2個(gè)北美冬青新品種組培快繁高效再生技術(shù)體系的建立

劉 瑞 張嘉儀 葛超奇 謝露露 陳 穎* 張 粲 陳 茜

（1. 南京林業(yè)大學(xué)南方現(xiàn)代林業(yè)協(xié)同創(chuàng)新中心，南京 210037；2. 生物與環(huán)境學(xué)院，南京 210037；3. 南京工業(yè)大學(xué)2011學(xué)院，南京 211816）

北美冬青（Ilex verticillata L.）又稱落葉型冬青，輪生冬青，是生長(zhǎng)于美國(guó)東北部的優(yōu)良觀果樹種［1～2］。作為一種景觀型樹種其最大的優(yōu)點(diǎn)是冬季落葉后紅色或黃色果實(shí)掛滿枝頭，十分喜慶，果實(shí)可持續(xù)到次年4月份而不落，切枝瓶插壽命可達(dá)2 個(gè)月之久，在園林綠化、切枝、家庭裝飾、會(huì)議展覽等具有重要的用途。近幾年國(guó)內(nèi)學(xué)者引進(jìn)的品種有12 種之多［3］，但流通于市場(chǎng)的主要有Ilex ver?ticillata‘Oosterwijk’，Ilex verticillata‘A.Gray’等品種，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足市場(chǎng)的需求。扦插繁殖成本低、省時(shí)省力，但它需要大量的現(xiàn)有苗木才能滿足插穗的要求，對(duì)于新引進(jìn)的數(shù)量較少的新品種，組織培養(yǎng)技術(shù)是唯一能利用較少的植物材料不斷地?cái)U(kuò)大繁殖來快速獲得大量苗木的方法，同時(shí)能夠保持母本的優(yōu)良性狀。陳茜等［4］對(duì)“奧斯特”品種的雌、雄株嫩枝進(jìn)行了組織培養(yǎng)技術(shù)的摸索，張俊林等［5］與李永欣等［6］也對(duì)“奧斯特”和Ilex verticillata‘A.Gray’品種進(jìn)行了研究。但這些品種完整的、快速的再生體系還沒有完全建立，其他品種如“Red Sprite”，“Winter Gold”的組培快繁研究尚未見報(bào)道。

為了擴(kuò)大引種北美冬青新品種的繁殖系數(shù)，滿足市場(chǎng)對(duì)苗木的需求，本研究對(duì)新引進(jìn)的北美冬青2 個(gè)品種“Red Sprite”，“Winter Gold”進(jìn)行了組織培養(yǎng)技術(shù)研究（前者果實(shí)紅色，后者果實(shí)為黃色），建立了2個(gè)品種的高效增殖、高效再生技術(shù)體系，突破了北美冬青組培苗生根率低、移栽成活難的技術(shù)瓶頸，為北美冬青苗木的推廣及新品種培育奠定了基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

北美冬青（Ilex verticillata）品種“Red Sprite”，“Winter Gold”，2 個(gè)新品種2 年生扦插苗2017 年由美國(guó)引進(jìn)，苗木培養(yǎng)在南京林業(yè)大學(xué)在氣候室中，待苗木抽出新梢后，剪取幼嫩枝條5.0～6.0 cm進(jìn)行組織培養(yǎng)。

1.2 外植體消毒和莖段腋芽誘導(dǎo)

將新采幼嫩枝條洗去表面污漬后去葉，在超凈臺(tái)上將嫩梢浸入70%乙醇溶液中30 s，去乙醇，用無菌水沖洗2～3 次，再將材料放入0.3% KMnO4溶液中進(jìn)行二次消毒，期間不斷搖動(dòng)或攪拌，20 min后用無菌水清洗4～5次，用無菌濾紙吸干水分，然后剪取1.0～2.0 cm的帶芽嫩莖接種在添加不同組合6-芐氨基腺嘌呤（6-BA 0.5、1.0 mg·L-1）、萘乙酸（NAA 0.2、0.5 mg·L-1）和吲哚丁酸（IBA 0.2、0.5 mg·L-1）的MS 培養(yǎng)基上，進(jìn)行腋芽的誘導(dǎo)，共8個(gè)處理。每個(gè)大試管接種1 個(gè)外植體，每個(gè)處理20 管，3 次重復(fù)，培養(yǎng)25 d 后，統(tǒng)計(jì)長(zhǎng)度大于5 mm的萌發(fā)新梢數(shù)，計(jì)算腋芽的誘導(dǎo)率。

