四川省金堂縣兔病毒性出血癥2型的流行病學調(diào)查

梁璐琪，李敏，楊曦，陳冬，丁夢蝶，陳斌*

（1.四川省動物疫病預防控制中心，四川成都 610041；2.成都市動物疫病預防控制中心，四川成都 610041；3.四川省金堂縣動物疫病預防控制中心，四川金堂 610400）

兔病毒性出血癥2型又名兔瘟2型，是由杯狀病毒科兔病毒屬的兔病毒性出血癥2型病毒（RHDV2）引起的一種急性、熱性、高度致死性傳染病。較兔瘟（RHDV）的死亡率低，約為5%～70%［1］。8周齡以下兔對RHDV不易感，但RHDV2可使11日齡的仔兔發(fā)病、死亡［2-4］。RHDV主要感染家兔，野兔不易感，但RHDV2可感染家兔和多種野兔［5-8］。

1 調(diào)查目的

2020年4月，成都市金堂縣兩兔場的家兔陸續(xù)出現(xiàn)體溫升高、神經(jīng)癥狀，部分出現(xiàn)腹瀉、口鼻部有血色泡沫狀分泌物，少數(shù)驚叫后死亡，發(fā)病前均免疫RHDV疫苗。兔場存欄約3 500只家兔，截至4月30日累計發(fā)病死亡1 592只，平均死亡率為45.5%。為弄清家兔異常死亡的原因，筆者開展了本次流行病學調(diào)查。

2 病例定義

2.1 疑似病例 2020年4月13日以來，免疫經(jīng)典RHDV疫苗仍異常死亡的；從RHDV2流行國家或地區(qū)引種的；有發(fā)熱、厭食、腹瀉、口鼻流血色泡沫狀分泌物，黃疸等；肝臟呈黃棕色、質(zhì)易碎，脾臟腫大、邊緣有圓形腫大結節(jié)，氣管黏膜充血，肺和氣管有大量泡沫狀液體，肺水腫、阻塞等。出現(xiàn)以上任一情況，可判為疑似病例。

2.2 確診病例 采集疑似病例的口鼻腔拭子、血清以及肝、脾、腎、肺等組織，根據(jù)2018版《OIE陸生手冊》特異性引物“14U1”和“RVP60-L1”擴增出794 bp特征性陽性片段的，可判為確診病例。

3 調(diào)查方法

3.1 現(xiàn)場調(diào)查 詢問相關人員日常管理、引種、銷售、發(fā)病、免疫、人員和車輛流動等情況。

3.2 流行病學調(diào)查 對發(fā)病場和具流行病學關聯(lián)的場點，依前述“病例定義”搜索疑似病例，并采樣。

4 調(diào)查結果

4.1 現(xiàn)場調(diào)查結果

4.1.1 兔場Ⅰ 兔場Ⅰ位于成都市金堂縣轉龍鎮(zhèn)。2019年10月從同鎮(zhèn)A某場引種57只法國伊拉兔，自繁自養(yǎng)。發(fā)病前存欄約1 000只，截至4月30日，剩下437只，死亡率達56.3%。

該場2020年3月接種過兔出血癥病毒桿狀病毒載體滅活疫苗。4月20日發(fā)病，家兔出現(xiàn)體溫升高，精神沉郁，腹瀉，神經(jīng)和呼吸道癥狀，最急性的在1～2 h死亡。剖檢見腹部皮下出血，肝臟腫大、黃疸、質(zhì)易碎，脾臟邊緣梗死（圖1），肺部充血，氣管喉頭出血，腸道有出血點。緊急免疫未見明顯好轉，判為疑似病例。同鎮(zhèn)B某曾為該場解剖。

圖1 發(fā)病死亡兔剖解病變

4.1.2 兔場Ⅱ 兔場Ⅱ也位于成都市金堂縣轉龍鎮(zhèn)。2019年10月由金龍鎮(zhèn)的C某場提供伊拉兔與比利時兔雜交兔，自繁自養(yǎng)。發(fā)病前存欄約2 500只，截至4月30日，剩下1 471只，死亡率達41.2%。

