手術(shù)建立食蟹猴遙測動物模型的體會

蔡勇強(qiáng)

（浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院科研部，浙江 杭州310009）

食蟹猴為猴科，獼猴屬，主要分布與泰國、老撾、越南、馬來西亞等國。食蟹猴體形較小，在生理上與人類比較相近，是醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)研究中廣泛采用的理想實(shí)驗(yàn)動物。我院大動物實(shí)驗(yàn)中心長期選擇使用食蟹猴做實(shí)驗(yàn)動物模型，特別是在心血管疾病方面的研究需要長時(shí)間的心電的監(jiān)測，所以食蟹猴手術(shù)皮下埋入植入子遙測數(shù)據(jù)就是一種長期選擇使用的方式。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 選取我院大動物實(shí)驗(yàn)中心2016年6月～2020年12月實(shí)施手術(shù)造模的28只食蟹猴的臨床資料，全部為普通級雄性食蟹猴，6～8歲，體重7～9kg，來源于蘇州西山中科實(shí)驗(yàn)動物有限公司和廣西防城港常春生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.2 主要儀器與設(shè)備GENIX-1010遙測植入子、GENIX-2010五通道接收器、ADI數(shù)據(jù)記錄儀，恩識醫(yī)療科技(上海)有限公司生產(chǎn)；威利高頻電刀；猴專用馬甲。

1.3 飼養(yǎng)環(huán)境 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院大動物實(shí)驗(yàn)中心飼養(yǎng)室普通環(huán)境單籠飼養(yǎng)，溫度18～24℃，濕度40%～70%，換氣次數(shù)8～12次/h,照明時(shí)間每天12h（7：00開燈，19：00關(guān)燈自動循環(huán)控制），動物籠具為特制不銹鋼網(wǎng)籠：寬×深×高95cm×80cm×85cm,動物可用底面積為0.76m2。

2 食蟹猴遙測模型建立和使用過程中出現(xiàn)的臨床異常情況

本文對我院大動物實(shí)驗(yàn)中心28例食蟹猴遙測動物模型的建立和應(yīng)用過程中曾出現(xiàn)的切口感染、自助拆線、手術(shù)切口線頭排異反應(yīng)等所致感染的臨床異常資料進(jìn)行回顧和分析，報(bào)告記錄顯示切口感染3例，術(shù)后動物自助拆線1例，手術(shù)切口線頭排異反應(yīng)所致感染1例。

3 食蟹猴遙測模型建立和使用過程中的關(guān)注點(diǎn)

3.1 動物手術(shù)個(gè)體的選擇 手術(shù)前期應(yīng)加強(qiáng)觀察準(zhǔn)備手術(shù)的食蟹猴近期體重的變化，有無脫毛、皮膚瘙癢的情況，有無腹瀉或致籠內(nèi)不清潔行為的食蟹猴。加強(qiáng)飼養(yǎng)管理對發(fā)現(xiàn)的異常情況及時(shí)處理，選擇體格健壯、毛發(fā)光亮、個(gè)體衛(wèi)生良好、精神狀態(tài)活躍的食蟹猴。

3.2 動物手術(shù)方法的改進(jìn)和注意事項(xiàng)

3.2.1 植入子預(yù)處理 感染是人工材料植入手術(shù)的嚴(yán)重并發(fā)癥，不但治療困難，而且還可能導(dǎo)致手術(shù)失敗，植入子埋入食蟹猴皮下肌肉后與機(jī)體形成一個(gè)纖維化組織界面，是一個(gè)免疫功能不完善的纖維炎癥反應(yīng)區(qū)域，病原菌吸附過多會附著在植入子表面或這個(gè)囊形纖維化包膜內(nèi)逃避機(jī)體的免疫防御，再加上一些細(xì)菌耐藥菌株出現(xiàn)使后續(xù)的治療變得困難，因此預(yù)防感染就顯得十分重要。植入子在埋入食蟹猴體內(nèi)前都會在醫(yī)院先進(jìn)行環(huán)氧乙烷消毒，使用時(shí)打開，根據(jù)齊衛(wèi)紅等人的經(jīng)驗(yàn)，使用前應(yīng)在加有抗生素的生理鹽水中浸泡植入子20min。

3.2.2 無菌操作 食蟹猴遙測動物模型造模手術(shù)成功的關(guān)鍵是無菌操作，避免創(chuàng)口污染所致的感染。導(dǎo)致創(chuàng)口感染的因素很多，有空氣污染，更主要的還是接觸性污染，包括手術(shù)器材、縫線、縫針、創(chuàng)巾與手術(shù)人員和動物皮膚不小心接觸等。故手術(shù)參與人員要加強(qiáng)無菌觀念，嚴(yán)格執(zhí)行各項(xiàng)無菌技術(shù)操作是預(yù)防動物術(shù)后感染的關(guān)鍵。動物手術(shù)前手術(shù)室必須清潔、徹底消毒，手術(shù)用品高壓滅菌，手術(shù)人員與助手嚴(yán)格遵守洗手、手消毒、穿一次性無菌手術(shù)衣、戴一次性無菌橡膠手套等無菌操作規(guī)程，每個(gè)環(huán)節(jié)都應(yīng)嚴(yán)格遵循無菌原則。