1.3 叢生芽的高效增殖培養(yǎng)及壯苗培養(yǎng)

待誘導(dǎo)出的腋芽長(zhǎng)至1.0～1.5 cm 時(shí)進(jìn)行增殖培養(yǎng)，將萌發(fā)的新梢剪下接種到叢芽增殖培養(yǎng)基中。以MS 為基本培養(yǎng)基，添加6-BA、NAA 濃度分別采用0.1、0.5 和1.0 mg·L-1，CPUU（氯吡苯脲）濃度采用0、0.5 和1.0 mg·L-1進(jìn)行L9（33）正交組合，共9 個(gè)處理（見表1）；每個(gè)處理6 瓶，每瓶3 個(gè)腋芽，3次重復(fù)。培養(yǎng)25 d 后繼代一次，再培養(yǎng)25 d 后統(tǒng)計(jì)長(zhǎng)度大于5 mm叢生芽的數(shù)量，計(jì)算增殖系數(shù)。

表1 北美冬青品種芽增殖的3種調(diào)節(jié)劑正交組合表Table 1 Experiment factors and level on plant growth regulation for adventitious bud proliferation of two I.verticillata L. varieties

將叢生芽切割成3～4 cm3的組織塊接種于壯苗培養(yǎng)基中。壯苗培養(yǎng)基為以MS+0.5 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1NAA+1.0 mg·L-1赤霉素（GA）為基礎(chǔ)，添加0.05、0.25、0.50 和1.00 mg·L-1的噻苯?。╰hifenolone，TDZ），每個(gè)處理6 瓶，每瓶接種一個(gè)芽叢塊，3 次重復(fù)。培養(yǎng)25 d 后，統(tǒng)計(jì)芽苗生長(zhǎng)狀況和增殖系數(shù)。

1.4 組培苗的生根誘導(dǎo)

待上述壯苗培養(yǎng)基的叢芽長(zhǎng)至3.0～4.0 cm 時(shí)進(jìn)行生根誘導(dǎo)培養(yǎng)。以1/2 MS 為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的IBA 和NAA（0.1、0.4 和1.0 mg·L-1）和1.0 g·L-1的活性炭（activated carbon，AC），每個(gè)處理6 瓶，每瓶8 株組培苗。培養(yǎng)35 d 后，統(tǒng)計(jì)生根率及根數(shù)。

上述所有培養(yǎng)基中均添加30 g·L-1蔗糖，6.5 g·L-1瓊脂，pH 調(diào)至5.8。培養(yǎng)室溫度為（25±2）℃，光照強(qiáng)度55μmol·m-2·s-1，光照時(shí)間14 h·d-1。

1.5 移栽與培養(yǎng)

當(dāng)上述生根培養(yǎng)基中組培苗長(zhǎng)至6.0～7.0 cm左右，不定根長(zhǎng)約為5.0 cm 以上時(shí)，進(jìn)行移栽。將封口膜或瓶蓋打開，用鑷子將生根苗輕輕從培養(yǎng)瓶中取出，洗去根部殘余的培養(yǎng)基，將組培苗根部浸入0.1%多菌靈溶液中3 min，然后移栽至盛有不同配比栽培基質(zhì)的無紡布袋中，用陳穎等［7］發(fā)明的組培苗移植栽裝置培育20～30 d，期間每7 d 補(bǔ)充一次水分，20～30 d 后轉(zhuǎn)入室外自然條件下培養(yǎng)。每個(gè)處理35 株，3 次重復(fù)，于第30 d 時(shí)統(tǒng)計(jì)小苗成活情況。

