腺苷酸環(huán)化酶相關(guān)蛋白2、纖維連接蛋白1表達(dá)與胃癌病理類型及預(yù)后關(guān)系探討

馬 蓉,張新愛(ài),楊 洋,吳紅梅

(寶雞市人民醫(yī)院病理科,陜西 寶雞721000)

胃癌是常見(jiàn)惡性腫瘤，具有較高的發(fā)病率，在我國(guó)致死率僅次于肺、肝癌[1]。盡管手術(shù)及放、化療對(duì)其生存情況有所改善，但其5年生存率仍較低，嚴(yán)重影響人類健康[2]。有研究表明分子生物標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用將改善患者的預(yù)后，腺苷酸環(huán)化酶相關(guān)蛋白2(Adenylate cyclase-associated protein 2,CAP2)存在于人體的腦、心臟、骨骼、肌膚中，有研究表示其在肝癌、乳腺癌、膀胱癌等腫瘤組織中呈現(xiàn)高表達(dá)，近來(lái)研究表明其與胃癌的發(fā)展及預(yù)后也存在一定關(guān)系[3]。纖維連接蛋白1(Fibronectin,FN1)是細(xì)胞外基質(zhì)糖蛋白，參與基質(zhì)重塑，在細(xì)胞黏附、生長(zhǎng)中發(fā)揮作用，與腫瘤、關(guān)節(jié)炎等疾病相關(guān)[4]。本研究探討胃癌及癌旁組織中CAP2、FN1的表達(dá)及其表達(dá)量與患者病理類型及預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2016年2月至2017年12月來(lái)我院行胃癌根治術(shù)手術(shù)切除術(shù)患者118例，男63例，女55例，年齡為26～73歲，平均(48.59±7.34)歲。所有患者術(shù)后切除標(biāo)本于30 min內(nèi)采集，并取離腫瘤邊緣5 cm以上的癌旁組織作為對(duì)照。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：①接受手術(shù)前未經(jīng)過(guò)放、化療，術(shù)后經(jīng)病理確診為胃癌；②患者均同意進(jìn)行手術(shù)；③患者病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并惡性腫瘤患者；②伴有心、肝、腎等重大疾病患者；③不能完成隨訪患者；④術(shù)中死亡患者。本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)同意。

1.2 檢測(cè)方法 采用免疫組化法檢測(cè)胃癌組織及癌旁組織中CAP2、FN1的表達(dá)情況。步驟：切片、烤片，常規(guī)脫蠟后，用梯度酒精脫水處理，再進(jìn)行微波抗原組織修復(fù)15 min，冷卻后用PBS沖洗，再用3% H2O2孵育10 min，PBS沖洗2次后，加入正常山羊血清進(jìn)行封閉20 min，加入兔單抗CAP2(或兔單抗FN1)，37 ℃下孵育1 h，TBST沖洗2次。加入鼠兔通用二抗，37 ℃下孵育1 h，PBS沖洗2次，再行DAB顯色、蘇木素復(fù)染、脫水、透明等，最后用中性樹(shù)膠封片，顯微鏡下觀察。參考Sung等[5]標(biāo)準(zhǔn)，出現(xiàn)棕黃色顆粒為CAP2及FN1表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞，以0～4分來(lái)判定陽(yáng)性細(xì)胞的百分比(陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100)：陽(yáng)性細(xì)胞百分比<5%(0分)；陽(yáng)性細(xì)胞百分比為6%～25%(1分)；陽(yáng)性細(xì)胞百分比為26%～50%(2分)；陽(yáng)性細(xì)胞百分比為51%～75%(3分)；陽(yáng)性細(xì)胞百分比>75%(4分)。染色強(qiáng)度按無(wú)染色，弱、中、強(qiáng)染色分別評(píng)為0、1、2、3分。以兩個(gè)指標(biāo)的乘積(IS)作為總評(píng)分：<4分為低表達(dá)，≥4分為高表達(dá)。

1.3 觀察指標(biāo) 以電話及門診形式對(duì)所有患者進(jìn)行隨訪，隨訪內(nèi)容包括：患者病情進(jìn)展、影像學(xué)檢查，記錄患者生存情況，在第1年每3個(gè)月隨訪1次，第2～3年，每6個(gè)月隨訪1次，隨訪截止時(shí)間2020年2月。

2 結(jié) 果

2.1 CAP2、FN1在胃癌組織及癌旁組織中的表達(dá) CAP2、FN1在胃癌組織中呈高表達(dá)(P<0.05)，在癌旁組織呈低表達(dá)(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 CAP2、FN1在胃癌組織及癌旁組織中的表達(dá)(例)

2.2 胃癌病理類型與CAP2、FN1表達(dá)的關(guān)系 CAP2、FN1表達(dá)與組織分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度有關(guān)(均P<0.05)，與性別、年齡、癌細(xì)胞類型、腫瘤部位、腫瘤大小無(wú)關(guān)(均P>0.05)，見(jiàn)表2。

