復(fù)方扶芳藤合劑和復(fù)方扶芳藤膠囊劑生產(chǎn)后藥渣中有效成分的含量測定

劉巧明，奉建芳，梁健欽,林億龍，吳玉強

（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西南寧530001；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)制藥廠，廣西南寧530023）

隨著中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的不斷改革、發(fā)展，我國已形成規(guī)模龐大的中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)體系[1]，藥渣年產(chǎn)量早已超過3 000萬噸[2?3]。在中藥渣綜合利用方面，現(xiàn)主要模式有中藥渣培養(yǎng)基（供生產(chǎn)食用菌用）、中藥渣有機(jī)肥、中藥渣飼料添加劑等，其他新型綜合利用藥渣模式（如中藥渣可開發(fā)作為重金屬吸附劑、能源物質(zhì)、工程材料、有效成分再提取等）處于應(yīng)用研究階段[4?5]。

復(fù)方扶芳藤合劑和復(fù)方扶芳藤膠囊是廣西中醫(yī)藥大學(xué)制藥廠的特色品種，也是廣西特色中藥產(chǎn)品，合劑收載在2020年版《中國藥典》，目前生產(chǎn)后的藥渣采用填埋的方式處理。由于兩個產(chǎn)品市場需求大，生產(chǎn)量大，且處方中含有人參、黃芪等貴重、補益類藥材，藥渣填埋丟棄造成了極大的資源浪費。藥渣中指標(biāo)成分、有效成分含量高低是衡量藥渣進(jìn)一步開發(fā)利用價值大小的主要因素。復(fù)方扶芳藤合劑組成為紅參、扶芳藤、黃芪，復(fù)方扶芳藤膠囊組成為人參、扶芳藤、黃芪；因此，本文通過測定復(fù)方扶芳藤合劑和復(fù)方扶芳藤膠囊人參藥渣中人參皂苷Re、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1，黃芪藥渣中毛蕊異黃酮葡萄糖苷、黃芪甲苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，為掌握人參、紅參、黃芪藥渣中指標(biāo)成分的積累規(guī)律和為更好綜合利用藥渣提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

LC?20A型高效液相色譜儀（配備SPD?M20A型UV檢測器，日本島津公司）；Waters e2695型高效液相色譜儀（配備2424型蒸發(fā)光散射檢測器，美國Waters公司）；SQP型電子分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司）；TGL?16G型離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）。

1.2 試藥

D101型大孔吸附樹脂（批號為HG2?885?76，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所）；人參皂苷Rg1對照品（批號為110703?201832）、人參皂苷Re對照品（批號為110754?201626）、人 參 皂 苷Rb1對 照 品（批 號 為110704?201726）、黃 芪 甲 苷 對 照 品（批 號 為110781?201717）、毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品（批號為111920?201606）均購自中國食品藥品檢定研究院；紅參藥渣（來自復(fù)方扶芳藤合劑生產(chǎn)后的藥渣）、人參藥渣（來自復(fù)方扶芳藤膠囊生產(chǎn)后的藥渣）、黃芪藥渣（來自復(fù)方扶芳藤合劑和來自復(fù)方扶芳藤膠囊生產(chǎn)后的藥渣），均由廣西中醫(yī)藥大學(xué)制藥廠提供；乙腈、甲醇（色譜純，F(xiàn)isher）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 人參藥渣和紅參藥渣中人參皂苷Rb1、Rg1、Re的測定[6]

2.1.1 色譜條件 色譜柱為XB?C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動相為乙腈（A）?水（B）梯度洗脫（0～35 min，19%A；35～55 min，19%→29%A；55～70 min，29%A；70～100 min，29%→40%A）；流速為1.0 mL/min；柱溫為30℃；檢測波長為203 nm；進(jìn)樣量為10μL。理論板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計算應(yīng)不低于6 000。由圖1可見，在該色譜條件下，紅參藥渣供試品溶液、人參藥渣供試品溶液和混合對照品溶液的HPLC圖譜中，人參皂苷Rb1、Rg1、Re分離度均符合要求。

2.1.2 對照品溶液的制備 分別精密稱取人參皂苷Rg1對照品0.002 1 g、人參皂苷Re對照品0.003 0 g、人參皂苷Rb1對照品0.002 1 g，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，制成每1 mL中含人參皂苷Rg10.21 mg、人 參 皂 苷Re 0.3 mg、人 參 皂 苷Rb10.21 mg的混合溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備 分別按2020年版《中國藥典》紅參、人參藥材中“含量測定”項中“供試品溶液的制備”操作，制得紅參藥渣供試品溶液和人參藥渣供試品溶液。