1.6 組培苗的田間培養(yǎng)

待成活后的組培苗生長(zhǎng)至10 cm以上時(shí)，將其移至到室外的扦插池中培養(yǎng)，正常管理。

1.7 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)

腋芽誘導(dǎo)率、增殖系數(shù)的計(jì)算陳茜等［4］，用Excel 2016 進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，SPSS 20.0 進(jìn)行方差分析，表中不同小寫字母表示在P＜0.05 水平上差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 兩個(gè)新品種北美冬青莖段腋芽的誘導(dǎo)

由表2可看出，不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合對(duì)莖段腋芽的誘導(dǎo)效果不同。品種“Red Sprite”在MS+0.5 mg·L-16-BA+0.2 mg·L-1IBA 的培養(yǎng)基中萌發(fā)的新梢長(zhǎng)度最長(zhǎng)為1.45 cm，誘導(dǎo)率為91.7%，而在MS+1.0 mg·L-16-BA+0.2 mg·L-1NAA 的 培 養(yǎng) 基 中，“Red Sprite”的腋芽誘導(dǎo)率為100%，新梢長(zhǎng)度為1.34 cm。從表2 中還可以看出，3 種調(diào)劑劑中1.0 mg·L-16-BA 對(duì)“Red Sprite”品種腋芽的誘導(dǎo)影響更大一些，此時(shí)NAA 或IBA 濃度在0～0.5 mg·L-1時(shí)其腋芽誘導(dǎo)率都可達(dá)到91.7%～100%；而6-BA在0.5 mg·L-1時(shí)，除添加0.2 mg·L-1也可達(dá)到100%外，其他NAA 和IBA 的組合腋芽誘導(dǎo)率較低，其中在NAA 0.5 mg·L-1時(shí)腋芽誘導(dǎo)率最低（66.7%，4 號(hào)培養(yǎng)基）。

表2 不同6-BA，NAA，IBA組合對(duì)落葉型冬青腋芽誘導(dǎo)的影響（MS為基本培養(yǎng)基）Table 2 Effects of different combinations of 6-BA，NAA and IBA on shoots induction of two I. verticillata L. varieties（MS as basic medium）

對(duì)于品種“Winter Gold”來說，6-BA 與IBA 組合不及6-BA與NAA的組合效果好，在6-BA與IBA組合中，只有14 號(hào)培養(yǎng)基腋芽誘導(dǎo)率達(dá)到了100%，其他的3 個(gè)培養(yǎng)基誘導(dǎo)率都在83.0%～85.1%；而6-BA 與NAA 組合中，4 個(gè)培養(yǎng)基其腋芽的誘導(dǎo)率都達(dá)到了100%（P＜0.05）。最適培養(yǎng)基是MS+1.0 mg·L-16-BA+0.2 mg·L-1NAA，新梢長(zhǎng)度最長(zhǎng)，達(dá)1.7 cm，誘導(dǎo)率可達(dá)100.0%（見圖1E）。

2.2 兩個(gè)北美冬青新品種芽的高效增殖培養(yǎng)

從表3中可以看出，兩個(gè)北美冬青品種的腋芽在增殖培養(yǎng)基上繼代后50 d后，3種調(diào)節(jié)劑對(duì)品種“Red Sprite”芽的增殖系數(shù)和每瓶芽數(shù)產(chǎn)生不同的影響。方差分析表明，4號(hào)培養(yǎng)基的增殖系數(shù)和芽數(shù)最高，與其他培養(yǎng)基存在著顯著的差異（P＜0.05），3 號(hào)，5 號(hào)，7 號(hào)，8 號(hào)培養(yǎng)基的增殖系數(shù)次之（4者之間差異不顯著，P＞0.05），都在4.2～4.8；增殖系數(shù)最低的培養(yǎng)基是1號(hào)，只有2.7，顯著地低于其他的培養(yǎng)基。極差分析表明，6-BA 水平在0.5 mg·L-1、NAA 在0.1 mg·L-1、CPPU 在1.0 mg·L-1分別優(yōu)于其它2 個(gè)水平，3種調(diào)節(jié)劑中6-BA對(duì)品種“Red Sprite”芽增殖的影響最大（R=1.17），CPPU 次之，NAA 影響最小，0.5 和1.0 mg·L-1的CPPU 對(duì)增殖系數(shù)的影響沒有顯著性差異，因此，品種“Red Sprite”叢生芽的最佳培養(yǎng)基為MS+0.1 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1CPPU，增殖系數(shù)達(dá)5.7，叢生芽數(shù)每瓶最高達(dá)57.0個(gè)（見圖1：B～C）。

