鴨源新城疫病毒的分離與鑒定

趙忠平

（甘肅省定西市漳縣畜牧獸醫(yī)服務中心石川鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，甘肅 定西 748300）

新城疫病毒為副粘病毒科腮腺炎病毒屬成員，病毒核酸為單股、負鏈、不分節(jié)段的RNA，新城疫病毒可以感染各種年齡的雞、鴨、鵝等家禽，新城疫病毒感染后根據(jù)臨床表現(xiàn)可以分為最急性型、急性型和慢性型。2019 年4 月，某養(yǎng)鴨場出現(xiàn)疑似感染新城疫病毒情況，通過對病死鴨剖檢和實驗室診斷確定疫情并成功分離鑒定到新城疫病毒，下面介紹如下。

1 發(fā)病情況

發(fā)病鴨精神沉郁，采食量下降，排稀便，水樣，暗紅色或綠色，病鴨呈張口呼吸，有甩頭動作，出現(xiàn)咳嗽等呼吸道癥狀，發(fā)病鴨發(fā)病后3d 死亡。曾在飼料中添加青霉素等抗生素進行治療，無效果。

2 病理剖檢

取病死鴨剖檢可見消化道出血，盲腸扁桃體出血，肝臟出血，氣管內有粘稠分泌物，取病死鴨的肝臟、胰腺等組織病料送實驗室診斷。

3 實驗室診斷

3.1 PCR 檢測

取病死鴨的送檢組織病料研磨處理，按照1:3 的比例加入滅菌生理鹽水，研磨器研磨成組織勻漿，12000r/min 離心15min，小心吸取上清液。提取上清液病毒基因組RNA，按照參考文獻[2]進行鴨源新城疫病毒、鴨瘟病毒和鴨圓環(huán)病毒三重PCR 檢測，PCR 擴增產(chǎn)物跑核酸電泳，根據(jù)擴增片段大小進行結果判定。PCR 核酸電泳顯示擴增片段為823 bp 左右，與新城疫病毒的預期擴增片段大小一致，說明發(fā)病鴨經(jīng)PCR為鴨源新城疫病毒陽性。

3.2 雞胚接種

將上面研磨處理的病毒上清液用0.45μm 濾器過濾除菌，接種10 日齡SPF 雞胚，觀察雞胚接種后的發(fā)病死亡情況。雞胚在接種后48～72h 全部死亡，胚體出血，剖檢胚體可見肝臟出血嚴重，頭部及腎臟都有明顯出血，收集死亡雞胚尿囊液，連續(xù)接種兩代10 日齡SPF 雞胚，收集尿囊液作進一步鑒定。

3.3 血凝試驗

收集的第三代雞胚尿囊液對1%雞胚紅細胞的血凝效價達9log2，且該血凝特性可以被NDV 陽性血清所抑制，初步鑒定分離毒為鴨源新城疫病毒。

3.4 毒價測定

將收集的第三代雞胚尿囊液做10 倍系列稀釋，取10-5、10-6、10-7三個稀釋度接種10 日齡SPF 雞胚，每個稀釋度接種5 枚10 日齡SPF 雞胚，每天照蛋觀察雞胚的死亡情況，120h 后收集尿囊液做血凝試驗，血凝效價在7log2 及以上判定為感染，計算分離毒的EID50。結果顯示，10-5稀釋度感染雞胚5 枚，10-6稀釋度感染雞胚3 枚，10-7稀釋度感染雞胚3枚，根據(jù)Reed-Muench 方法計算分離毒的雞胚半數(shù)感染量為10-5.78/0.1mL。

4 防控措施

發(fā)生疫情后，對發(fā)病鴨及時隔離飼養(yǎng)，未發(fā)病鴨群及時接種新城疫疫苗，鴨舍嚴格消毒，內外環(huán)境都要消毒處理，經(jīng)過積極防控，發(fā)病鴨一部分死亡，一部分康復，沒有出現(xiàn)新發(fā)病例，疫情得到有效控制。

5 討 論

鴨源新城疫是一種高度接觸性病毒性傳染病，雖然新城疫病毒主要感染雞，鴨也可感染。根據(jù)發(fā)病家禽的臨床表現(xiàn)可以做出初步診斷，確診需要借助實驗室檢測方法，當前新城疫的實驗室檢測方法主要包括病毒分離鑒定、分子生物學和血清學檢測方法，病毒分離鑒定是病毒判定最可靠的方法，分子生物學主要包括PCR 方法和熒光定量PCR 檢測方法，血清學檢測方法包括酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）和膠體金試紙條檢測方法，臨床可采用分子生物學方法進行早期診斷，通過血清學檢測方法進行雞群的血清流行病學調查。