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    用反相高效液相色譜法測定克林霉素磷酸酯注射液中克林霉素及有關(guān)物質(zhì)含量的效果分析

    2021-02-24 10:44:40董宏偉李新軍王曉光
    當(dāng)代醫(yī)藥論叢 2021年2期
    關(guān)鍵詞:磷酸酯克林霉素

    董宏偉,李新軍,王曉光

    (福安藥業(yè)集團(tuán)煙臺只楚藥業(yè)有限公司,山東 煙臺 264002)

    克林霉素磷酸酯注射液是臨床上的一種常用藥。此藥是克林霉素的衍生品,其抗菌作用比克林霉素更強(qiáng),且具有良好的可吸收性[1-2]。有關(guān)物質(zhì)是指在生產(chǎn)藥物的過程中帶入的起始原料、中間體、聚合體、副反應(yīng)產(chǎn)物及在貯藏藥物過程中出現(xiàn)的降解產(chǎn)物等[3]。為了有效地控制克林霉素磷酸酯注射液的質(zhì)量,保證患者用藥的安全性,有必要對此藥中克林霉素的含量及有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行測定。本次研究主要是分析用反相高效液相色譜(RP-HPLC)法測定克林霉素磷酸酯注射液中克林霉素及有關(guān)物質(zhì)含量的效果。

    1 儀器與試劑

    1.1 實驗儀器

    本次實驗使用的儀器是Waters600 型高效液相色譜儀、Waters490E 型紫外檢測器、AR2140 型電子天平、FE20 型pH 計。

    1.2 實驗試劑

    本次實驗使用的試劑是克林霉素磷酸酯對照品(含有76.9%的克林霉素)、克林霉素磷酸酯注射液、磷酸二氫鉀、甲醇。

    2 色譜條件

    本次實驗使用的色譜柱為C18 色譜柱(150×4.6mm,5 μm),使用的填料為ODS 填料,流動相為pH 2.5 的磷酸二氫鉀溶液-乙腈(775:225),流動相的流速為1.0ml/min,運(yùn)行時間為三倍主峰保留時間,加樣量為20 μl,檢測波長為273 nm。

    3 制備溶液的方法

    3.1 制備對照品溶液的方法

    精密量取一定量的克林霉素磷酸酯,將其置于容量為20ml 的量瓶中。在此量瓶中加入流動相,將克林霉素磷酸酯稀釋到指定濃度(0.48 mg/ml),搖勻以備用。

    3.2 制備供試品溶液的方法

    精密量取2 ml 的克林霉素磷酸酯注射液。在此注射液中加入流動相,將其稀釋至0.48 mg/ml,搖勻以備用。

    3.3 制備空白溶液的方法

    以克林霉素磷酸酯注射液處方作為參照,以流動相作為溶劑,制備空白溶液(濃度為0.48 mg/ml,不含主藥),搖勻以備用。

    4 實驗方法及結(jié)果

    4.1 進(jìn)行線性關(guān)系實驗的方法及結(jié)果

    取約49 mg 的克林霉素磷酸酯對照品,精密稱定,將其置于量瓶中。用流動相將其稀釋、溶解至指定刻度。分別精密吸取4.5 ml、3.5 ml、2.5 ml、1.5 ml、0.5 ml 的克林霉素磷酸酯對照品溶液,將其分別置于容積為10 ml 的量瓶中,加入流動相,稀釋到指定刻度。以本次實驗的色譜條件作為基礎(chǔ),檢測峰面積。將峰面積作為縱坐標(biāo),將克林霉素的濃度作為橫坐標(biāo),進(jìn)行回歸分析。結(jié)果顯示,當(dāng)克林霉素的濃度在0.07475 ~0.67363 mg/L 區(qū)間時,呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系,r=0.9992。

    4.2 進(jìn)行加樣回收率實驗的方法及結(jié)果

    取6 份含量已知的樣品,將克林霉素磷酸酯對照品分別加入其中,計算回收率。結(jié)果顯示,測得回收率的平均值為99.8%,RSD 值為0.7%。詳細(xì)結(jié)果見表1。

    表1 進(jìn)行加樣回收率實驗的方法及結(jié)果

    4.3 對克林霉素磷酸酯注射液中克林霉素及有關(guān)物質(zhì)含量進(jìn)行檢測的方法及結(jié)果

    取20 μl 的對照品溶液,將其置于液相色譜儀中,對檢測儀器的靈敏度進(jìn)行調(diào)節(jié),保證主成分峰值的最高峰介于滿量程的10% ~25% 之間。各取20 μl 的供試品溶液、對照品溶液,將這兩種溶液置于色譜儀中,對相關(guān)檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行記錄。如果在色譜圖上供試品溶液顯示為雜質(zhì)峰,單一雜質(zhì)峰的面積需≤4 倍(4.0%)的對照品溶液主峰面積。不同雜質(zhì)峰面積的總和需≤8 倍(8.0%)的對照品溶液主峰面積。精密量取適量的克林霉素磷酸酯,以流動相將其稀釋為0.45 mg/ml 的溶液。量取10 μl 此溶液,將其稀釋后置于高效液相色譜儀中,記錄色譜圖。量取適量的克林霉素磷酸酯對照品,以同樣的方法計算供試品中克林霉素的峰面積。吸取0.487 g/L 的克林霉素磷酸酯對照品溶液,連續(xù)進(jìn)樣5 次,測量峰面積。取適量的本品,用流動相將其稀釋為0.48 mg/ml 的溶液,取其中的10 μl 進(jìn)行檢測,記錄色譜圖。另取一定量的克林霉素磷酸酯對照品,以同法進(jìn)行測定。詳細(xì)結(jié)果見表2。

    表2 對克林霉素磷酸酯注射液中克林霉素及有關(guān)物質(zhì)含量進(jìn)行檢測的方法及結(jié)果(%)

    5 討論

    克林霉素磷酸酯注射液多被用于治療由革蘭氏陽性菌引起的多種感染性疾病。為了確?;颊哂盟幍陌踩?,加強(qiáng)對克林霉素磷酸酯注射液進(jìn)行質(zhì)量管理和成分分析具有重要的臨床意義。近年來,臨床上常用RP-HPLC 法對克林霉素磷酸酯注射液進(jìn)行質(zhì)量管理和成分分析。此法具有分離速度快、檢測靈敏度高的特點。本次實驗的結(jié)果顯示,克林霉素的含量在0.07475 ~0.67363 mg/L 區(qū)間時,呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系,r=0.9992。本法測得回收率的平均值為99.8%,RSD 值為0.7%。克林霉素磷酸酯注射液中克林霉素的含量為99.3% ~104.4%,相關(guān)物質(zhì)的含量為2.7%~3.0%。這說明,用RP-HPLC 法測定克林霉素磷酸酯注射液中的克林霉素及有關(guān)物質(zhì)含量的效果較為理想。

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