表3 不同調(diào)節(jié)劑組合對(duì)2個(gè)北美冬青品種叢生芽增殖的影響Table 3 Effects of different regulator combinations on shoot proliferation of two I.verticillata L. varieties

不同組合的3 種調(diào)節(jié)劑對(duì)品種“Winter Gold”的叢芽增殖也產(chǎn)生不同的影響，方差分析表明13號(hào)培養(yǎng)基的增殖系數(shù)最高，達(dá)4.5（遠(yuǎn)低于“Red Sprite”品種），與其他處理存在著顯著的差異（P＜0.05）；12 號(hào)，14 號(hào)，16 號(hào)培養(yǎng)基的增殖系數(shù)次之，在2.9～3.5 范圍，10 號(hào)培養(yǎng)基的增殖系數(shù)最低，只有1.1，與其他培養(yǎng)基都存在著顯著的差異（P＜0.05）。極差分析表明，同“Red Sprite”品種一樣，6-BA 水平在0.5 mg·L-1、NAA 在0.1 mg·L-1、CPPU在1.0 mg·L-1，都分別優(yōu)于其他2 個(gè)水平，3 種調(diào)節(jié)劑中CPPU 對(duì)品種“Winter Gold”叢芽的增殖影響最大（R=1.7），6-BA 次之，NAA 影響最小。從增殖系數(shù)和叢芽數(shù)來看，品種“Winter Gold”的叢芽增殖最佳培養(yǎng)基為MS+0.1 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1CPPU，芽數(shù)每瓶達(dá)到28.0 個(gè)，增殖系數(shù)4.5（見圖1：F～G）。

2.3 TDZ對(duì)落葉型冬青壯苗培養(yǎng)的影響

培養(yǎng)基中添加CPPU 雖有利于叢生芽的增殖，但叢芽較細(xì)嫩不利于生根，因此在以上篩選出的最優(yōu)增殖培養(yǎng)基MS+0.5 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1NAA 的基礎(chǔ)上，添加1.0 mg·L-1GA（赤霉素GA3）和不同濃度的TDZ 進(jìn)行壯苗培養(yǎng)25 d 后，發(fā)現(xiàn)TDZ對(duì)2個(gè)品種組培芽苗的高度、生長(zhǎng)狀況及增殖系數(shù)都有不同的影響。表4 中，品種“Red Sprite”在添加1.0 mg·L-1TDZ 時(shí)既能增加繁殖系數(shù)，又能增強(qiáng)芽苗的長(zhǎng)勢(shì)，芽苗長(zhǎng)得高而粗壯，最高達(dá)6.8 cm，增殖系數(shù)達(dá)4.6（見圖1D）。而0.05 mg·L-1TDZ 對(duì)品種“Winter Gold”壯苗效果最好，芽苗最高為4.4 cm，增殖系數(shù)達(dá)3.1，與其他處理間存在顯著差異（P＜0.05，見表4、圖1H）。

表4 TDZ對(duì)2個(gè)北美品種芽苗增殖及生長(zhǎng)的影響Table 4 Effects of TDZ on shoots proliferation and growth of two I.verticillata L. varieties

