血清人衰老關(guān)鍵蛋白1 檢測(cè)對(duì)結(jié)腸直腸癌的診斷和預(yù)后價(jià)值

張 華，陸 煒，楊承翌，項(xiàng)明潔

（1.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院盧灣分院放免檢驗(yàn)科，上海 200020；2.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系20 屆，上海 200020）

結(jié)腸直腸癌（colorectal cancer,CRC）是一種常見的消化道腫瘤，發(fā)病率在全球各種腫瘤中居第三位，致死率排名第四[1]。我國(guó)的CRC 發(fā)病率和病死率呈上升趨勢(shì)，肥胖、吸煙、缺乏纖維的高熱量飲食和缺乏體育鍛煉顯著增加了我國(guó)人群患CRC 的風(fēng)險(xiǎn)。CRC 起病隱匿、侵襲性強(qiáng)，許多患者在疾病發(fā)展過程中無臨床癥狀，通常到晚期才被診斷。人衰老關(guān)鍵蛋白1（Fibulin-1,FBLN1）是一種通過與其他細(xì)胞外基質(zhì)蛋白間相互作用而作為細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）穩(wěn)定劑的多功能分泌糖蛋白，在惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起關(guān)鍵作用[2]。研究[3]表明，胃癌組織中FBLN1 表達(dá)量減低，乳腺癌組織中FBLN1 表達(dá)量增高，而肝癌組織中不同病毒感染背景下FBLN1 蛋白表達(dá)量不同，提示FBLN1 可以作為多種癌癥的潛在標(biāo)志物。然而，其在CRC 中的作用目前仍不清楚。本研究旨在探討血清FBLN1 在CRC 診斷中的應(yīng)用價(jià)值，評(píng)價(jià)血清FBLN1 診斷CRC 和判斷腫瘤病理分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的可能性，為臨床CRC 診治提供一定的指導(dǎo)。

資料與方法

一、資料

選取2018 年1 月至2019 年12 月期間，上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院盧灣分院普外科收治且經(jīng)病理證實(shí)的81 例CRC 患者[CRC 組，男性43 例，女性38 例，平均年齡為（57.1±12.9）歲]和50 例結(jié)腸直腸良性息肉患者[息肉組，男性36 例，女性14 例，平均年齡為（52.6±11.3）歲]，2 組間年齡、性別比例無差異（P＞0.05）。另收集同期年齡、性別匹配的50 名健康體檢者（健康組）的血清作為對(duì)照。81 例CRC 患者中，病理診斷為高分化CRC 的患者有29 例，中分化者有43 例，低分化者9 例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者有57 例，24 例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

本研究獲得上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院盧灣分院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象均知情同意。

二、方法

1.標(biāo)本采集:所有研究對(duì)象禁食后采集靜脈血5 mL，靜置30 min 后，以4 000 r/min（d=8 cm）的速度離心15 min，分離血清后儲(chǔ)存于-80 ℃下備用。

2.實(shí)驗(yàn)室檢測(cè):血清FBLN1 水平采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) （enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）法進(jìn)行檢測(cè)，試劑來源于美國(guó)LifeSpan Bio-Science 有限公司公司 （批號(hào)LS-F32972），按照ELISA 數(shù)據(jù)處理軟件繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算FBLN1水平。FBLN1 檢測(cè)儀器為上海合意公司的酶標(biāo)儀CB371，校準(zhǔn)合格。血清CEA 水平采用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法進(jìn)行檢測(cè)，儀器為美國(guó)Abbott 公司ARCHITECT i-2000 全自動(dòng)免疫分析儀，校準(zhǔn)合格，試劑為配套進(jìn)口試劑（批號(hào)10224FN00），質(zhì)控品RANDOX 公司IA PREMIUM PLUS（批號(hào)1812EC），質(zhì)控在控狀態(tài)。

3.結(jié)果判定:應(yīng)用SPSS 22.0 軟件繪制受試者操作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲線，以曲線下最大面積確定最佳臨界值，即約登指數(shù)（約登指數(shù)=靈敏度+特異性-1）最大（0.727），分別以FBLN1＞9.85 ng/mL、CEA＞4.25 ng/mL 為陽性。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用SPSS 22.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用Mann-Whitney U 檢驗(yàn)分析數(shù)據(jù),以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。列出各組試驗(yàn)與病理學(xué)診斷比較的四格表，分別計(jì)算FBLN1、CEA 診斷CRC 的靈敏度和特異度，再計(jì)算其他診斷效能指標(biāo)并列表，由此繪制ROC 曲線。

結(jié) 果

二、3 組血清FBLN1 水平

CRC 組、息肉組和健康組血清FBLN1 水平分別 為 （12.98±7.82） ng/mL、（7.54±1.23） ng/mL 和（6.89±2.03） ng/mL；血清CEA 水平分別為 （8.14±6.25） ng/mL、（1.45±0.89） ng/mL、（1.10±0.63） ng/mL。CRC 組的血清FBLN1 水平較息肉組及健康組顯著升高（P 均＜0.05），而息肉組與健康組之間的血清FBLN1 水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.564）。

二、血清FBLN1 檢測(cè)診斷CRC 的效能

血清FBLN1 檢測(cè)診斷CRC 的ROC 曲線下面積為0.852（P＜0.001），而血清CEA 檢測(cè)診斷CRC的曲線下面積為0.725（P＜0.001）。以約登指數(shù)最大時(shí)的血清FBLN1 水平9.85 pg/mL 作為診斷CRC的最佳臨界值，此時(shí)對(duì)應(yīng)的靈敏度約為82.7%，特異度約為90.0%，均優(yōu)于CEA（64.2%，82.1%）（見圖1）。

