血清血管生成抑制蛋白1在2型糖尿病腎病中的表達(dá)及臨床意義

裴 雙， 蘇建榮

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院檢驗(yàn)科， 北京 100050)

糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)是一種與糖脂代謝紊亂、血流動(dòng)力學(xué)異常、遺傳易感性、炎癥細(xì)胞浸潤和免疫失調(diào)等多種綜合因素相關(guān)的2型糖尿病(diabetes mellitus，DM)患者慢性微血管并發(fā)癥，易發(fā)展為終末期腎病(end-stage renal disease，ESRD)，起病隱匿，發(fā)病率逐年升高，具有高致殘率和致死率[1]，因此，DN相關(guān)生物學(xué)標(biāo)志物和新的治療靶點(diǎn)探尋成為了新的臨床研究熱點(diǎn)。血管生成抑制蛋白1(vasohibin-1，VASH-1)是一種具有抗血管生成、調(diào)節(jié)炎性反應(yīng)和抗纖維化等作用的內(nèi)皮源性分泌蛋白[2]，當(dāng)前關(guān)于VASH-1在DN患者中表達(dá)變化的報(bào)道甚少，故本文旨在通過研究2型DN患者血清VASH-1水平的變化，探尋VASH-1與DN發(fā)病機(jī)制間的可能相關(guān)性，以期為DN的輔助診斷和治療靶點(diǎn)探討提供一些新的思路。

1 資料與方法

1.1一般資料:選取2019年4月至2020年4月我院收治的252例2型DN患者作為研究組進(jìn)行前瞻性研究，其中男性145例，女性107例，年齡40～74歲，平均年齡(61.59±9.13)歲，體重指數(shù)(body mass index，BMI)(26.46±6.11)kg /m2。根據(jù)尿白蛋白排泄率(urinary albumin excretion rate，UAER)情況，將患者分為正常白蛋白尿組(NA組，n=83，UAER<30mg/24h)、微量白蛋白尿組(MA組，n=85，30mg/24h≤UAER<300mg/24h)和大量白蛋白尿組(LA組，n=84，UAER≥300mg/24h)。NA組男性45例，女性38例，年齡40～73歲，平均年齡(62.13±8.59)歲，BMI(25.98±6.89)kg/m2；MA組男性48例，女性37例，年齡41～72歲，平均年齡(60.87±9.53)歲，BMI(26.10±5.76)kg/m2；LA組男性46例，女性38例，年齡41～74歲，平均年齡(61.53±8.46)歲，BMI(26.59±6.72)kg/m2。另選取同期健康體檢者85例作為對(duì)照組，其中男性45例，女性40例，年齡41～75歲，平均年齡(62.17±8.36)歲，BMI(26.12±6.33)kg/m2。四組受試者在年齡、性別、DM病程及BMI等資料方面具有可比性(P>0.05)。本研究經(jīng)獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2納入和排除標(biāo)準(zhǔn):納入標(biāo)準(zhǔn)：①研究組患者診斷和疾病分型依照美國糖尿病協(xié)會(huì)(American diabetes association，ADA)于2018年修訂的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[3]；②研究組患者DN診斷均經(jīng)腎組織病理活檢明確；③所有受試者知情本次研究并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①明確診斷為1型DM、特殊類型DM、妊娠期DM或繼發(fā)性DM者；②近6月內(nèi)出現(xiàn)過DM酮癥酸中毒、DM高滲性昏迷等2型DM急性并發(fā)癥者；③近期有發(fā)現(xiàn)泌尿系統(tǒng)相關(guān)疾病或手術(shù)以及感染等應(yīng)激狀態(tài)者；④伴有腫瘤或自身免疫性疾病者；⑤嚴(yán)重肝、腎、心、肺功能不全或慢性肝炎等感染性疾病者；⑥妊娠或哺乳期者；⑦不配合本次研究者。

1.3方法:囑患者按要求正確留取24h尿標(biāo)本，充分混勻后取10mL進(jìn)行UAER檢測(cè)；清晨空腹采集靜脈全血用于糖化血紅蛋白(glycosylated hemoglobin，HbA1c)、血沉(erythrocyte sedimentation rate，ESR)檢測(cè)；另空腹采集靜脈血5mL置于不含抗凝劑的真空采血管中，3000r/min離心10min，取上清用于C-反應(yīng)蛋白(C-reactive protein，CRP)、VASH-1和轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)檢測(cè)。HbA1c檢測(cè)用日本TOSOH HLC-723 G8全自動(dòng)糖化血紅蛋白分析儀及配套試劑；ESR檢測(cè)用北京普朗PUC-2068A全自動(dòng)血沉分析儀；UAER、CRP檢測(cè)儀器用美國貝克曼公司的全自動(dòng)生化分析儀AU5800及試劑盒由北京利德曼生化股份有限公司提供；VASH-1和TGF-β1檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)，試劑盒采購于美國Cusabio公司。比較各組VASH-1、TGF-β1、UAER、CRP、HbA1c和ESR水平的變化，并分析VASH-1與其他指標(biāo)間的相關(guān)性。