2.4 兩個(gè)新品種冬青組培苗高效再生體系的建立

從表5中可以看出，單獨(dú)添加0.4 mg·L-1NAA，品種“Red Sprite”的生根率只有25.0%。在0.4 mg·L-1NAA基礎(chǔ)上，添加0.5～2.0 mg·L-1AC有利于“Red Sprite”芽苗的生根，生根率最高可達(dá)66.7%，但AC 濃度在2.0 mg·L-1時(shí)生根率下降（56.4%）。不同濃度IBA 添加1.0 mg·L-1AC 時(shí)，生根率只有16.7%～18.3%。而在NAA 和AC 共存下添加0.4～1.0 mg·L-1的IBA可顯著地提高“Red Sprite”芽苗的生 根 率，其 中1/2MS+1.0 mg·L-1NAA+1.0 mg·L-1AC+1.0 mg·L-1IBA 生根率最高，根數(shù)也最多，但組培苗根較粗壯、脆弱易斷，且苗高度也被抑制。而1/2MS+0.4 mg·L-1NAA+1.0 mg·L-1AC+0.4 mg·L-1IBA 培養(yǎng)基上的苗高達(dá)5.54 cm、根數(shù)達(dá)7.0、生根率達(dá)95%，應(yīng)為“Red Sprite”的最佳培養(yǎng)基（見表5，圖2A）。

表5 品種“Red Sprite”的不定根再生體系建立（1/2MS基本培養(yǎng)基）Table 5 Establishment of adventitious root regeneration system of“Red Sprite”variety（1/2 MS basic medium）

表6 品種“Winter Gold”的不定根再生體系建立（1/2MS基本培養(yǎng)基）Table 6 Establishment of adventitious root regeneration system for“Winter Gold”variety（1/2 MS basic medium）

表7 不同栽培基質(zhì)對(duì)2個(gè)北美冬青品種組培苗移栽成活率的影響Table 7 Effects of different culture substrates on survival rates of plantlets of two I.verticillata L. varieties

同樣，只有0.4 mg·L-1NAA 的存在下，品種“Winter Gold”的生根率也只有25%，在1.0 mg·L-1AC 存在下，分別添加0.1～1.0 mg·L-1的NAA和IBA 的情況下生根率提高，1.0 mg·L-1的NAA 和0.4 mg·L-1IBA 生根率提高到了69.2%和85.5%。而AC、NAA 和IBA 三者共存的情況下，品種“Winter Gold”芽苗的生根再次提高，最高可達(dá)到97%，即最佳培養(yǎng)基為1/2MS+0.4 mg·L-1NAA+1.0 mg·L-1AC+0.4 mg·L-1IBA，根數(shù)7.0，苗高5.0 cm；在其他不變的情況下NAA 降低到0.1 mg·L-1生根率達(dá)90%，根數(shù)5.5，苗高4.9 cm（見表6，圖2D），但當(dāng)NAA 與IBA 都升高至1.0 mg·L-1時(shí)，生根率又降低至67.0%。

2.5 兩個(gè)北美冬青品種組培苗高效移栽體系的建立

待生根小苗根長(zhǎng)在5.0 cm 以上，苗高在9.0～10.0 cm 時(shí)，將組培苗從培養(yǎng)基中取出移栽到不同比例基質(zhì)的移栽裝置中［7］，按照上述管理方法，移栽成活率大大提高。移栽成活率較高的栽培基質(zhì)為泥炭土∶花園土∶珍珠巖=3∶1∶2 或泥炭土樣∶珍珠巖=3∶2（體積比），“Red Sprite”成活率達(dá)92.3%～95.7%（見圖2B），“Winter Gold”在88.2%～96.8%（見圖2D，表7）。

2.6 組培苗的室外生長(zhǎng)

在培養(yǎng)室生長(zhǎng)至15 cm以上的組培苗，移至到室外的扦插池中培養(yǎng)，進(jìn)行正常澆水施肥管理，2個(gè)月后苗木高度達(dá)20 cm，生長(zhǎng)正常（見圖2：C，F(xiàn)）。