圖1 血清FBLN1 和CEA 檢測(cè)診斷CRC 的ROC 曲線

三、血清FBLN1 水平與CRC 臨床病理間的關(guān)系

將81 例CRC 病例分別按分化程度和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分類，比較其血清FBLN1 水平。結(jié)果顯示，低分化CRC 患者的血清FBLN1 水平[（22.23±18.51） ng/mL] 依次高于中分化患者 [（11.65±13.28） ng/mL]、高分化患者[（9.12±10.17） ng/mL]，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 均＜0.05）。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的CRC 患者血清FBLN1 水平[（15.26±6.98） ng/mL]明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[（8.58±4.27） ng/mL] 的CRC患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

討 論

我國(guó)的CRC 發(fā)病率和病死率均高于世界平均水平，疾病負(fù)擔(dān)較大，已成為一個(gè)重要的公共衛(wèi)生問題。目前，CRC 的非侵入性診斷主要依靠CEA 等血清腫瘤標(biāo)志檢測(cè)。然而，CEA 等血清腫瘤標(biāo)志對(duì)于腫瘤診斷的靈敏度和特異度均難達(dá)到早期發(fā)現(xiàn)的要求。為了提高早期診斷CRC 的準(zhǔn)確率，本研究觀察了血清FBLN1 在CRC 早期診斷及臨床病理情況預(yù)估中的價(jià)值。

ECM 蛋白是一類細(xì)胞內(nèi)合成并分泌到胞外，分布在細(xì)胞表面和細(xì)胞之間的分子，可以調(diào)節(jié)細(xì)胞的生理活動(dòng)，為細(xì)胞的生存及活動(dòng)提供適宜的場(chǎng)所。人類Fibulin 蛋白家族包括7 個(gè)結(jié)構(gòu)相似的ECM 蛋白，在ECM 的形成及穩(wěn)定中發(fā)揮重要作用，是構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)、彈性纖維及基底膜的主要成分。FBLN 蛋白家族不僅在組成細(xì)胞外骨架中發(fā)揮重要作用，同時(shí)也能夠調(diào)控細(xì)胞的黏附、生長(zhǎng)、遷移及增殖[4]。研究[5]發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)BLN 家族蛋白在不同的腫瘤組織中可分別起到抑癌或促癌的作用，并能夠影響腫瘤的侵襲、增殖及預(yù)后。FBLN1 蛋白因其羧基末端具有4 種可變形式，分為FBLN1A、FBLN1B、FBLN1C 及FBLN1D。其中，F(xiàn)BLN1D 具有完整的結(jié)構(gòu)域Ⅲ，其可阻斷腫瘤細(xì)胞與纖連蛋白的黏附，從而抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、黏附及轉(zhuǎn)移[6]。FBLN1C 缺失末端的21 個(gè)氨基酸，其表達(dá)量的高低與卵巢癌的侵襲性呈正相關(guān)，起到促癌的作用。FBLN1 的促癌或抑癌作用也與其在腫瘤組織中的表達(dá)位置相關(guān)。據(jù)報(bào)道，F(xiàn)BLN1 在胃癌和肝細(xì)胞癌中發(fā)揮抑制腫瘤的作用[7-8]，而在雌激素受體陽性的卵巢癌及乳腺癌中則發(fā)揮了促進(jìn)腫瘤發(fā)生、發(fā)展的作用[9]。

本研究發(fā)現(xiàn)，CRC 患者血清中的FBLN1 水平升高，且相對(duì)于CRC 早期患者來說，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和低分化CRC 患者的血清FBLN1 水平更高。這一結(jié)果提示，F(xiàn)BLN1 在其CRC 中發(fā)揮了促進(jìn)腫瘤發(fā)生、發(fā)展的作用，與Zhu 等[10]的報(bào)道一致。CRC 患者的血清FBLN1 水平升高，可能與CRC 腫瘤微環(huán)境中基質(zhì)FBLN1C 蛋白表達(dá)的升高有關(guān)。腫瘤的增殖分化、基質(zhì)細(xì)胞的激活增殖與無序?qū)е翬CM 蛋白分泌增加，作為ECM 組分的FBLN1 表達(dá)也增加，用以調(diào)控細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。

本研究結(jié)果表明，CRC 患者的血清FBLN1 水平升高，血清FBLN1 診斷CRC 的ROC 曲線下面積為0.852，靈敏度約為82.7%，特異度約為90.0%，均優(yōu)于CEA，提示血清FBLN1 在CRC 診斷中有一定價(jià)值。同時(shí)，本研究發(fā)現(xiàn)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和病理低分化的CRC 患者血清FBLN1 水平升高，提示血清FBLN1 在CRC 診斷中可以作為一種初步預(yù)估患者臨床病理情況的標(biāo)志物。

總之，本研究發(fā)現(xiàn)血清FBLN1 可能作為CRC診斷和預(yù)估臨床病理情況的標(biāo)志物，但本研究樣本量較少，未來將擴(kuò)大樣本量，以進(jìn)一步研究血清FBLN1 與CRC 發(fā)生、發(fā)展之間的關(guān)系，為CRC 的輔助診斷提供有用的臨床信息。