血清FIB及TSP-1水平與重癥肺炎支原體肺炎患兒預(yù)后相關(guān)性分析

白 玉，白東琴

(延安市人民醫(yī)院兒科，陜西 延安 716000)

近年來隨著社會發(fā)展和環(huán)境變化，由肺炎支原體(mycoplasma pneumoniae，MP)感染引起的肺炎支原體肺炎(mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP)的發(fā)病率呈逐年增高的趨勢，其住院率占兒童社區(qū)獲得性肺炎的40%。若未得到及時(shí)有效的治療可進(jìn)展為重癥肺炎，患兒伴有呼吸衰竭，進(jìn)而出現(xiàn)多器官功能障礙、低血壓、休克等癥狀，給患兒生存和預(yù)后帶來極大挑戰(zhàn)[1]。然而有報(bào)道稱[2]，近年來隨著大環(huán)內(nèi)酯類耐藥菌的增加，重癥支原體肺炎患病率及病死率逐年升高，嚴(yán)重威脅患兒的健康和生命安全。因此，如何早期快速有效地識別重癥支原體肺炎顯得尤為必要。

有研究[3]表明，重癥肺炎患兒伴隨著凝血、纖溶功能障礙，進(jìn)行凝血指標(biāo)和血小板參數(shù)測定可盡早發(fā)現(xiàn)凝血功能異常。作為血清中含量較多的一種蛋白，纖維蛋白原(fibrinogen，F(xiàn)IB)能夠?qū)毙匝装Y期作出反應(yīng)，通過介導(dǎo)人體血小板凝集影響血液的黏滯度。血小板反應(yīng)蛋白(thrombospondin-1，TSP-1)是一種細(xì)胞外基質(zhì)糖蛋白，可有效調(diào)節(jié)血管生成，同時(shí)具有抑制內(nèi)皮細(xì)胞遷移和細(xì)胞外基質(zhì)中血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)釋放的作用[4]。另有研究發(fā)現(xiàn)[5]，TSP-1在急性缺血性腦卒中患者血漿中高表達(dá)，且TSP-1的表達(dá)水平越高，患者預(yù)后越差，提示檢測TSP-1有助于急性缺血性腦卒中的早期診斷和預(yù)后評估。因此，通過檢測重癥和輕癥MPP患兒血清中FIB與TSP-1蛋白表達(dá)水平，分析兩者間是否存在差異表達(dá)，進(jìn)一步探討血清FIB與TSP-1蛋白表達(dá)水平與重癥MPP患兒的轉(zhuǎn)歸及預(yù)后的相關(guān)性就尤為重要。本研究采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent essay,ELISA)檢測重癥和輕癥MPP患兒血清中FIB、TSP-1表達(dá)情況，探討FIB、TSP-1表達(dá)水平與重癥MPP患兒預(yù)后的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年1月至2020年12月在延安市人民醫(yī)院兒科確診并治療的重癥MPP患兒80例作為觀察組，其中男39例，女41例，年齡0.5～14歲，平均年齡(5.40±1.70)歲。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①中國兒童肺炎支原體感染實(shí)驗(yàn)室診斷規(guī)范和臨床實(shí)踐專家共識(2019年版)[6]；②重癥MPP患兒根據(jù)兒童社區(qū)獲得性肺炎管理指南(2013修訂)(上)[7]；③單次MP-IgM抗體滴度≥1：160，且PCR檢測鼻咽部吸取物MP-DNA拷貝數(shù)≥2.5×103/L；④所有患兒家屬或監(jiān)護(hù)人知情并同意。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①既往患有凝血系統(tǒng)疾病、自身免疫系統(tǒng)疾病及心、肝、腎功能不全者；②既往有反復(fù)呼吸道感染、肺結(jié)核、哮喘等其他呼吸系統(tǒng)疾病病史者；③正在服用抗血小板或抗凝藥物及影響免疫調(diào)節(jié)藥物者；④病例資料不完善者；⑤實(shí)驗(yàn)室診斷假陽性者。

另選取同期本院診治的輕癥MPP患兒80例作為對照組，其中男42例，女38例，年齡0.5～14歲，平均年齡(5.80±1.5)歲。2組一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