3 討論

如何通過激素調(diào)控植物細(xì)胞的命運(yùn)，進(jìn)行重編程進(jìn)而發(fā)育成為一個(gè)獨(dú)立的植株或器官，是建立植物高效再生技術(shù)的理論基礎(chǔ)之上［8］。直接器官發(fā)生是指通過莖段頂芽或腋芽的萌發(fā)誘導(dǎo)叢生芽來實(shí)現(xiàn)快速繁殖的過程，具有遺傳性狀穩(wěn)定、能夠快速獲得優(yōu)良植株的優(yōu)點(diǎn)［9］。從我們的研究結(jié)果來看，北美冬青腋芽誘導(dǎo)的叢生芽屬于直接器官發(fā)生，這為保持北美冬青新品種的優(yōu)良性狀提供了保障。另外細(xì)胞分裂素（CTK）和生長(zhǎng)素（IAA）的比值決定著不定芽的分化能力和繁殖速度［10］，CTK/IAA 比值高有利于芽的分化，比值低有利于根的分化，中等比值有利愈傷組織的分化［11］。在北美冬青的組織培養(yǎng)中，高比值的6-BA/NAA（2.0～5.0，3 號(hào)，7 號(hào)培養(yǎng)基）或6-BA/IBA 比值在2.0～2.5（1 號(hào)和6 號(hào)培養(yǎng)基）都有利于品種“Red Sprite”的腋芽的誘導(dǎo)，而比值的6-BA/NAA 為1.0或6-BA/IBA 為1.0 或5.0（如4 號(hào)培養(yǎng)基）時(shí)腋芽誘導(dǎo)率降低。這些結(jié)果與云南櫻桃的腋芽誘導(dǎo)結(jié)果一致［12］。叢生芽的增殖除了與6-BA/NAA 的比值有關(guān)外，再次添加另外一種生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑CPPU 后可更有效的提高品種“Red Sprite”和“Winter Gold”腋芽叢生芽的增殖系數(shù)。這與我們前文在“奧斯特”品種的效果一致［4］。CPPU 屬苯基脲類化合物，其生理活性高于6-BA，而且CPPU 和6-BA 在促進(jìn)芽增殖方面有共效作用［13～14］。

陳茜等［4］發(fā)現(xiàn)“奧斯特”品種的芽苗在生根誘導(dǎo)培養(yǎng)到第50 天后的生根率最高達(dá)到66.7%。張俊林等［5］在連續(xù)培養(yǎng)了90 d 的“奧斯特”品種組培苗中仍未見生根現(xiàn)象，直到繼代14 代次后才有根的出現(xiàn)，說明北美冬青的生根條件還需進(jìn)一步的優(yōu)化。我們同樣發(fā)現(xiàn)北美冬青組培苗的生根，除了與添加的調(diào)節(jié)劑有關(guān)外，還與前期叢生芽的繼代次數(shù)關(guān)系密切，在將第一次誘導(dǎo)的有效叢生芽進(jìn)行不定根誘導(dǎo)時(shí)，發(fā)現(xiàn)生根時(shí)間長(zhǎng)（50 d），生根率較低，只有18%左右（資料未給出），但在不斷地將叢生芽繼代增殖后將有效芽（第三代）進(jìn)行生根誘導(dǎo)時(shí)，生根率提高至25.0%（添加0.4 mg·L-1的NAA），分 別 添 加NAA 和IBA 后 生 根 率“Red Sprite”提高到33.3%，“Winter Gold”提高到48.3%以上，而在NAA 和IBA 共存情況下添加活性炭生根率分別提高到95.0%和96.7%，且根系生長(zhǎng)旺盛，苗木長(zhǎng)勢(shì)好（見表5～6）。繼代次數(shù)對(duì)生根率的影響在山杏、蘋果的組織培養(yǎng)中也有類似的現(xiàn)象，山杏芽的增殖從初代培養(yǎng)到1 次、2 次繼代培養(yǎng)后各類組培苗的叢生芽誘導(dǎo)率都逐漸增加［15］。叢生芽繼代次數(shù)（第2～3 代后）促進(jìn)芽苗生根的作用，可能與叢芽的返幼狀態(tài)有關(guān)。研究表明不同部位的毛白楊經(jīng)多次繼代后有幼化的趨勢(shì)［16］，白花泡桐經(jīng)過3～10 次繼代后可完全得到幼化［17］，裴東等［18］認(rèn)為幼齡狀態(tài)的林木具有良好的生根能力，因此我們認(rèn)為北美冬青新品種“Red Sprite”和“Winter Gold”叢生芽經(jīng)過多次繼代后，通過生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的調(diào)控作用，使得誘導(dǎo)的從生芽逐步返回幼態(tài)，其生根能力得到提高，因而生根率增加。另外在生根培養(yǎng)基中添加活性炭有利于生根，如貫葉連翹［19］、江南越桔組莖段［20］的組培生根培養(yǎng)基中都添加了1.0～3.5 g·L-1AC，有的生根率達(dá)100%，與我們的結(jié)果相一致?；钚蕴看龠M(jìn)芽生根的作用，可能是這些植物的生根需要黑暗的環(huán)境和吸收一些過高調(diào)節(jié)劑成分有關(guān)。而在楸樹莖段腋芽再生過程中，活性炭有抑制根數(shù)的作用，可能是活性炭濃度過高（2.0～4.0 g·L-1）［21］或者植物本身的特性所致［22］。