2.1.4測定方法 分別精密吸取混合對照品溶液、供試品溶液，注入液相色譜儀進(jìn)行測定。按外標(biāo)法計算紅參藥渣和人參藥渣中人參皂苷Rg1、Re、Rb1的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。2020年版《中國藥典》規(guī)定紅參與人參中人參皂苷Rg1和人參皂苷Re的總量限度分別為≥0.25%、≥0.30%，人參皂苷Rb1的限度均為≥0.20%。

圖1 人參皂苷混合對照品（A）、紅參藥渣供試品溶液（B）和人參藥渣供試品溶液（C）的HPLC圖譜Figue 1 HPLC chromatograms of ginsenosides mixed stan?dards(A),red ginseng residue(B)and ginseng residue(C)

由見表1可見，與《中國藥典》規(guī)定的限度相比，紅參藥渣和人參藥渣中，人參皂苷Rb1質(zhì)量分?jǐn)?shù)均高于《中國藥典》限度規(guī)定；在5批次紅參藥渣中有4批次的人參皂苷Rg1+人參皂苷Re總量高于《中國藥典》限度，而在人參藥渣中均低于《中國藥典》限度；在人參皂苷Rg1+人參皂苷Re總量最低的GS10樣品中，總量也能達(dá)到《中國藥典》限度的33%；紅參藥渣中人參皂苷Rb1平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)和人參皂苷Rg1+人參皂苷Re的總量均顯著高于人參藥渣（P＜0.005）。

2.2 黃芪藥渣中黃芪甲苷的測定[6]

2.2.1 色譜條件 色譜柱為XB?C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm），以乙腈?水（體積比32∶68）為流動相，流速為1.0 mL/min，柱溫為40℃，蒸發(fā)光散射檢測器檢測漂移管溫度為60℃、載氣壓力為206.85 kPa。理論板數(shù)按黃芪甲苷峰計算應(yīng)不低于4 000。由圖2可見，在該色譜條件下，黃芪甲苷分離度符合要求，無干擾。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取黃芪甲苷對照品0.012 5 g，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，制成每1 mL含黃芪甲苷0.5 mg的溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 按2020年版《中國藥典》一部黃芪藥材中“含量測定?黃芪甲苷”項中“供試品溶液的制備”操作，制得黃芪藥渣供試品溶液。

2.3 黃芪藥渣中毛蕊異黃酮葡萄糖苷的測定[6]

2.3.1 色譜條件 色譜柱為XB?C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動相為乙腈（A）?0.2%甲酸溶液（B），梯 度 洗 脫（0～20 min，20%→40%A；20～30 min，40%A）；流速為1.0 mL/min；柱溫為30℃；檢測波長為260 nm；進(jìn)樣量為10μL。理論板數(shù)按毛蕊異黃酮葡萄糖苷峰計算應(yīng)不低于3 000。從圖3可見，在該色譜條件下，毛蕊異黃酮葡萄糖苷分離度符合要求，無干擾。

表1 紅參藥渣與人參藥渣中人參皂苷（Rg1、Re、Rb1）的測定結(jié)果Table 1 Determination results of ginsenoside(Rg1,Re,Rb1)in red ginseng and ginseng residue

圖2 黃芪甲苷對照品（A）和黃芪藥渣（B）的HPLC圖Figue 2 HPLC of astragaloside(A)and astragalus residue(B)

圖3 毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品（A）與黃芪藥渣（B）的HPLC色譜圖Figue 3 HPLC chromatograms of calycosin glycoside（A）and astragalus residue（B）

2.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品0.004 8 g，置100 mL量瓶中，加甲醇至刻度，制成每1 mL含毛蕊異黃酮葡萄糖苷48μg的溶液。

2.3.3 供試品溶液的制備 按2020年版《中國藥典》黃芪藥材中“含量測定?毛蕊異黃酮葡萄糖苷”項中“供試品溶液的制備”操作，制得黃芪藥渣供試品溶液。

2.3.4 測定方法 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液，注入液相色譜儀進(jìn)行測定。按外標(biāo)法計算黃芪藥渣中毛蕊異黃酮葡萄糖苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。2020年版《中國藥典》規(guī)定黃芪中黃芪甲苷和毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量限度分別為≥0.040%、≥0.020%。