2 結(jié) 果

2.1各組對(duì)象血清VASH-1與其他指標(biāo)水平比較:研究組患者VASH-1、TGF-β1、UAER、CRP、HbA1c、ESR水平明顯高于對(duì)照組，兩組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。NA組、MA組和LA組VASH-1、TGF-β1、UAER、CRP、HbA1c、ESR水平為：LA組>MA組>NA組，三組間比較均具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 各組對(duì)象血清VASH-1與其他臨床指標(biāo)水平比較

2.2DN患者血清VASH-1與其他指標(biāo)的相關(guān)性分析:Pearson相關(guān)性分析顯示，DN患者VASH-1與TGF-β1、UAER、CRP、HbA1c、ESR間呈正相關(guān)性(r=0.526、0.646、0.529、0.273、0.592，P<0.01)，見圖1。

圖1 DN患者血清VASH-1與其他指標(biāo)的相關(guān)性分析

2.3DN患者血清VASH-1與其他指標(biāo)的多元線性回歸分析:以DN患者血清VASH-1水平變化作為因變量，以TGF-β1、UAER、HbA1c、ESR、CRP水平變化作為自變量進(jìn)行Logistic多元線性回歸分析，結(jié)果顯示：TGF-β1、UAER、CRP、HbA1c、ESR水平變化是影響DN患者血清VASH-1水平變化的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，見表2。

表2 DN患者血清VASH-1與其他指標(biāo)的多元線性回歸分析

3 討 論

糖尿病腎病(DN)的典型微血管病變是微循環(huán)障礙，持續(xù)性高血糖狀態(tài)使得腎臟發(fā)生腎小球基底膜肥厚、腎間質(zhì)細(xì)胞外基質(zhì)沉積而發(fā)生纖維化等腎臟結(jié)構(gòu)病理性損傷，導(dǎo)致蛋白尿形成和腎功能減退[4]。研究發(fā)現(xiàn)DN病理變化中的腎間質(zhì)纖維化發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中伴隨著新生血管的形成和血管內(nèi)皮功能障礙等變化[5]，故研究與其相關(guān)的生物學(xué)標(biāo)志物及可能發(fā)生機(jī)制可為DN輔助診斷、治療靶點(diǎn)探尋和新藥研發(fā)提供一些新的動(dòng)力。

既往研究[6]發(fā)現(xiàn)VASH-1可作為內(nèi)皮源性抗血管生成因子能夠增強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞的應(yīng)激耐受性和存活率，抑制過量血管的生成，起到保護(hù)性作用而抑制腎臟病變，其極有可能成為慢性腎病變的潛在標(biāo)志物。本文研究發(fā)現(xiàn)研究組患者血清VASH-1水平較對(duì)照組升高明顯，且水平隨著尿蛋白排泄率的增加而升高，與Ren H等[7]的研究結(jié)果相一致，表明血清VASH-1與DN的發(fā)生關(guān)系密切，原因可能與DN發(fā)生應(yīng)激狀態(tài)下機(jī)體負(fù)反饋性保護(hù)導(dǎo)致其水平升高有關(guān)。

本研究通過Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)DN患者VASH-1與UAER呈正相關(guān)(r=0.646，P<0.01)，多元回歸分析示UAER是VASH-1升高的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，表明VASH-1水平的升高與尿蛋白變化密切相關(guān)，這種變化涉及的可能分子機(jī)制會(huì)是什么呢？為此，我們研究了DN患者血清VASH-1表達(dá)與TGF-β1和CRP、ESR等炎癥指標(biāo)以及HbA1c的相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：DN患者VASH-1與TGF-β1、CRP、HbA1c、ESR間呈正相關(guān)性(r=0.526、0.529、0.273、0.592，P<0.01)，多元回歸分析示TGF-β1、CRP、HbA1c、ESR是VASH-1升高的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，而既往研究表明，在腎小球、腎小管和腎間質(zhì)中均有廣泛分布的TGF-β1可通過對(duì)腎小球系膜細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)的促進(jìn)生成及抑制降解作用而使腎小球發(fā)生纖維化，并誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的發(fā)生，導(dǎo)致腎小球內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生損傷及功能障礙，使得CRP和ESR等炎癥指標(biāo)發(fā)生相應(yīng)改變，參與并加速DN的發(fā)生發(fā)展[8]，表明血糖控制不佳及炎癥反應(yīng)能夠加速DN患者機(jī)體分泌VASH-1，涉及的分子機(jī)制極有可能是TGF-β1介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及其介導(dǎo)過程中伴隨發(fā)生的炎癥相關(guān)細(xì)胞因子變化及血管內(nèi)皮功能損傷。

綜上所述，血清VASH-1在DN患者中表達(dá)水平升高，與TGF-β1及炎癥標(biāo)志物關(guān)系密切，提示其有成為DN預(yù)測(cè)生物學(xué)標(biāo)志物的可能，為糖尿病患者腎臟損傷中發(fā)生的炎癥及纖維化機(jī)制研究、治療靶點(diǎn)探討和新的藥物研發(fā)提供了新的思路。