表2 胃癌病理類型與CAP2、FN1表達(dá)的關(guān)系(例)

2.3 CAP2、FN1表達(dá)與預(yù)后關(guān)系 隨訪3年，存活71例，總生存率為60.17%。CAP2低表達(dá)組的3年生存率為76.47%，高于CAP2高表達(dá)組的47.76%(P<0.01)；FN1低表達(dá)組的3年生存率為77.55%，高于FN1高表達(dá)組的47.83%(P<0.01)，見(jiàn)表3(圖1)。

表3 CAP2、FN1表達(dá)與預(yù)后關(guān)系

圖1 CAP2、FN1表達(dá)與生存分析

3 討 論

多數(shù)胃癌患者確診時(shí)已處于晚期，患者預(yù)后較差，若能從分子水平探究胃癌的發(fā)病機(jī)制，尋找新的預(yù)后指標(biāo)，并進(jìn)行靶向治療，將有利于延長(zhǎng)患者的生存時(shí)間[6]。CAP2最初在酵母中發(fā)現(xiàn)，能夠調(diào)控信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及細(xì)胞骨架，在調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架中起著重要作用，與細(xì)胞遷移相關(guān)，是腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)，能為分子靶向治療提供依據(jù)[7]。在肝細(xì)胞癌、乳腺癌中CAP2均呈高表達(dá)，并與患者生存情況有關(guān)[8]。還有研究[9]表明CAP2在惡性黑色素瘤中過(guò)表達(dá)，參與了惡性黑色素瘤的侵襲行為，是其預(yù)后的一種新標(biāo)志物。本研究中，CAP2在胃癌組織中呈高表達(dá)，其表達(dá)量與組織分化、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，說(shuō)明CAP2參與胃癌的發(fā)生與發(fā)展。CAP2定位于ras基因的下游，參與了細(xì)胞的極化，能夠通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖活性，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生[10]。還有研究[11]表明CAP2通過(guò)促進(jìn)LRP5/6磷酸化，參與Wnt信號(hào)調(diào)節(jié)，從而影響胃癌發(fā)展。CAP2低表達(dá)組的3年生存率為76.47%，高于CAP2高表達(dá)組的47.76%，說(shuō)明CAP2的表達(dá)量與胃癌患者預(yù)后相關(guān)，能作為預(yù)后的標(biāo)志物。葛思堂等[12]研究表明CAP2在胃癌組織中的表達(dá)量均高于癌旁組織，且CAP2高表達(dá)組患者術(shù)后5年生存率低于低表達(dá)組，與本研究結(jié)果一致。Li等[13]研究表明CAP2在增強(qiáng)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)中起著重要作用，在胃癌中表達(dá)水平上調(diào)，是胃癌的重要分子標(biāo)志物。

FN1是一種多功能異二聚體糖蛋白，與宿主防御和轉(zhuǎn)移相關(guān)，能夠維持基底膜的穩(wěn)定性，參與乳腺癌、鼻咽癌等多種疾病的發(fā)生與發(fā)展[14-15]。有研究[16]表明FN1被用于檢測(cè)EMT標(biāo)記物，還是頭部頸鱗狀細(xì)胞放射抗性的潛在生物標(biāo)志物；也有研究[17]表明FN1通過(guò)激活MMP2/MMP9(EMT通路)促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖；同時(shí)在腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、肺癌、食管癌中均呈高表達(dá)，與預(yù)后顯著相關(guān)。本研究中，F(xiàn)N1在胃癌組織中呈高表達(dá)，其表達(dá)量與組織分化、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，說(shuō)明FN1參與胃癌的發(fā)生與發(fā)展。FN1低表達(dá)組的3年生存率為77.55%，高于FN1高表達(dá)組的47.83%，說(shuō)明FN1表達(dá)量與胃癌患者預(yù)后相關(guān)。FN1與細(xì)胞黏附、細(xì)胞骨架蛋白調(diào)節(jié)有關(guān)，能通過(guò)調(diào)節(jié)A431-Ⅲ細(xì)胞中VEGF通路、PI-3K/Akt2通路，進(jìn)而參與腫瘤的信號(hào)通路的調(diào)控[18]。孫陽(yáng)等[19]研究表明FN1高表達(dá)是胃癌預(yù)后不良的因素，F(xiàn)N1使得腫瘤細(xì)胞具有運(yùn)動(dòng)性，使其具有侵襲及轉(zhuǎn)移能力。

綜上，CAP2與FN1在胃癌組織中表達(dá)水平均較高，其表達(dá)量與組織分化、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，參與腫瘤的進(jìn)展，較高水平的CAP2與FN1表達(dá)會(huì)影響患者的生存情況，CAP2、FN1可作為腫瘤治療的藥物靶點(diǎn)。