本研究均經(jīng)過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)以及征得家屬的知情同意。

1.2 主要試劑與儀器

FIB測定試劑盒(上海江萊生物科技有限公司)，TSP-1 (enzyme-linked immunosorbent essay,ELISA)測定試劑盒(江萊生物，上海)。

1.3 研究方法

1.3.1 樣品采集 采集MPP患兒清晨空腹靜脈血3 mL，室溫靜置15 min后，1500 r/min，離心20 min，取上層血清，置于-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。采用ELISA檢測血清FIB、TSP-1表達(dá)水平，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

1.3.2 評價(jià)指標(biāo) 分別記錄所有觀察對象的血小板計(jì)數(shù)(platelet，PLT)、平均血小板體積(MPV)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)(white blood cell count，WBC)、抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)(neutrophil count，NEU)、C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein，CRP)、乳酸脫氫酶(lactic dehydmgenase，LDH)、D-二聚體及紅細(xì)胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate，ESR)等指標(biāo)。

肺炎嚴(yán)重指數(shù)(pneumonia severity index,PSI)：對所有研究對象進(jìn)行PSI評價(jià)，分別記錄患兒性別、年齡、體溫、合并癥及血液FIB、TSP-1表達(dá)水平等相關(guān)指標(biāo)，評分越高表示肺炎越嚴(yán)重。

1.3.3 預(yù)后判斷 按病情轉(zhuǎn)歸情況將重癥MPP患兒分為好轉(zhuǎn)組53例(臨床癥狀、體征及實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)均支持病情好轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)入普通呼吸病房或治愈直接出院)和惡化組27例(癥狀、體征及實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)提示病情加重，放棄治療自動出院或死亡)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 2組患兒血清常規(guī)指標(biāo)比較

與對照組比較，觀察組患兒PLT、MPV、D-二聚體、WBC、NEU、LDH、ESR、CRP水平和PSI評分升高，ATⅢ水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，表1)。

表1 2組觀察對象各項(xiàng)指標(biāo)比較

2.2 2組患兒血清FIB、TSP-1表達(dá)水平比較

與對照組MPP患兒比較，觀察組MPP患兒血清中FIB、TSP-1表達(dá)水平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，表2)。

表2 2組患兒血清FIB與TSP-1表達(dá)水平比較

2.3 不同預(yù)后重癥MPP患兒血清中FIB、TSP-1表達(dá)水平及PSI評分

與好轉(zhuǎn)組比較，惡化組患兒血清FIB、TSP-1表達(dá)水平及PSI評分均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，表3)。

表3 不同預(yù)后重癥MPP患兒血清中FIB、TSP-1表達(dá)水平及PSI評分

2.4 重癥MPP患兒血清FIB、TSP-1表達(dá)水平與PSI評分相關(guān)性

相關(guān)性分析顯示，重癥MPP患兒血清FIB表達(dá)水平與PSI評分呈正相關(guān)(r=0.557，P<0.05)，TSP-1表達(dá)水平與PSI評分呈正相關(guān)(r=0.594，P<0.05，圖1)。

圖1 重癥MPP患兒血清FIB、TSP-1表達(dá)水平與PSI評分相關(guān)性

2.5 血清FIB、TSP-1對重癥MPP患兒預(yù)后不良的預(yù)測價(jià)值

如圖2所示，血清FIB預(yù)測重癥MPP患兒預(yù)后不良曲線下面積為0.876，截?cái)嘀禐?.956，靈敏度為74.07%，特異性為86.79%。血清TSP-1預(yù)測重癥MPP患兒預(yù)后不良曲線下面積為0.865，截?cái)嘀禐?2.781，靈敏度為70.37%，特異度為90.57%。血清FIB、TSP-1聯(lián)合預(yù)測重癥MPP患兒預(yù)后不良曲線下面積為0.920，靈敏度為88.89%，特異度為81.13%。