3.2.3 動物手術(shù) 術(shù)前手術(shù)室用75%酒精噴灑，人員退出時(shí)紫外線燈照射2h嚴(yán)格消毒滅菌。食蟹猴禁水禁食8～12h,手術(shù)部位剃毛、清潔，手術(shù)進(jìn)行前按20mg/kg注射鹽酸氯胺酮注射液進(jìn)行麻醉，麻醉后將其仰臥、十字形固定在手術(shù)臺上對手術(shù)部位用聚維酮碘溶液消毒，并用75%的酒精脫碘，顯露出手術(shù)部位。用心電圖機(jī)測試電極安放位置，選取合適的電極放置位置，并用記號筆標(biāo)記（電極一端留置在左肋腹部皮下，另一端心電電極放置在胸骨右側(cè)第一肋間皮下）。手術(shù)時(shí)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求在左側(cè)肋腹部切開皮膚，制作2cm×4cm的皮下囊袋，埋入動物遙測植入子。心電記錄電極按選擇并標(biāo)記的安放位置埋入，一端在左肋腹部皮下，一端心電電極通過皮下隧道引至胸骨右側(cè)第一肋間皮下，模擬體表Ⅱ?qū)?lián)心電圖，使用遙測軟件檢查心電信號確認(rèn)信號接收正常后皮下電極縫合固定，縫合切口。創(chuàng)口全部縫合后再用聚維酮碘溶液消毒，肌肉注射抗生素，給食蟹猴穿好專用的防咬馬甲，移回籠舍觀察蘇醒。

4 術(shù)后護(hù)理

食蟹猴遙測模型成功建立后，獸醫(yī)和飼養(yǎng)人員的護(hù)理是很關(guān)鍵的。每日要給動物肌肉注射80萬IU青霉素鈉，連續(xù)注射5d，早晚給動物手術(shù)部位創(chuàng)口擦拭碘伏消毒預(yù)防感染，提供品種多樣、品質(zhì)新鮮的水果補(bǔ)充維生素，促進(jìn)創(chuàng)口愈合，但是在創(chuàng)口愈合過程中也還是有很多因素影響模型動物的正常使用。

4.1 切口感染 食蟹猴手術(shù)造模成功后切口感染是術(shù)后最多見的臨床異常，因?yàn)樵趥诨居蠒r(shí)，局部會瘙癢，食蟹猴經(jīng)常用口去舔舐傷口，用手腳去撓手術(shù)部位，雖然動物術(shù)后穿有專用馬甲可以起一定的保護(hù)作用，但實(shí)際情況中有些食蟹猴的切口還是被污染、感染，造成傷口愈合時(shí)間延長，給護(hù)理增加困難。所以每天要用碘伏擦拭傷口2次，可以起到消毒傷口、止癢的作用。

4.2 自助拆線 術(shù)后自助拆線的食蟹猴筆者遇見過一例，發(fā)現(xiàn)時(shí)腹肋部的馬甲已經(jīng)破損嚴(yán)重，并且切口周圍紅腫、有膿性感染性分泌物，已經(jīng)可以看見埋入的植入子，電極導(dǎo)線，此時(shí)必須及時(shí)處理。在食蟹猴被麻醉后從猴籠內(nèi)移出至治療室，傷口清創(chuàng)，檢查植入子及導(dǎo)線、埋植入子的皮下囊袋用雙氧水反復(fù)清洗，重新縫合創(chuàng)口，周圍皮膚再消毒，重新?lián)Q上新的馬甲，肌注抗生素，最后將動物放回原籠位。

4.3 手術(shù)切口線頭排異反應(yīng) 手術(shù)切口線頭排異反應(yīng)是術(shù)后拆線后一段時(shí)間內(nèi)總發(fā)現(xiàn)切口一端不時(shí)有白色或呈粉紅色的液性物體。在麻醉動物后清洗、消毒創(chuàng)口后仔細(xì)觀察才發(fā)現(xiàn)皮下有個(gè)瘺孔一個(gè)黑頭留在里面，用止血鉗夾起后不能完全夾出來，后分析應(yīng)該是皮下肌肉層縫合后留下的線頭長了一點(diǎn)，導(dǎo)致一部分扎到皮膚表面長期刺激造成的排異反應(yīng)，所以把線頭拉起用無菌止血鉗夾住線頭，再用無菌手術(shù)剪拆除，剪掉后表面皮膚消毒處理，連續(xù)處理幾日后這個(gè)問題也解決了。