2.4 黃芪藥渣中黃芪甲苷與毛蕊異黃酮葡萄糖苷的測定結(jié)果

由表2可見，10批次黃芪藥渣中黃芪甲苷與毛蕊異黃酮葡萄糖苷的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為(0.027±0.004)%、(0.012±0.005)%，均低于《中國藥典》限度，但仍然達(dá)到萬分之一及以上的水平。來源于復(fù)方扶芳藤合劑和復(fù)方扶芳藤膠囊生產(chǎn)后的兩組黃芪藥渣，黃芪甲苷與毛蕊異黃酮葡萄糖苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P值分別為0.21、0.85）

3 討論

本文結(jié)果顯示有4批次紅參藥渣人參皂苷（人參皂苷Re、人參皂苷Rb1和人參皂苷Rg1）質(zhì)量分?jǐn)?shù)均高于《中國藥典》規(guī)定的紅參藥材的含量限度，人參藥渣和黃芪藥渣指標(biāo)成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)均低于相應(yīng)原藥材的含量限度，但也能保持在萬分之一的水平上。以上結(jié)果說明紅參藥渣、人參藥渣和黃芪藥渣中相應(yīng)指標(biāo)成分含量較高，具有再綜合利用的潛力；人參、黃芪原藥材中有效成分大部分經(jīng)提取后轉(zhuǎn)移至制劑中，導(dǎo)致藥渣中含量降低。同時，由于紅參藥渣指標(biāo)成分含量高于《中國藥典》限度，藥廠相關(guān)部門要及時、妥善、按GMP要求處理藥渣，嚴(yán)防紅參藥渣冒充紅參飲片回流藥品市場。

表2 黃芪藥渣中黃芪甲苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量Table 2 Contents of astragaloside and calycosin glycoside in astragalus residue

本文結(jié)果顯示紅參藥渣指標(biāo)成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著高于人參藥渣（P＜0.05），雖然人參藥渣中人參皂苷Rg1+人參皂苷Re的總量略低于《中國藥典》人參藥材限度，但人參皂苷Rb1的則高于《中國藥典》人參藥材限度。造成上述結(jié)果的原因可能與人參皂苷脂溶性較高以及制劑中紅參、人參的提取工藝不同有關(guān)。首先，從HPLC測定結(jié)果分析，人參皂苷出峰時間＞50 min，提示3種人參皂苷脂溶性較大，從出峰時間排序提示3種人參皂苷脂溶性排序為人參皂苷Rg1＜人參皂苷Re＜人參皂苷Rb1。其次，對比分析復(fù)方扶芳藤合劑紅參的提取工藝（紅參用65%乙醇回流提取3次，每次2 h，合并提取液，濾過，濾液備用，藥渣加水煎煮3次，每次1.5 h）和復(fù)方扶芳藤合劑人參的提取工藝（人參用85%乙醇回流提取3次，每次2 h）發(fā)現(xiàn)，人參采用更高濃度的乙醇作為提取溶劑，更適合人參皂苷等脂溶性成分的萃取，提示復(fù)方扶芳藤合劑紅參的提取工藝存在問題，需要進(jìn)一步優(yōu)化。最后，紅參藥渣和人參藥渣中人參皂苷Rb1質(zhì)量分?jǐn)?shù)均高于《中國藥典》限度，結(jié)合人參皂苷Rb1的高脂溶性，提示需要優(yōu)化復(fù)方扶芳藤合劑、復(fù)方扶芳藤膠囊的提取工藝，建議可對提取的關(guān)鍵因素（提取工藝、乙醇濃度、料液比、提取時間、提取次數(shù)、藥材粉碎度）進(jìn)行綜合考察。

本研究參照2020年版《中國藥典》一部中相應(yīng)指標(biāo)成分、有效成分的含量測定方法進(jìn)行測定藥渣中的殘留含量，方法準(zhǔn)確、可靠。結(jié)果顯示，人參、紅參和黃芪藥渣的指標(biāo)成分的殘留較高，藥渣填埋處理造成資源浪費。研究表明黃芪藥渣對動物免疫系統(tǒng)有一定的強化作用和可促進(jìn)植物快速增長的作用[7]，紅參藥渣的發(fā)酵產(chǎn)物可增強雌性大鼠的抗氧化能力和提高大鼠免疫器官（脾臟、胸腺）的指數(shù)[8]，人參藥渣中的人參皂苷可改善雞的促進(jìn)體成熟與性成熟同步，提升雞群的生產(chǎn)水平[9]。最近研究表明，復(fù)方扶芳藤合劑還有抗衰老作用[10?11]、提高免疫力[12?13]、輔助化療[14]等作用，由于藥渣中保留具有較高水平的有效成分，可以將藥渣整方或把人參藥渣、紅參藥渣、黃芪藥渣單獨分類后二次利用。