組培苗移栽成活率是檢驗(yàn)組織培養(yǎng)技術(shù)體系是否成熟的關(guān)鍵點(diǎn)，通過采用我們發(fā)明的移栽裝置大大提高了組培苗的成活率。另外栽培基質(zhì)的比例也影響著苗木的成活率和長(zhǎng)勢(shì)，蛭石∶珍珠巖∶園土=1∶1∶3 配比的基質(zhì)上有利于狹葉黃芩組培苗的成活率［23］；金桂微繁苗配比為苗圃土∶珍珠巖∶腐殖土=2∶3∶7 的基質(zhì)，成 活 率可達(dá)到82.2%［24］；花生殼∶石灰?guī)r∶蛭石∶活苔蘚=1∶1∶1∶2的基質(zhì)鐵皮石斛的移栽成活率達(dá)75%［25］。在我們的研究中4 種不同配比基質(zhì)中如泥炭土∶花園土∶珍珠巖∶蛭石=4∶1∶2∶3，有蛭石存在的情況下，成活率最高在80%～83%，但去掉蛭石后，泥炭土∶花園土∶珍珠巖=3∶1∶2 或者泥炭土∶珍珠巖為3∶2時(shí)，可顯著提高這2 個(gè)品種的成活率，都達(dá)到88%以上，其原因可能是本研究中蛭石的添加量過高減少了基質(zhì)空隙度，透氣性不強(qiáng)，使得成活率降低。

綜上，本研究形成了一整套“Red Sprite”和“Winter Gold”2 個(gè)品種的高效腋芽、高效叢生芽、高效生根和高效移植的組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)體系。腋芽誘導(dǎo)25 d，腋芽增殖25 d，壯苗培養(yǎng)25 d，生根誘導(dǎo)35 d，移栽成活20 d，即130 d內(nèi)即可完成整個(gè)體系。經(jīng)優(yōu)化后將增殖（與壯苗合并）、生根到移栽成苗（省去煉苗過程）整個(gè)過程縮短到了80 d?！癛ed Sprite”品種叢生芽的最高增殖系數(shù)為5.7，生根率達(dá)最高達(dá)95.0%，移栽成活率達(dá)95.7%；“Winter Gold”品種叢生芽的增殖系數(shù)為4.5，生根率達(dá)97.0%，移栽成活率達(dá)96.8%。該體系有效地縮短了繁殖的時(shí)間，增加了苗木的繁殖率，保持了其優(yōu)良的觀賞特性，為北美冬青苗木的推廣和觀賞園、切枝園的建立提供了基礎(chǔ)。