該場2020年3月19日接種過兔病毒性出血癥、多殺性巴氏桿菌二聯(lián)蜂膠滅活疫苗。4月22日相繼表現(xiàn)出與兔場Ⅰ相似的臨床癥狀。再次緊急免疫未見明顯好轉，判為疑似病例。

圖2 發(fā)病兔場核酸檢測（RHDV2）的RT-PCR電泳結果

4.2 實驗室檢測結果 按照相關要求，分別將疑似病例的肝、脾混樣檢測，腎、心、肺混樣檢測，經(jīng)PCR擴增電泳，結果均可見794 bp特異性條帶（圖2）。經(jīng)測序和Blast比對，陽性序列均與RHDV2參考毒株的VP60基因高度同源，故判為RHDV2確診病例。

4.3 流行病學調(diào)查結果

4.3.1 金堂縣轉龍鎮(zhèn)A某場曾為兔場Ⅰ供兔，該場自2018年起自繁自養(yǎng)伊拉兔，2019年8月末次引種，存欄約1 400只。經(jīng)調(diào)查該場兔群無明顯臨床異常，按相關要求采樣檢測均為陰性。

4.3.2 金堂縣轉龍鎮(zhèn)B某曾為兔場Ⅰ解剖，B某的兔場于2019年12月最后一次引種，自繁自養(yǎng)。經(jīng)調(diào)查該場兔群無明顯臨床異常，按相關要求采樣檢測均為陰性。

4.3.3 金堂縣金龍鎮(zhèn)C某場曾為兔場Ⅱ供兔，該場自繁自養(yǎng)法國伊拉兔、比利時兔等，2019年3月末次引種，存欄約11 700只。經(jīng)調(diào)查該場兔群無明顯臨床異常，按相關要求采樣檢測均為陰性。

4.3.4 金堂縣緊急對縣域內(nèi)所有兔場開展緊急監(jiān)測，其中采兔血樣1 511份，環(huán)境樣6 641份。全省監(jiān)測兔鼻拭子2 141份，兔血樣13 347份，兔組織樣19份，環(huán)境樣21 385份，共計36 892份。經(jīng)檢測均為兔瘟2型病毒核酸陰性。

5 結論與分析

5.1 根據(jù)臨床表現(xiàn)、剖解病變、實驗室診斷等確定本次發(fā)病病原為兔病毒性出血癥2型。2020年5月21日農(nóng)業(yè)農(nóng)村部畜牧獸醫(yī)局公布為我國首例兔病毒性出血癥2型疫情。疫情發(fā)生后，當?shù)匾褔栏癜匆?guī)范進行了處置。

5.2 根據(jù)兩場末次引種時間和該病最長潛伏期（約3 d）來分析，引種發(fā)病的可能性極低，目前國內(nèi)尚無報道，應該是外來新發(fā)病。

5.3 兩發(fā)病兔場相距較近，生物安全管理模式粗放。因新冠肺炎疫情，兔場附近有RHDV2型流行國家的回國人員，不排除通過人員、物品等從國外傳入的可能；也可能由病毒污染的兔頭、胴體帶入養(yǎng)殖環(huán)節(jié)所致。

5.4 該病在我國和四川省均屬新發(fā)的外來動物疫病，目前監(jiān)測表明發(fā)病點范圍僅局限于兩鄰近發(fā)病場，經(jīng)全省監(jiān)測排查，未出現(xiàn)新發(fā)陽性兔和新發(fā)疫情，表明疫情已得到有效控制。對于RHDV2，目前國內(nèi)尚無相應的有效疫苗防控，需進一步嚴把引種檢疫關，加大監(jiān)測排查力度，及時發(fā)現(xiàn)、及時處置，同時加強從業(yè)人員宣傳培訓，開展疫苗科技攻關?！?/p>