析推斷本研究的芽胞桿菌BvR001為貝萊斯芽胞桿菌。關于該菌株準確的種屬分類尚需進一步的分子驗證。

本研究還通過平板對峙試驗檢測了BvR001對不同基因型大麗輪枝菌Vd991和D08047菌落生長的抑制效果，結果表明BvR001具有潛在的防控黃萎病應用價值?？蓾裥苑蹌┦俏⑸镛r(nóng)藥中的主要劑型，該劑型生產(chǎn)成本低，應用范圍廣。有研究表明在可濕性粉劑研制過程中氣流粉碎的方法對活芽胞含量的影響十分微小，增加粉劑細度則更有利于吸收粉劑，大大縮短潤濕時間，提高懸浮率[26]。本試驗也采取氣流粉碎方法對各組分進行混合，最終制劑細度為99.99%，幾乎完全通過45 μm篩選篩，潤濕時間也大大縮短。初步得到的生防菌劑WPBvR001的活芽胞數(shù)為7.65×108 cfu/g。后續(xù)研究為了在實際應用中達到低劑量、高防效的目的，還需進一步提高制劑活芽胞數(shù)，例如可以對BvR001菌株發(fā)酵條件進行優(yōu)化，篩選該菌株最佳發(fā)酵條件。如研制生防菌B991可濕性粉劑時首先對其發(fā)酵條件進行了優(yōu)化，通過篩選得到菌量為100億芽胞桿菌cfu/mL的菌量[27]，為后期得到更多生物量的生防菌劑提供了基礎保障。對WPBvR001各項指標進行測定發(fā)現(xiàn)，除懸浮率偏低外（懸浮率為62.16%，低于國標值≥70%），其余各指標均符合國標值。針對懸浮率不足問題，后期應進一步選擇多種助劑進行篩選，尤其是對分散劑的選擇。

本研究以煙草及棉花幼苗為測試植物，對初步得到的可濕性粉劑WPBvR001對黃萎病的防效進行了測定，單獨接種生防菌劑WPBvR001的煙草和棉花均能正常生長，莖基部維管束未見褐化，說明該生防菌對植物安全無毒，為進一步確定其對人畜也安全無毒，后期還需進一步通過一系列毒理學試驗來確保其安全性，比如急性經(jīng)口、急性經(jīng)皮毒性試驗，急性皮膚刺激試驗等。單獨接種Vd991的處理組煙草和棉花幼苗的植株弱小，株高增長緩慢或停滯，葉片發(fā)黃枯萎至死亡，莖基部維管束褐化，而接種生防菌劑WPBvR001+Vd991及商業(yè)化的生防菌劑WPBS1+Vd991兩組處理下煙草和棉花的長勢良好，和空白對照組基本一致，說明WPBvR001對室內(nèi)煙草和棉花黃萎病的發(fā)生具有良好的防效，且效果與商業(yè)化菌劑WPBS1相當。同時，經(jīng)生防菌劑處理的煙草和棉花的根莖結合部位組織僅能檢測到少量的大麗輪枝菌，對接種WPBvR001的煙草根際生防菌的檢測發(fā)現(xiàn)，生防菌能夠在根際有效定殖，并且不受后來入侵的病原菌大麗輪枝菌制約，說明BvR001菌株具有良好的生防應用前景。

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（責任編輯：田 喆）