圖2 血清FIB、TSP-1對重癥MPP患兒預(yù)后不良的預(yù)測價(jià)值

3 討論

FIB是肝臟合成的糖蛋白，是人體重要的凝血因子，在體內(nèi)主要參與凝血過程，是檢測凝血功能指標(biāo)之一，水平升高可以預(yù)測機(jī)體多種生理及病理狀況。有研究表明[8]，重癥肺炎患者血清中FIB表達(dá)水平高于健康組，且與肺炎嚴(yán)重指數(shù)呈正相關(guān)。沈逍雁等[9]研究表明，F(xiàn)IB在重癥肺炎兒童血清中表達(dá)水平升高，與PSI呈顯著正相關(guān)，對重癥患兒病情變化與預(yù)后評估有一定價(jià)值。本研究結(jié)果表明，與輕度組MPP患兒比較，重癥組MPP患兒血清中FIB表達(dá)水平明顯升高，與上述研究結(jié)果一致，提示FIB與MPP患兒病情嚴(yán)重程度有關(guān)。

TSP-1是一種多功能的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，由多個(gè)細(xì)胞分泌，包括血小板、白細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞，可與特定結(jié)構(gòu)域的多個(gè)不同細(xì)胞表面受體、蛋白質(zhì)、蛋白多糖相互作用，發(fā)揮不同的生物學(xué)效應(yīng)[10]。TSP-1作為抑制血管生成的重要的細(xì)胞外基質(zhì)糖蛋白，在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、黏附及血管生成中發(fā)揮重要的抑制作用。白潔明等[11]研究表明，TSP-1在多囊卵巢綜合征大鼠模型中對血管內(nèi)皮生成因子的表達(dá)有影響，可能通過調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮生成因子發(fā)揮治療囊卵巢綜合征的作用。另有研究表明，TSP-1還與炎癥反應(yīng)及免疫應(yīng)答有關(guān)，如Talme等[12]研究表明，甲氨蝶呤通過TSP-1/TSP-1受體相互作用的途徑來調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答，而發(fā)揮治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的作用。張濛等[13]研究表明，TSP-1在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中低表達(dá)，在疾病過程中發(fā)揮免疫負(fù)調(diào)節(jié)功能，抑制自身免疫炎癥的發(fā)展和自身抗體的產(chǎn)生。本研究結(jié)果表明，重癥組MPP患兒血清中TSP-1表達(dá)水平比輕癥組MPP患兒顯著升高，提示TSP-1與肺炎病情的發(fā)展程度有關(guān)，其機(jī)制可能與TSP-1參與炎癥反應(yīng)及免疫應(yīng)答有關(guān)。

重癥肺炎因呼吸衰竭導(dǎo)致的缺氧、酸中毒、過度炎癥反應(yīng)等因素造成血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，進(jìn)而導(dǎo)致纖溶及凝血等多種病理改變，惡化病情。隨著炎癥因子不斷釋放，血管內(nèi)皮細(xì)胞過度缺氧，激活凝血纖溶系統(tǒng)并提升FIB、TSP-1合成水平。另外，從病原學(xué)角度分析，支原體本身能夠直接損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，激活凝血系統(tǒng)，導(dǎo)致血液粘滯度升高。本研究重癥組MPP患兒血清中FIB、TSP-1表達(dá)水平升高，可能與過度炎性反應(yīng)和凝血纖溶系統(tǒng)激活有關(guān)。圖4數(shù)據(jù)顯示，重癥MPP患兒血清FIB、TSP-1表達(dá)水平與PSI評分呈正相關(guān)性，提示FIB、TSP-1水平與MPP患兒的病情嚴(yán)重程度相關(guān)。通過ROC曲線發(fā)現(xiàn)，重癥組MPP患兒血清FIB、TSP-1聯(lián)合預(yù)測重癥MPP患兒預(yù)后不良曲線下面積為0.920，靈敏度為88.89%，特異度為81.13%。提示血清FIB、TSP-1水平對于預(yù)測重癥MPP患兒不良預(yù)后有一定價(jià)值。

本研究發(fā)現(xiàn)FIB、TSP-1在重癥肺炎支原體肺炎患兒血清中明顯高表達(dá)，與患兒疾病嚴(yán)重程度相關(guān)，未來很有可能作為預(yù)測重癥MPP患兒預(yù)后不良潛在的血清標(biāo)志物。該研究的不足之處為臨床樣本數(shù)量少有關(guān)，需要擴(kuò)大樣本量進(jìn)行進(jìn)一步研究。